The invention discloses a preparation method comprising a plurality of complex new COCs composite structure, the use of suction or dissection, cumulus oocyte complexes obtained from ovarian follicles; cumulus oocyte complexes as the basic material, using paraffin embedded, the cumulus oocyte complex sucked into the EP tube, with a soft and hard wax wax immersion, suction injection embedding box, embedding. The invention uses paraffin embedded mode, constructs a new COCs contains more than one complex composite structure; combined traditional paraffin section technology for cell detection, improved the traditional immunohistochemistry staining technique process, simplify the program and water complex, significantly shorten the detection time, improve the fixed the effect, effectively avoid the ovarian slice technology is not easy to cut to the follicle and oocyte losing problem; clear understanding of co expression of cumulus cells and oocytes in protein.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于免疫细胞化学与免疫组织化学
,尤其涉及一种包含多个复合体的新型COCs复合结构组织的制备方法。
技术介绍
哺乳动物有腔卵泡是动物发情期后出现的一种特定发育阶段卵泡。此时期卵泡内,卵母细胞外被多层卵丘细胞,仅以部分卵丘颗粒细胞与附着于卵泡内膜上的壁颗粒细胞相连,以卵丘-卵母细胞复合体(COCs)的特殊形态突出于卵泡腔内的卵泡液中。随着卵泡的持续发育与优势化,成熟卵泡破裂,将COCs排入输卵管。此复合结构进入输卵管以后,会停留在输卵管壶腹部等待受精。基于COCs的这一结构与功能特点特性,在有腔卵泡阶段将COCs从卵泡内取出,在适宜的体外环境内,能够将COCs成功培养至可受精的成熟阶段。在此结构中,卵丘细胞以间隙连接等方式与卵母细胞进行营养传递与信息交流。两者间的连接结构以及在此基础上进行的信息交流与功能互作是卵母细胞成熟的根本保障。故此,在保留COCs结构完整的基础上,探讨某未知蛋白或者某蛋白配体与受体在卵母细胞与卵丘细胞上的协同表达情况,对于深入了解其在此结构中可能的自分泌或者旁分泌模式,揭示卵泡发育与卵母细胞成熟机制,有重要的方法论意义。目前在细胞与组织中定性检测特定蛋白表达情况的常规技术,主要包括免疫细胞化学与免疫组织化学两类技术。但是上述技术在检测哺乳动物卵丘-卵母细胞复合体(COCs)中的蛋白表达时存在显著缺陷,现分述如下:1.免疫细胞化学技术:这是一种在细胞水平上检测特定蛋白表达的技术。COCs是一类由多层卵丘细胞与一层均质透明带包被卵母细胞的复合结构,在常规实验条件下,一抗与带标记基团二抗很难进入该复合结构的的深层卵丘或卵母 ...
【技术保护点】
一种包含多个复合体的新型COCs复合结构组织的制备方法,其特征在于,所述包含多个复合体的新型COCs复合结构组织的制备方法利用抽吸或者解剖法,从卵巢卵泡中获得卵丘‑卵母细胞复合体;以卵丘‑卵母细胞复合体为基本材料,采用石蜡包埋的方式,将卵丘‑卵母细胞复合体吸入到EP管中,经固定、水洗、脱水、透明与浸蜡步骤,进行包埋;构建了一种包含多个复合体的新型卵丘‑卵母细胞复合体复合结构组织。
【技术特征摘要】
1.一种包含多个复合体的新型COCs复合结构组织的制备方法,其特征在于,所述包含多个复合体的新型COCs复合结构组织的制备方法利用抽吸或者解剖法,从卵巢卵泡中获得卵丘-卵母细胞复合体;以卵丘-卵母细胞复合体为基本材料,采用石蜡包埋的方式,将卵丘-卵母细胞复合体吸入到EP管中,经固定、水洗、脱水、透明与浸蜡步骤,进行包埋;构建了一种包含多个复合体的新型卵丘-卵母细胞复合体复合结构组织。2.如权利要求1所述的包含多个复合体的新型COCs复合结构组织的制备方法,其特征在于,所述包含多个复合体的新型COCs复合结构组织的制备方法具体包括以下步骤:步骤一,利用抽吸或者解剖法,从卵巢卵泡中获得卵丘-卵母细胞复合体;步骤二,将卵丘-卵母细胞复合体置于多聚甲醛溶液中固定;步骤三,将卵丘-卵母细胞复合体在50%酒精与无水乙醇中脱水;步骤四,将卵丘-卵母细胞复合体在溶液过渡后,转入二甲苯液中透明;溶液为二甲苯+无水乙醇1:1;步骤五,将卵丘-卵母细胞复合体吸入到1.5mlEP管中,在熔蜡箱内,用软蜡与硬蜡浸入;吸出注入1CM见方的包埋箱,进行包埋;步骤六,将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,贴到载玻片上,放恒温箱中烘干;步骤七,用二甲苯脱蜡;100%乙醇孵育;步骤八,滴加5%二抗来源封闭血清,湿盒内室温封闭30分钟;一抗湿盒内4℃冰箱过夜孵育;二抗于暗盒室温孵育1h后,漂洗;步骤九,封片后用荧光显微镜...
【专利技术属性】
技术研发人员:李海军,安阳,于泊洋,王秀梅,杜晨光,曹贵方,
申请(专利权)人:内蒙古农业大学,安阳,于泊洋,
类型:发明
国别省市:内蒙古;15
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