驴的胚胎移植方法技术

本发明专利技术涉及一种驴的胚胎移植方法。为填补现有技术的空白，本驴的胚胎移植方法，包括下述步骤：供体的准备、发情调控、人工授精、放松宫颈、冲胚集卵、检胚、洗胚、移植等步骤，其中：通过为供体母驴排卵当天后的第9天，先肌肉注射氯前列醇钠注射液(PGF2α)0.2毫克；9小时后，将供体母驴引入保定架，在保定好的前提下，在驴的后海穴位注射利多卡因100毫克促使母驴子宫颈放松。使用本发明专利技术方法，每匹供体母驴可年产有效胚胎6‑10枚，获得鲜胚成功率可达67％，本发明专利技术不需要手术，极大地提高了供受体母驴的利用率，特别适合有繁殖障碍或者屡配流产的品种优良的母驴使用。

Embryo transfer method for donkey

The invention relates to a method for embryo transplantation of donkey. To fill the gaps in the existing technology, the method of embryo transfer of the donkey, which comprises the following steps: preparation, estrus regulation, donor artificial insemination, relax cervix, embryo egg collection, embryo, embryo transplantation, washing inspection and other steps, including: the donor when ninth days after ovulation and first, intramuscular injection of PG alcohol sodium injection (PGF2 alpha) 0.2 mg; 9 hours later, the donor mare introduced to Baoding in Baoding, under the premise of good, in Houhai point injection of lidocaine 100 mg and donkey prompted cervical relaxation. Using the method of the invention, each piece can produce effective donor mare embryonic 6 10, the success rate of up to 67% fresh embryo, the invention does not need surgery, greatly improving the utilization rate of the receptor for mare reproductive disorders, especially for female or with repeated abortion with excellent varieties.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种驴的胚胎移植方法。
技术介绍
