一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，包括DMEM培养基；还包括：羟乙基淀粉3～3.5g/L，硫辛酸30～38mg/L，碳酸氢钾0.5～0.6g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.3～0.6μg/L，透明质酸2～5μg/L，牛磺酸5～8μg/L，胰岛素样生长因子0.9～1.2g/L，重组人胰岛素0.3～0.6g/L，胎盘生长因子15～30μg/L，血小板衍生生长因子20～30mg/L，谷胱甘肽60～90mg/L，维生素40～80mg/L，植物提取物80～120mg/L。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及干细胞培养基
，尤其涉及一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基。
技术介绍
现有技术中的亚全能干细胞培养基往往采用胎牛血清，由于使用动物源的胎牛血清，导致干细胞培养基中掺入非人源物质，造成残留或者污染，而且现有的亚全能干细胞培养基存在细胞贴壁性差，细胞增殖速度不够理想等问题。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，细胞贴壁性好，增殖速度快，提高培养基的抗病原微生物作用，同时无动物源成分，不会造成残留或者污染，降低了培养基成本。本专利技术提出的一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，包括DMEM培养基，还包括：羟乙基淀粉3～3.5g/L，硫辛酸30～38mg/L，碳酸氢钾0.5～0.6g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.3～0.6μg/L，透明质酸2～5μg/L，牛磺酸5～8μg/L，胰岛素样生长因子0.9～1.2g/L，重组人胰岛素0.3～0.6g/L，胎盘生长因子15～30μg/L，血小板衍生生长因子20～30mg/L，谷胱甘肽60～90mg/L，维生素40～80mg/L，植物提取物80～120mg/L。优选地，羟乙基淀粉、硫辛酸、碳酸氢钾、二乙胺四乙酸钠盐、透明质酸的浓度比为3.2×106～3.4×106：3.2×104～3.6×104：5.2×105～5.8×105：0.4～0.5：3～4。优选地，胰岛素样生长因子、重组人胰岛素、胎盘生长因子、血小板衍生生长因子、谷胱甘肽的浓度比为1×106～1.1×106：4×105～5×105：20～25：2.3×104～2.7×104：7×104～8×104。优选地，还包括：羟乙基淀粉3.2～3.4g/L，硫辛酸32～36mg/L，碳酸氢钾0.52～0.58g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.4～0.5μg/L，透明质酸3～4μg/L，牛磺酸6～7μg/L，胰岛素样生长因子1～1.1g/L，重组人胰岛素0.4～0.5g/L，胎盘生长因子20～25μg/L，血小板衍生生长因子23～27mg/L，谷胱甘肽70～80mg/L，维生素50～70mg/L，植物提取物90～110mg/L。优选地，维生素按重量份包括：维生素C 12～14份，维生素B族15～17份，辅酶Q10 3～5份，维生素E 6～8份。优选地，维生素B族为硫胺素、核黄素、烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸、生物素中的一种或两种以上组合物。优选地，植物提取物按重量份包括：蒲公英甾醇2～4份，茶多酚4～6份，茯苓多糖12～14份，黄芪多糖18～20份，党参多糖13～15份。本专利技术采用DMEM培养基、羟乙基淀粉、硫辛酸、透明质酸、牛磺酸、胰岛素样生长因子、重组人胰岛素、胎盘生长因子、血小板衍生生长因子、谷胱甘肽、维生素相互配合，能滋养亚全能干细胞，促进亚全能干细胞保持细胞的活性；其中DMEM培养基、羟乙基淀粉、硫辛酸、胰岛素样生长因子、重组人胰岛素、胎盘生长因子、血小板衍生生长因子、谷胱甘肽、维生素为亚全能干细胞提供营养成分；而硫辛酸、透明质酸、牛磺酸、谷胱甘肽和维生素相互配合，可以清理细胞内自由基，保护许多蛋白质和酶等分子中的巯基，有利于酶活性的发挥，并且能恢复已被破坏的酶分子中-SH基的活性功能，使酶重新恢复活性，降低细胞发生凋亡的概率；碳酸氢钾、透明质酸、牛磺酸、胰岛素样生长因子、重组人胰岛素、胎盘生长因子、血小板衍生生长因子相互配合，维持细胞的渗透平衡；胰岛素样生长因子、重组人胰岛素、胎盘生长因子、血小板衍生生长因子相互配合，能使亚全能干细胞在增殖的过程中进行缓慢修复，维持细胞活性；同时透明质酸、牛磺酸、谷胱甘肽和植物提取物相互配合，可以部分替代特殊抗体因子，增强细胞的新陈代谢，促进亚全能干细胞快速大量增殖，降低了培养基成本；而采用蒲公英甾醇、茶多酚、茯苓多糖、黄芪多糖、党参多糖作为植物提取物，不仅提高培养基的抗病原微生物作用，提高干细胞的存活率，而且进一步提高亚全能干细胞的增殖速度，提高亚全能干细胞的活性。本专利技术培养亚全能干细胞，使亚全能干细胞的贴壁率达到92％以上，死细胞较少，大大提高了细胞的数量。本专利技术培养亚全能干细胞生长至平台期需要49～52h，而现有技术中的培养基最快需要54h，常规干细胞培养基则需要至少66h，由此可知本专利技术能够提高亚全能干细胞的生长速率。同时本专利技术经流式细胞表型检测，发现本专利技术所得亚全能干细胞与常规培养基所得亚全能干细胞的细胞表型无统计学差异。