一种灵芝多糖硫酸化衍生物和抗炎用途制造技术

本发明专利技术涉及一种由灵芝β‑葡聚糖与磺化试剂经硫酸酯化反应获得的灵芝多糖硫酸化衍生物及其制备方法和在抗炎症反应中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物领域，涉及药物化学和药理领域，具体涉及一种由灵芝β-葡聚糖与磺化试剂经硫酸酯化反应获得的灵芝多糖硫酸化衍生物及其制备方法和在抗炎症反应中的用途。
技术介绍
炎性反应是先天免疫系统为移除有害刺激或病源体及促进修复的保护措施，是生物体对病源体的反应之一。通常情况下，炎症是有益的，是人体的自动的防御反应，但是有的时候，炎症可以引起人体自身免疫系统的过敏，进而攻击自身的组织及细胞、如类风湿性关节炎和红班狼疮症等免疫系统过敏病症。长期发炎亦可引起一系列疾病，如花粉症、牙周炎、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎，甚至癌症(如胆囊癌)，因此炎性反应在正常情况下必须受到生物体紧密监控。在炎症反应的初始阶段白细胞必须粘附到血管内壁，进而穿过血管壁进入受损或受侵害的组织，引起炎症反应。而白细胞与血管内壁粘附的第一个步骤就是位于白细胞膜上的细胞膜蛋白L-selectin与血管内皮细胞膜上的L-selectin配位体，一种具有唾液酸化路易斯寡糖(s-Le，siaglyl-Lewis)或类似结构的分子结合。由于白细胞与内皮细胞的识别和结合必须依靠L-selectin和它的配位体结合作为介导，抑制L-selectin与它的配位体的结合成为抑制炎症反应的有效途径。另外，人体先天免疫补体途径，在被激活的状态中，能够产生大量的炎症因子C3a,C4a和C5a，也叫做过敏毒素(anaphylatoxins)，能够直接激发肥大细胞(mast cells)脱粒(degranulation)导致组织胺的释放，增加血管渗透性和平滑肌的收缩。C3a,C4a和C5a也具有化学驱化作用，介导淋巴细胞穿过血管入侵组织，诱导炎症反应。对免疫反应过敏的慢性炎症疾病，抑制补体系统被激活，阻止C3a，C4a和C5a过敏毒素的产生，是又一抗炎的有效措施。IFN-γ和TNF-α两者都是参与炎症反应的重要细胞因子，能够抑制他们的活性亦能够降低炎症反应的强度。灵芝(Ganoderma lucidum)是一种传统药用真菌，具有扶正固本、滋补强壮、延年益寿的作用。灵芝多糖是其主要活性成分之一，在免疫调节和抗肿瘤活性方面效果显著。本专利技术针对纯化出的灵芝多糖进行了硫酸化结构修饰，得到硫酸酯化了的灵芝多糖。经研究此硫酸酯化了的灵芝多糖具有很强的抗炎作用，而对免疫细胞活性没有影响，这些结果对新的抗炎药物的研发提供了基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是在通过简单方法大量获得灵芝纯多糖的基础上，提供一种由灵芝多糖与三氧化硫-吡啶试剂经硫酸酯化反应获得的灵芝硫酸化多糖及其制备方法和在抗炎症反应方面的用途，用以开发一种新的抗炎药物。本专利技术提供一种灵芝多糖的硫酸酯化衍生物，其中灵芝多糖的结构式如下：其重均分子量为2.75×106g/mol。经结构修饰后所得的灵芝多糖硫酸化衍生物GLPss58重均分子量约为1.18×105g/mol，取代度为0.52-0.66。本专利技术的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备抗炎症反应的组合物上应用。本专利技术的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备抑制补体系统的组合物上应用。本专利技术的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备抑制TNF-α和IFN-γ活性的组合物上应用。本专利技术的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备：药物、保健品、或功能性食品的应用,赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂等。本专利技术的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备：其特征为通过口服或注射形式使用。灵芝硫酸化多糖的制备方法：1)灵芝多糖GLP的制备：以赤芝子实体为原料，粉碎后经沸水提取1-2次，合并提取液减压浓缩至料液比为1:5后冷却至室温，再加入乙醇至其终浓度为20-30％，静置过夜，离心分离得沉淀，经冷冻干燥后得灵芝多糖GLP。2)灵芝多糖硫酸化衍生物GLPss58的制备：经分子筛处理的吡啶试剂与三氧化硫-吡啶络合物按照体积质量比为3-4：1(mL/g)的比例在装有冷凝管和搅拌装置的三颈烧瓶中充分混合形成酯化试剂。在吡啶试剂中加入灵芝多糖GLP样品，使其浓度为5-10mg/mL，充分搅拌后与酯化试剂分别按照1:1、2:1、3:1、4:1的比例进行混合，充分搅拌，在反应温度分别为30℃、50℃、60℃、80℃的条件下反应4-10h。