胚胎移植技术是一项将良种母驴体内早期胚胎移植到同种生理状态相同的受体母驴体内，使之继续发育成个体的技术。利用胚胎移植，可以帮助遗传特性优良的母驴进行快速繁殖，较快地扩大良种畜群。母驴在自然繁殖条件下，通常一年产1胎，一生生产优良后代不超过20头，繁殖效率很低。采用胚胎移植技术则使优良母驴免去了冗长的妊娠期，胚胎取出后不久即可再次发情、配种和受精，从而能在一定时间内产生较多的后代。目前在许多畜牧业发达国家胚胎移植均已进入产业化发展阶段。我国的胚胎移植技术已经在牛、羊、马等畜种上取得成功。随着当前国内人们保健意识的增强，对阿胶、驴肉的需求日益增加，驴养殖呈现良好发展趋势，对优秀驴个体的需求越显增加，但驴的子宫、卵巢结构有其独特性，因此导致驴的生理特点及排卵规律有别于其他动物。虽然牛羊等胚胎移植技术已经成熟化，但并不适用于母驴的生殖特性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是如何填补现有技术的上述空白，提供一种驴的胚胎移植方法。为解决上述技术问题，本驴的胚胎移植方法，包括下述步骤：一.供体的准备：选择遗传性能稳定、谱系清晰、没有流产史、年龄在2.5岁以上，质检生殖器官正常，无(子宫炎症、卵巢囊肿等)生殖疾病的母驴作为供体母驴；选择质检生殖器官正常，无(子宫炎症、卵巢囊肿等)生殖疾病的母驴作为受体母驴；二.发情调控：在供体母驴和受体母驴黄体生成的第6-8天肌肉注射氯前列醇钠注射液(PGF2α)，使用剂量为0.2mg/头；三.人工授精：在注射氯前列醇钠注射液后的第4-5天，采用超声波B超仪观察供体母驴卵泡发育情况，当发现卵泡直径达到3.4-3.5cm时，给供体母驴注射3000单位的促黄体素或绒毛膜促性腺素，使供体母驴集中时间进行排卵，降低卵泡发育中闭锁的几率，并在排卵前10小时至排卵后6小时内，进行人工授精，具体方法包括下述步骤：①.将供体母驴拉进保定架、拴尾巴，然后掏粪，再清洗，第一遍用清水冲掉肛门、外阴周围的粪便和脏东西；第二遍用洗洁精；第三遍用碘伏水；第四遍用清水；最后用纸摁干净，注意：每一遍之间都要彻底冲洗干净，手每一遍也要冲洗干净；②.用驴用输精枪实施两次人工输精，输精部位为子宫角，每次鲜精输精剂量5mL，含有效精子数＞3×107，并在母驴右屁股做上标记；③.第二天用超声波B超仪观察已授精供体母驴排卵的情况，选出已排卵的供体母驴，并记录该供体母驴的排卵当天日期；四.放松宫颈：供体母驴排卵当天后的第9天，先肌肉注射氯前列醇钠注射液(PGF2α)0.2毫克；9小时后，将供体母驴引入保定架，在保定好的前提下，在驴的后海穴位注射利多卡因100毫克，在清洗完外阴后，通过超声波B超仪观察供体母驴子宫颈放松情况，供体母驴子宫颈直径打开程度达到该供体母驴关闭时子宫颈的1.5倍即可，若供体母驴的子宫颈放松不足，可以再注射50毫克利多卡因即可。注意：追量不可太多，以免引起漏冲胚液。(驴的子宫颈较马的更细更长，供体母驴子宫颈放松小，进管难度大，放松太大，容易发生漏掉冲胚液,经研究实践采用上述母驴子宫颈放松法，母驴子宫颈放松程度适中，效果好。)五.冲胚集卵：然后使用冲胚装置进行冲胚，获得包含胚胎和冲胚液的胚胎混合液，所述冲胚装置包括Y型管、带气囊导管、夹子和冲胚瓶，Y型管的一端连接所述带气囊导管，先通过Y型管向供体母驴子宫内灌注冲胚液，然后通过Y型管向集卵容器内输送胚胎或混有胚胎的混合液；Y型管的另一端带有夹子，作为集卵控制开关，连接冲胚瓶，具体方法包括下述步骤：①.将供体母驴拉进保定架、拴尾巴，然后掏粪，再清洗，第一遍用清水冲掉肛门、外阴周围的粪便和脏东西；第二遍用洗洁精；第三遍用碘伏水；第四遍用清水；最后用纸摁干净，注意：每一遍之间都要彻底冲洗干净，手每一遍也要冲洗干净；②.打麻醉药：取A药液0.15毫升+9.85毫升生理盐水，静脉注射；清洗完外阴后，取A药液0.15毫升+B药液0.2毫升+9.65毫升生理盐水静脉注射，五分钟后开始冲胚；注射麻醉药后注意观察供体母驴，出现麻醉过量引起的呼吸异常、心跳异常以及耷拉脑袋的情况时及时抢救；A药：浓度为10mg/ml的盐酸右美托咪定注射液(domidine)，根据体重，每100千克使用0.1毫升；B药：规格：浓度为10mg/ml的酒石酸布托啡诺(dolorex)，根据体重每100千克使用0.1毫升；③.