发酵乳杆菌特异性培养基及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种发酵乳杆菌特异性培养基，它含有蛋白胨、酵母粉、吐温80、磷酸氢二钾、乙酸钠、柠檬酸三铵、硫酸镁、硫酸锰、碳源、新霉素、琼脂和蒸馏水等组分，该培养基配制方便、成本低廉，多种碳源和新霉素的配伍合理，该培养基能够培养发酵乳杆菌并对其进行特异性计数；本发明专利技术还公开了上述发酵乳杆菌特异性培养基的一种应用，用于对发酵乳杆菌进行活菌计数，计数方法简单，特异性高，相对于其它方法来说，操作简便、成本低廉。本发明专利技术适用于配制能对发酵乳杆菌活菌数进行特异性计数的培养基。

Fermentation Lactobacillus specific medium and its application

The invention discloses a fermentation Lactobacillus specific medium containing peptone, yeast powder, 80 Twain, two, potassium hydrogen phosphate, ammonium acetate, citric acid three Magnesium Sulfate, manganese sulfate, carbon source, neomycin, agar and distilled water group, the medium is convenient, the cost is low. The compatibility of various carbon sources and neomycin is reasonable, the culture medium to cultivate lactobacillus fermentation and specificity of the count; the present invention also discloses the fermentation of Lactobacillus specific culture medium for an application, on the fermentation of Lactobacillus for live bacteria counting, counting method is simple, high specificity, compared with other methods it has the advantages of simple operation, low cost. The present invention is suitable for preparing the culture medium which can count the number of living bacteria of lactobacillus.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物检测领域领域，涉及一种培养基，具体地说是一种发酵乳杆菌特异性培养基及其应用。
技术介绍
发酵乳杆菌CECT5716(Lactobacillus fermentum) 属于乳杆菌属，该菌种已列入欧盟安全资格认定（QPS）推荐的生物制剂列表中，并列入国际乳业联盟（IDF）“具有在食品中安全使用记录史的微生物清单”。2011年发酵乳杆菌列入我国《可用于食品的菌种名单》。发酵乳杆菌CECT5716分离自健康母乳，经接种、发酵培养、浓缩、冷冻干燥制得。研究表明，发酵乳杆菌作为益生菌，能够耐受动物肠道低酸、高胆盐环境，在胃肠道环境中适应能力强。发酵乳杆菌的抑菌能力强，对单增李斯特菌、大肠杆菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌等都表现出很强的抑菌作用，同时能降解胆固醇，起到免疫调节、抗氧化的作用。为此，需要在乳制品中检测发酵乳杆菌的数量。我国国家标准、地方标准、行业标准中均未规定发酵乳杆菌的检测和计数方法，目前，对发酵乳杆菌的定性和定量检测方法主要为分子生物学的PCR、荧光定量PCR或者培养基平板计数检测方法。申请号为200910177905.5、名称为“益生菌乳制品中发酵乳杆菌的快速定性、定量测定方法”的中国专利技术专利申请，公开了一种对发酵乳杆菌定量检测方法，该方法通过设计发酵乳杆菌的 16S rRNA 基因序列的种属特异性引物，应用此引物进行种属特异性 PCR 和实时荧光定量 PCR反应，通过琼脂糖凝胶电泳图谱分析和实时荧光定量 PCR 图谱分析，建立益生菌乳制品中发酵乳杆菌的简便、快速、准确的定性和定量测定方法。该方法能够快速出具结果，但对人员、仪器要求高，难以实施。在培养基上通过培养不同的菌种进行平板计数检测，这在操作上和检测手段上比分子生物学的PCR或荧光定量PCR简便许多。然而，由于所需要检测的菌种不同，所针对的培养基则大不相同，因此，研究者对不同的菌种进行平板计数时，培养基成为了技术成功与否的关键。例如，植物乳杆菌与发酵乳杆菌，虽然都属于益生菌，但二者之间也有一些差别，如糖利用情况不同，对不同抗生素的敏感性也不一致，因此，对于二者的培养基来说更是有较大的区别。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，是提供一种发酵乳杆菌特异性培养基，它含有多种碳源、新霉素等物质，能够培养发酵乳杆菌并对其进行特异性计数；本专利技术的另外一个目的，是提供了上述发酵乳杆菌特异性培养基的一种应用，用于对发酵乳杆菌进行活菌计数，计数方法简单，特异性高，相对于其它方法来说，操作简便、成本低廉。