反应完毕后用4-5mol/L的NaOH调节pH值为中性，离心取上清用蒸馏水兑水透析48h，袋内液体50℃以下条件下减压浓缩，加入3倍体积无水乙醇，静置过夜后离心，收集沉淀干燥后得到硫酸酯化产物。根据取代度和活性研究，获得硫酸酯化产物的制备条件为：样品液与酯化试剂按照1-2:1的比例进行混合，充分搅拌，在反应温度分别为60-80℃的条件下反应8-10h，按照上述步骤处理后得到硫酸酯化产物GLPss58，用于抗炎活性的研究。红外光谱分析结果显示，与灵芝多糖GLP相比，硫酸化后样品GLPss58的图谱中出现了1220cm-1左右的S＝O伸缩振动和801cm-1左右的C-O-S伸缩振动的特征峰，说明硫酸根已经与灵芝多糖分子结合成酯。经过测定分析，GLPss58中硫酸根基团的含量为7.84-9.71％，硫酸根取代度为0.52-0.66。药理实验证明，GLPss58能够在很低的剂量下抑制血液淋巴细胞上的L-selectin与其位于血管内皮细胞膜上的配位体相结合，从而能够抑制人体血液淋巴细胞在炎症发生的起始阶段在血管壁上的粘附，阻止白细胞穿过血管壁进入组织引起炎症反应。其抑制淋巴细胞结合L-selectin的IC50是13.5μg/mL，通过抑制L-selectin单克隆抗体与L-selectin的结合，揭示GLPss58抑制人血淋巴细胞侵润组织是通过抑制L-selectin来实现的。试验结果还证实，GLPss58能够在10μg/mL剂量下几乎完全抑制补体系统的经典途径(classical pathway)和凝集素途径，在100μg/mL剂量下则可完全抑制补体系统的替代途径，从而极其有效地阻止炎症因子C3a，C4a和C5a的产生。另外，GLPss58在100μg/mL剂量下能够与引起炎症的化学趋化因子TNF-α和IFN-γ结合，有效地阻止TNF-α和IFN-γ与它们的受体相结合，从而抑制它们诱导炎症反应的活性。由此可见经硫酸化修饰的衍生物GLPss58在炎症反应过程中的多方面发挥抑制作用，而对血液免疫细胞几乎没有刺激作用，也没有细胞毒的作用。因而有望开发成抗炎症新药。附图说明：图1硫酸化前样品的红外分析图谱图2硫酸化后样品的红外分析图谱图3.GLPss58和人外周血淋巴细胞上的L-selectin特异性的结合图4.GLPss58对小鼠巨噬细胞，淋巴细胞及人外周血淋巴细胞的生长和增殖的影响本专利技术包括而不限于以下具体实施方式：具体实施方式实施例1灵芝多糖的制备取赤芝子实体粉碎后过10目筛，称取1kg加入20L蒸馏水中，常温浸泡60分钟，加热至沸腾，保持微沸120分钟，过滤。滤渣再加入20L蒸馏水煮沸提取90-120min，过滤后合并滤液。滤液先用100-200目的滤网粗滤，减压浓缩至5L后，再用离心机以8000rpm转速离心20min，向上清液中缓慢加入无水乙醇，边加边搅拌，至乙醇含量达到25％，室温静置7小时，8000rpm离心收集沉淀，加水溶解挥干乙醇后冷冻干燥得到8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种灵芝多糖的硫酸酯化衍生物，其中灵芝多糖的结构式如下：其重均分子量为2.75×106g/mol；经结构修饰后所得的灵芝多糖硫酸化衍生物GLPss58重均分子量约为1.18×105g/mol，取代度为0.52‑0.66。

【技术特征摘要】
1.一种灵芝多糖的硫酸酯化衍生物，其中灵芝多糖的结构式如下：其重均分子量为2.75×106g/mol；经结构修饰后所得的灵芝多糖硫酸化衍生物GLPss58重均分子量约为1.18×105g/mol，取代度为0.52-0.66。2.根据权利要求1的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备抗炎症反应的组合物上应用。3.根据权利要求1的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备抑制补体系统的组合物上应用。4.根据权利要求1的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备抑制TNFα和IFNγ活性的组合物上应用。5.根据权利要求1的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备药物、保健品、或功能性食品的应用,赋形剂或载体为制药或食品领域中常用的赋形剂或载体，如稀释剂，崩解剂，润滑剂。6.根据权利要求1的灵芝多糖硫酸化衍生物在制备药物、保健品的应用：其特征为通过口服或注射形式使用。7.根据权利要求1的一种灵芝多糖的硫酸酯化衍生物的制备方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：张劲松，刘艳芳，樊华，杨焱，吴迪，唐传红，汪雯翰，周帅，颜梦秋，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海;31