麻醉5分钟后，由助手打开Y型管的袋口，冲胚员带无菌手套拿出Y型管，助手往带气囊导管打气，看带气囊导管有无破损，打气注意把接口处接好，用夹子夹好Y型管，注入冲胚液，再由冲胚员把带气囊导管伸入供体母驴的子宫颈，放一点水，然后充气，卡住子宫颈口，取装有700毫升冲胚液的冲胚瓶，站着通过冲胚装置向供体母驴子宫内注冲胚液，一瓶冲胚液放完后，将空瓶取下，再换另一瓶，依次换5瓶；然后放气，拿出带气囊导管，最后液体收集至集卵容器；六.检胚步骤：将含有胚胎的胚胎混合液经过胚胎过滤装置过滤，在无菌操作台内的体视恒温显微镜下按照从左到右、从上到下的“Z”路线逐格进行检查，直至找到适合移植的胚胎；七.洗胚：将检胚步骤找到的胚胎放入装有胚胎营养液的多孔培养板中，采用注射器吸取胚胎保存液，体视恒温显微镜下逐孔洗胚，采用“多孔稀释洗配法”，胚胎共洗8-10次，洗胚的多孔培养板优选为8孔培养板，且体视显微镜下逐孔洗胚，共洗8-10次；八.胚胎质检：选取发育正常，胚龄与发育期相吻合，卵裂球轮廓清晰，透明度适中，细胞密度大，卵裂球均匀的1、2级胚胎作为可移植胚胎；九.装胚步骤：在无菌操作台内的体视显微镜下，采用胚胎装管器，将胚胎按照胚胎营养液-气体-胚胎营养液-胚胎-胚胎营养液-气体-胚胎营养液的顺序装入胚胎细管内备用；十.移植步骤：将装好胚胎的移植管放入胚胎移植装置内，确保胚胎移植管及胚胎移植装置不受污染，在受体母驴中挑选子宫环境适应移植的母驴作为受体，清洗并擦干受体母驴外阴后，将胚胎移植装置送入母驴子宫内，插入胚胎移植装置内芯，将胚胎送入受体母驴子宫，具体方法包括下述步骤：①.将受体母驴拉进保定架、拴尾巴，然后掏粪，再清洗，第一遍用清水冲掉肛门、外阴周围的粪便和脏东西；第二遍用洗洁精；第三遍用碘伏水；第四遍用清水；最后用纸摁干净，注意：每一遍之间都要彻底冲洗干净，手每一遍也要冲洗干净；②.移植胚胎前15分钟之前，口服黄体酮有效含量150毫克，移胚员准备好胚胎后，助手一在驴的前方保定母驴，拧着耳朵；助手二在后边拽着尾巴；助手三准备无菌手套，并用剪刀剪掉最前方的手掌那块；移胚员手进入阴道口后，由助手二扶着胚胎移植装置小蓝色轱辘前一厘米位置；准备直肠润滑剂，移胚员手持胚胎移植装置，伸入直肠，将胚胎打进受体母驴的子宫，然后将受体母驴从保定架放出，结束移胚，如果受体母驴不安静，要注射麻醉药；如果打麻醉药了，一定要过半个小时放驴，避免麻醉药后采食引起窒息死亡，③.输胚后，受体母驴要连续7天口服黄体酮有效含量150毫克，7天后经超声波B超仪检查，受孕的受体母驴，连续口服黄体酮一个月，没有受孕的受体母驴经发情调控后，回至第十步。如此设计，采用人工干预的方式对供受体母驴进行发情调控、排卵调控。在卵泡达到特定大小后利用激素处理，可以降低卵泡发育中闭锁的几率，同时卵泡发生本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种驴的胚胎移植方法，包括下述步骤：一.供体的准备：选择遗传性能稳定、谱系清晰、没有流产史、年龄在2.5岁以上，质检生殖器官正常，无生殖疾病的母驴作为供体母驴；选择质检生殖器官正常，无生殖疾病的母驴作为受体母驴；二.发情调控：在供体母驴和受体母驴黄体生成的第6‑8天肌肉注射氯前列醇钠注射液，使用剂量为0.2mg/头；三.人工授精：在注射氯前列醇钠注射液后的第4‑5天，采用超声波B超仪观察供体母驴卵泡发育情况，当发现卵泡直径达到3.4‑3.5cm时，给供体母驴注射3000单位的促黄体素或绒毛膜促性腺素，使供体母驴集中时间进行排卵，降低卵泡发育中闭锁的几率，并在排卵前10小时至排卵后6小时内，进行人工授精，具体方法包括下述步骤：①.将供体母驴拉进保定架、拴尾巴，然后掏粪，再清洗，第一遍用清水冲掉肛门、外阴周围的粪便和脏东西；第二遍用洗洁精；第三遍用碘伏水；第四遍用清水；最后用纸摁干净，注意：每一遍之间都要彻底冲洗干净，手每一遍也要冲洗干净；②.