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1本专利技术提出的一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，包括DMEM培养基；还包括：羟乙基淀粉3g/L，硫辛酸38mg/L，碳酸氢钾0.5g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.6μg/L，透明质酸2μg/L，牛磺酸8μg/L，胰岛素样生长因子0.9g/L，重组人胰岛素0.6g/L，胎盘生长因子15μg/L，血小板衍生生长因子30mg/L，谷胱甘肽60mg/L，维生素80mg/L，植物提取物80mg/L。实施例2本专利技术提出的一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，包括DMEM培养基；还包括：羟乙基淀粉3.5g/L，硫辛酸30mg/L，碳酸氢钾0.6g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.3μg/L，透明质酸5μg/L，牛磺酸5μg/L，胰岛素样生长因子1.2g/L，重组人胰岛素0.3g/L，胎盘生长因子30μg/L，血小板衍生生长因子20mg/L，谷胱甘肽90mg/L，维生素40mg/L，植物提取物120mg/L。维生素按重量份包括：维生素C 12份，维生素B族17份，辅酶Q10 3份，维生素E 8份。维生素B族为硫胺素、核黄素的组合物。实施例3本专利技术提出的一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，包括DMEM培养基；还包括：羟乙基淀粉3.2g/L，硫辛酸36mg/L，碳酸氢钾0.52g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.5μg/L，透明质酸3μg/L，牛磺酸7μg/L，胰岛素样生长因子1g/L，重组人胰岛素0.5g/L，胎盘生长因子20μg/L，血小板衍生生长因子27mg/L，谷胱甘肽70mg/L，维生素70mg/L，植物提取物90mg/L。维生素按重量份包括：维生素C 14份，生物素15份，辅酶Q10 5份，维生素E 6份。植物提取物按重量份包括：蒲公英甾醇2份，茶多酚6份，茯苓多糖12份，黄芪多糖20份，党参多糖13份。实施例4本专利技术提出的一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，包括DMEM培养基；还包括：羟乙基淀粉3.4g/L，硫辛酸32mg/L，碳酸氢钾0.58g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.4μg/L，透明质酸4μg/L，牛磺酸6μg/L，胰岛素样生长因子1.1g/L，重组人胰岛素0.4g/L，胎盘生长因子25μg/L，血小板衍生生长因子23mg/L，谷胱甘肽80mg/L，维生素50mg/L，植物提取物110mg/L。维生素按重量份包括：维生素C 13.5份，维生素B族15.5份，辅酶Q10 4.5份，维生素E 7.5份。维生素B族为烟酸、泛酸、吡哆醇、氰钴胺、叶酸的组合物。植物提取物按重本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，包括DMEM培养基，其特征在于，还包括：羟乙基淀粉3～3.5g/L，硫辛酸30～38mg/L，碳酸氢钾0.5～0.6g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.3～0.6μg/L，透明质酸2～5μg/L，牛磺酸5～8μg/L，胰岛素样生长因子0.9～1.2g/L，重组人胰岛素0.3～0.6g/L，胎盘生长因子15～30μg/L，血小板衍生生长因子20～30mg/L，谷胱甘肽60～90mg/L，维生素40～80mg/L，植物提取物80～120mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，包括DMEM培养基，其特征在于，还包括：羟乙基淀粉3～3.5g/L，硫辛酸30～38mg/L，碳酸氢钾0.5～0.6g/L，二乙胺四乙酸钠盐0.3～0.6μg/L，透明质酸2～5μg/L，牛磺酸5～8μg/L，胰岛素样生长因子0.9～1.2g/L，重组人胰岛素0.3～0.6g/L，胎盘生长因子15～30μg/L，血小板衍生生长因子20～30mg/L，谷胱甘肽60～90mg/L，维生素40～80mg/L，植物提取物80～120mg/L。2.根据权利要求1所述提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，其特征在于，羟乙基淀粉、硫辛酸、碳酸氢钾、二乙胺四乙酸钠盐、透明质酸的浓度比为3.2×106～3.4×106：3.2×104～3.6×104：5.2×105～5.8×105：0.4～0.5：3～4。3.根据权利要求1或2所述提高亚全能干细胞增殖速度的培养基，其特征在于，胰岛素样生长因子、重组人胰岛素、胎盘生长因子、血小板衍生生长因子、谷胱甘肽的浓度比为1×106～1.1×106：4×105～5×105：20～25：2.3×104～2.7×104：7×104～8×104。4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：张正亮，
申请(专利权)人：安徽惠恩生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34