为解决上述技术问题，本专利技术所采取的技术方案是：一种发酵乳杆菌特异性培养基，其特征在于按照重量份数计包含如下成分：蛋白胨 8.0-15.0份，酵母粉 2.0-6.0份，牛肉膏 8.0-15.0份，吐温80 1.0-1.5份，磷酸氢二钾 1.0-2.0份，乙酸钠 4.0-6.0 份，柠檬酸三铵 2.0-4.0 份，硫酸镁 0.2-0.4 份，硫酸锰 0.05-0.20份，碳源 15-30份，新霉素 5×10-3-10×10-3份，琼脂 15.0-20.0份，蒸馏水 1000份。作为本专利技术的限定，所述碳源为按重量比1:1:1混合的氨基葡萄糖盐酸盐、蜜二糖和棉籽糖；所述新霉素的添加量为6×10-3-9×10-3重量份；所述培养基于118-125℃下灭菌15-20min，培养基的PH为6.0-6.2。本专利技术还提供了发酵乳杆菌特异性培养基的一种应用，它用于对发酵乳杆菌进行计数，是将菌种于所述培养基上进行培养后，再对培养后的菌株进行平板计数。作为本专利技术的限定，培养温度为34-36℃，培养时间为46-50h。由于采用了上述的技术方案，本专利技术与现有技术相比，所取得的技术进步在于：本专利技术提供的发酵乳杆菌特异性培养基，具有配制方便、成本低廉、操作简便的优点，该培养基包含多种碳源和新霉素，多种碳源与新霉素的配伍可对发酵乳杆菌进行培养和特异性计数；本专利技术提供的发酵乳杆菌特异性培养基的应用，技术方法简单，特异性高，相对于其它检测方法来说，对操作人员要求降低，检测成本降低。本专利技术适用于配制能对发酵乳杆菌的活菌进行特异性计数的培养基，该培养基进一步对添加有发酵乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、罗伊氏乳杆菌等菌种中的一种或几种菌种的乳制品中的发酵乳杆菌活菌数进行特异性检测。本专利技术下面将结合具体实施例作进一步详细说明。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、组分等，如无特殊说明，均可从商业渠道购买。具体实施方式实施例1-6 发酵乳杆菌特异性培养基实施例1-6分别为一种发酵乳杆菌特异性培养基，各自的组分和含量如表1所示，各自的制备条件如表2所示。表1 发酵乳杆菌特异性培养基中所含组分及含量表2 发酵乳杆菌特异性培养基的制备条件上述实施例1-6中所提供的发酵乳杆菌特异性培养基在配制过程中，除了新霉素外，其它组分一起加入，在使用培养基时，先将培养基融化，待温度降至50℃以下时，再添加新霉素。上述实施例提供的发酵乳杆菌特异性培养基具有配制方便，成本低廉的特点，可对乳制品中的发酵乳杆菌进行培养和特异性计数。实施例7 一种对发酵乳杆菌进行活菌计数的方法实施例7是提供实施例1-6所提供的发酵乳杆菌特异性培养基的应用，也就是将不同菌种（包含发酵乳杆菌）分别在实施例1-6所提供的培养基上进行培养，并对培养后的菌种进行平板计数。检测样品为含有发酵乳杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的乳制品（酸奶或者乳饮料），具体的实验步骤如下：（1）样品稀释液体样品：液体样品摇匀用无菌吸管吸取样品25mL，置于225mL生理盐水中混匀，制成1：10的样品稀释液；（2）取上述1:10的样品稀释液（样品匀液）1mL，注入9mL生理盐水中，充分混匀，依次逐级稀释至合适浓度；（3）吸取上述不同浓度的样品0.1mL置于已凝固的平皿中，用涂布棒进行涂布。至36±1℃培养箱中培养48±1h，计数平板上的所有菌落。本实施例所提供的计数方法简单，相对于PCR的计数方法来说，对操作人员的要求降低，成本降低。实施例8-10 发酵乳杆菌进行活菌计数的方法实施例8-10所提供的发酵乳杆菌进行活菌计数的方法与实施例7相似，不同之处在于步骤（3）中培养箱中培养的温度和时间均与实施例7不同，具体见下表。表3 培养温度时间表上述实施例所提供的计数方法简单，相对于PCR的计数方法来说，对操作人员本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种发酵乳杆菌特异性培养基，其特征在于按照重量份数计包含如下成分：蛋白胨                     8.0‑15.0份，酵母粉                     2.0‑6.0份，牛肉膏                     8.0‑15.0份，吐温80                     1.0‑1.5份，磷酸氢二钾                 1.0‑2.0份，乙酸钠                     4.0‑6.0 份，柠檬酸三铵                 2.0‑4.0 份，硫酸镁                     0.2‑0.4 份，硫酸锰                     0.05‑0.20份，碳源                       15‑30份，新霉素                     5×10‑3‑10×10‑3份，琼脂                       15.0‑20.0份，蒸馏水                     1000份。

【技术特征摘要】
1.一种发酵乳杆菌特异性培养基，其特征在于按照重量份数计包含如下成分：蛋白胨 8.0-15.0份，酵母粉 2.0-6.0份，牛肉膏 8.0-15.0份，吐温80 1.0-1.5份，磷酸氢二钾 1.0-2.0份，乙酸钠 4.0-6.0 份，柠檬酸三铵 2.0-4.0 份，硫酸镁 0.2-0.4 份，硫酸锰 0.05-0.20份，碳源 15-30份，新霉素 5×10-3-10×10-3份，琼脂 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兴佳，屈雅莉，柴艳兵，张耀广，李飞，赵媛媛，杨春杰，
申请(专利权)人：石家庄君乐宝乳业有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13