用驴用输精枪实施两次人工输精，输精部位为子宫角，每次鲜精输精剂量5mL，含有效精子数＞3×107，并在母驴右屁股做上标记；③.第二天用超声波B超仪观察已授精供体母驴排卵的情况，选出已排卵的供体母驴，并记录该供体母驴的排卵当天日期；四.放松宫颈：供体母驴排卵当天后的第9天，先肌肉注射氯前列醇钠注射液0.2毫克；9小时后，将供体母驴引入保定架，在保定好的前提下， 在驴的后海穴位注射利多卡因100毫克，在清洗完外阴后，通过超声波B超仪观察供体母驴子宫颈放松情况，供体母驴子宫颈直径打开程度达到该供体母驴关闭时子宫颈的1.5倍即可，若供体母驴的子宫颈放松不足，可以再注射50毫克利多卡因即可。五.冲胚集卵：然后使用冲胚装置进行冲胚，获得包含胚胎和冲胚液的胚胎混合液，所述冲胚装置包括Y型管、带气囊导管、夹子和冲胚瓶，Y型管的一端连接所述带气囊导管，先通过Y型管向供体母驴子宫内灌注冲胚液，然后通过Y型管向集卵容器内输送胚胎或混有胚胎的混合液；Y型管的另一端带有夹子，作为集卵控制开关，连接冲胚瓶，具体方法包括下述步骤：①.将供体母驴拉进保定架、拴尾巴，然后掏粪，再清洗，第一遍用清水冲掉肛门、外阴周围的粪便和脏东西；第二遍用洗洁精；第三遍用碘伏水；第四遍用清水；最后用纸摁干净，注意：每一遍之间都要彻底冲洗干净，手每一遍也要冲洗干净；②.打麻醉药：取A药液0.15毫升+9.85毫升生理盐水，静脉注射；清洗完外阴后，取A药液0.15毫升+B药液0.2毫升+9.65毫升生理盐水静脉注射，五分钟后开始冲胚；注射麻醉药后注意观察供体母驴，出现麻醉过量引起的呼吸异常、心跳异常以及耷拉脑袋的情况时及时抢救；A药：浓度为10mg/ml的盐酸右美托咪定注射液，根据体重，每100千克使用0.1毫升；B药：规格：浓度为10mg/ml的酒石酸布托啡诺，根据体重每100千克使用0.1毫升；③.麻醉5分钟后，由助手打开Y型管的袋口，冲胚员带无菌手套拿出Y型管，助手往带气囊导管打气，看带气囊导管有无破损，打气注意把接口处接好，用夹子夹好Y型管，注入冲胚液，再由冲胚员把带气囊导管伸入供体母驴的子宫颈，放一点水，然后充气，卡住子宫颈口，取装有700毫升冲胚液的冲胚瓶，站着通过冲胚装置向供体母驴子宫内注冲胚液，一瓶冲胚液放完后，将空瓶取下，再换另一瓶，依次换5瓶；然后放气，拿出带气囊导管，最后液体收集至集卵容器；六.检胚步骤：将含有胚胎的胚胎混合液经过胚胎过滤装置过滤，在无菌操作台内的体视恒温显微镜下按照从左到右、从上到下的“Z”路线逐格进行检查，直至找到适合移植的胚胎；七.洗胚：将检胚步骤找到的胚胎放入装有胚胎营养液的多孔培养板中，采用注射器吸取胚胎保存液，体视恒温显微镜下逐孔洗胚，采用“多孔稀释洗配法”，胚胎共洗8‑10次，洗胚的多孔培养板优选为8孔培养板，且体视显微镜下逐孔洗胚，共洗8‑10次；八.胚胎质检：选取发育正常，胚龄与发育期相吻合，卵裂球轮廓清晰，透明度适中，细胞密度大，卵裂球均匀的1、2级胚胎作为可移植胚胎；九.装胚步骤：在无菌操作台内的体视显微镜下，采用胚胎装管器，将胚胎按照胚胎营养液‑气体‑胚胎营养液‑胚胎‑胚胎营养液‑气体‑胚胎营养液的顺序装入胚胎细管内备用；十.移植步骤：将装好胚胎的移植管放入胚胎移植装置内，确保胚胎移植管及胚胎移植装置不受污染，在受体母驴中挑选子宫环境适应移植的母驴作为受体，清洗并擦干受 体母驴外阴后，将胚胎移植装置送入母驴子宫内，插入胚胎移植装置内芯，将胚胎送入受体母驴子宫，具体方法包括下述步骤：①.将受体母驴拉进保定架、拴尾巴，然后掏粪，再清洗，第一遍用清水冲掉肛门、外阴周围的粪便和脏东西；第二遍用洗洁精；第三遍用碘伏水；第四遍用清水；最后用纸摁干净，注意：每一遍之间都要彻底冲洗干净，手每一遍也要冲...

