The invention discloses a bean pod mottle virus LAMP primer, a kit and a detection method, wherein the primer comprises a forward outer primer F3, a reverse outer primer B3, a forward inner primer FIP, and a reverse internal primer BIP. The purpose of the invention is to overcome the deficiencies in the existing technology, providing a vegetable bean pod mottle virus LAMP primer; another object of the invention is to provide a kit containing the primer; another object of the invention is to provide a method of using the kit for detection of bean pod mottle virus with this, detection method: primer specificity, the equipment is simple, rapid, high sensitivity, simple operation, closed tube detection, the results can direct interpretation.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种菜豆荚斑驳病毒LAMP引物、本专利技术还涉及一种包括上述引物的试剂盒;本专利技术还涉及一种采用上述试剂盒检测菜豆荚斑驳病毒的方法。
技术介绍
菜豆荚斑驳病毒5’TTGACACCAATAACAAAATCAC3’,BPMV是我国进境检疫性有害生物,属于豇豆花叶病毒科Comoviridae、豇豆花叶病毒属Comovirus,主要传播介体为菜豆叶甲Cerotoma trifurcata,在南美洲、北美洲及亚洲都有广泛的分布,大豆被其侵染后,叶片斑驳、皱缩、荚和种子斑驳,甚至坏死、植株死亡,还能延迟大豆茎杆成熟,引起“绿茎”现象,可以造成在3%~52.4%的损失,如果和大豆花叶病毒复合侵染,产量损失可达66%,且种子的斑驳率上升,影响产品品质。BPMV粒子为直径28nm的等轴对称二十面体,无包膜,二分体基因组,由两条正链RNA-1和RNA-2组成,其中RNA-2编码外壳蛋白,由大、小两种亚基组成,大亚基有374个氨基酸,分子量为41KD,小亚基有198个氨基酸,分子量为22KD。近年来我国从国外尤其是美国和南美洲进境的大豆数量逐年增加,而BPMV可以通过大豆种子进行远距离传播,虽然BPMV的种传率很低,但不影响该病毒造成大豆等作物大面积危害,因此加强进境大豆的口岸检测,是防止该病毒传入我国的有效措施。目前植物病毒的检测方法主要有生物学、血清学和分子生物学三种,生物学方法就是用病毒指示植物来检测病毒的存在与否,一般需要7-10天;血清学方法是根据抗原抗体的特异性结合来检测病毒,一般只需要4-6小时左右,但是它需要特异性的抗血清,而且检测灵敏度不高, ...
【技术保护点】
一种菜豆荚斑驳病毒LAMP引物,其特征在于包括:正向外引物F3:5’CAGGAAAAAGTTGTGCTGAA3’;反向外引物B3:5’GCACATATTTTCTATGATCGTCA3’;正向内引物FIP:5’CAGCAAGGTTGTTGCAGGAC‑TTTCACAAGAGGAGTTTCTCAC3’;其中所述正向内引物FIP包含F1c和F2:F1c:5’CAGCAAGGTTGTTGCAGGAC3’;F2:5’TTTCACAAGAGGAGTTTCTCAC3’;反向内引物BIP:5’TGGGTGCCCATATTTGTATGC‑TTGACACCAATAACAAAATCAC3’;其中所述反向内引物BIP包括含B1c和B2:其中B1c:5’TGGGTGCCCATATTTGTATGC3’;B2:5’TTGACACCAATAACAAAATCAC3’。
【技术特征摘要】
1.一种菜豆荚斑驳病毒LAMP引物,其特征在于包括:正向外引物F3:5’CAGGAAAAAGTTGTGCTGAA3’;反向外引物B3:5’GCACATATTTTCTATGATCGTCA3’;正向内引物FIP:5’CAGCAAGGTTGTTGCAGGAC-TTTCACAAGAGGAGTTTCTCAC3’;其中所述正向内引物FIP包含F1c和F2:F1c:5’CAGCAAGGTTGTTGCAGGAC3’;F2:5’TTTCACAAGAGGAGTTTCTCAC3’;反向内引物BIP:5’TGGGTGCCCATATTTGTATGC-TTGACACCAATAACAAAATCAC3’;其中所述反向内引物BIP包括含B1c和B2:其中B1c:5’TGGGTGCCCATATTTGTATGC3’;B2:5’TTGACACCAATAACAAAATCAC3’。2.一种菜豆荚斑驳病毒LAMP试剂盒,其特征在于该试剂盒包括有:其中所述引物包括:正向外引物F3:5’CAGGAAAAAGTTGTGCTGAA3’;反向外引物B3:5’GCACATATTTTCTATGATCGTCA3’;正向内引物FIP:5’CAGCAAGGTTGTTGCAGGAC-TTTCACAAGAGGAGTTTCTCAC3’;其中所述正向内引物FIP包含F1c和F2:F1c:5’CAGCAAGGTTGTTGCAGGAC3’;F2:5’TTTCACAAGAGGAGTTTCTCAC3’;反向内引物BIP:5’TGGGTGCCCATATTTGTATGC-TTGACACCAATAACAAAATCAC3’;其中所述反向内引物BIP包括含B1c和B2:其中B1c:5’TGGGTGCCCATATTTGTATGC3’;B2:5’TTGACACCAATAACAAAATCAC3’;其中该试剂盒的产品规格:40次。3.根据权利要求2所述的菜豆荚斑驳病毒LAMP试剂盒,其特征在于所述的LAMP反应液缓冲液由以下组分组成:4.根据权利要求2所述的菜豆荚斑驳病毒LAMP试剂盒,其特征在于所述荧光染料为钙黄绿素;所述酶溶液为Bst DNA聚合酶和AMV逆转录酶混合液。5.一种菜豆荚斑驳病毒LAMP检测方法,其特征在于包括以下步骤:A、提取样品RNA;B、建立LAMP反应体系:按检测所需的反应量从权利要...
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