【技术特征摘要】
1.一种驴的胚胎移植方法，包括下述步骤：一.供体的准备：选择遗传性能稳定、谱系清晰、没有流产史、年龄在2.5岁以上，质检生殖器官正常，无生殖疾病的母驴作为供体母驴；选择质检生殖器官正常，无生殖疾病的母驴作为受体母驴；二.发情调控：在供体母驴和受体母驴黄体生成的第6-8天肌肉注射氯前列醇钠注射液，使用剂量为0.2mg/头；三.人工授精：在注射氯前列醇钠注射液后的第4-5天，采用超声波B超仪观察供体母驴卵泡发育情况，当发现卵泡直径达到3.4-3.5cm时，给供体母驴注射3000单位的促黄体素或绒毛膜促性腺素，使供体母驴集中时间进行排卵，降低卵泡发育中闭锁的几率，并在排卵前10小时至排卵后6小时内，进行人工授精，具体方法包括下述步骤：①.将供体母驴拉进保定架、拴尾巴，然后掏粪，再清洗，第一遍用清水冲掉肛门、外阴周围的粪便和脏东西；第二遍用洗洁精；第三遍用碘伏水；第四遍用清水；最后用纸摁干净，注意：每一遍之间都要彻底冲洗干净，手每一遍也要冲洗干净；②.用驴用输精枪实施两次人工输精，输精部位为子宫角，每次鲜精输精剂量5mL，含有效精子数＞3×107，并在母驴右屁股做上标记；③.第二天用超声波B超仪观察已授精供体母驴排卵的情况，选出已排卵的供体母驴，并记录该供体母驴的排卵当天日期；四.放松宫颈：供体母驴排卵当天后的第9天，先肌肉注射氯前列醇钠注射液0.2毫克；9小时后，将供体母驴引入保定架，在保定好的前提下， 在驴的后海穴位注射利多卡因100毫克，在清洗完外阴后，通过超声波B超仪观察供体母驴子宫颈放松情况，供体母驴子宫颈直径打开程度达到该供体母驴关闭时子宫颈的1.5倍即可，若供体母驴的子宫颈放松不足，可以再注射50毫克利多卡因即可。五.冲胚集卵：然后使用冲胚装置进行冲胚，获得包含胚胎和冲胚液的胚胎混合液，所述冲胚装置包括Y型管、带气囊导管、夹子和冲胚瓶，Y型管的一端连接所述带气囊导管，先通过Y型管向供体母驴子宫内灌注冲胚液，然后通过Y型管向集卵容器内输送胚胎或混有胚胎的混合液；Y型管的另一端带有夹子，作为集卵控制开关，连接冲胚瓶，具体方法包括下述步骤：①.将供体母驴拉进保定架、拴尾巴，然后掏粪，再清洗，第一遍用清水冲掉肛门、外阴周围的粪便和脏东西；第二遍用洗洁精；第三遍用碘伏水；第四遍用清水；最后用纸摁干净，注意：每一遍之间都要彻底冲洗干净，手每一遍也要冲洗干净；②.打麻醉药：取A药液0.15毫升+9.85毫升生理盐水，静脉注射；清洗完外阴后，取A药液0.15毫升+B药液0.2毫升+9.65毫升生理盐水静脉注射，五分钟后开始冲胚；注射麻醉药后注意观察供体母驴，出现麻醉过量引起的呼吸异常、心跳异常以及耷拉脑袋的情况时及时抢救；A药：浓度为10mg/ml的盐酸右美托咪定注射液，根据体重，每100千克使用0.1毫升；B药：规格：浓度为10mg/ml的酒石酸布托啡诺，根据体重每100千克使用0.1毫升；③.麻醉5分钟后，由助手打开Y型管的袋口，冲胚员带无菌手套拿出Y型管，助手往带气囊导管打气，看带气囊导管有无破损，打气注意把接口处接好，用夹子夹好Y型管，注入冲胚液，再由冲胚员把带气囊导管伸入供体母驴的子宫颈，放一点水，然后充气，卡住子...

【专利技术属性】
技术研发人员：王涛，嵇传良，于杰，张瑞涛，李敏，孙倩倩，尹桂军，马运峰，赵志超，
申请(专利权)人：东阿阿胶股份有限公司，山东东阿黑毛驴牧业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37