本发明专利技术属于生物检测技术领域，具体公开了一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒，同时还公开了其制备方法和应用。该试剂盒包括包被ST2抗体ab89728的微孔板、ALP标记抗ST2抗体ab196525、分析缓冲液、发光底物CSPD、洗涤液、质控标准品；质控标准品为重组ST2蛋白ab166883。本发明专利技术提供的用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒，采用双抗体夹心法来实现化学发光免疫分析ST2指标，方便快捷，具有高效、灵敏、高特异性的优点，重复性和可靠性良好，可以为心衰的预后和危险分级判断提供可靠的依据。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测
，具体涉及一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒，同时还涉及其制备方法和应用。
技术介绍
心力衰竭(heart failure)简称心衰，是指由于心脏的收缩功能和(或)舒张功能发生障碍，不能将静脉回心血量充分排出心脏，导致静脉系统血液淤积，动脉系统血液灌注不足，从而引起心脏循环障碍症候群，此种障碍症候群集中表现为肺淤血、腔静脉淤血。心力衰竭并不是一个独立的疾病，而是心脏疾病发展的终末阶段。几乎所有的心血管疾病最终都会导致心力衰竭的发生，心肌梗死、心肌病、血流动力学负荷过重、炎症等任何原因引起的心肌损伤，均可造成心肌结构和功能的变化，最后导致心室泵血和(或)充盈功能低下。心衰患者5年的死亡率达50％，心衰是心血管领域最重要的公共卫生问题。根据心力衰竭发生的缓急，临床可分为急性心力衰竭和慢性心力衰竭。根据心力衰竭发生的部位可分为左心、右心和全心衰竭。此外，心力衰竭还有收缩性或舒张性心力衰竭之分。心衰的诊断方式有心电图、X线检查、超声心动图、动脉血气分析、血常规和血生化检查，如电解质、肾功能、血糖、白蛋白及高敏C反应蛋白。诊断心衰的标志物指标为B型利钠肽(BNP)和N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)，检测心肌受损的标示物是心肌肌钙蛋白T或I(CTnT或CTnI)等。其中B型利钠肽(BNP)是诊断心衰的最重要指标，但BNP作为心衰的标志物存在如下不足：BNP会随着年龄增长而增高，且女性高于男性；急性冠脉综合征、肺部疾病、慢性肾功能不全等其他疾病也能导致BNP升高；肥胖者比非肥胖者BNP低；还有其他广泛的生物学变异等等。人生长刺激表达基因2蛋白(growth Stimulation expressed gene 2),简称ST2，ST2蛋白也是白介素I受体家族的成员，分为可溶性和跨膜型两种。研究发现ST2蛋白有心脏组织表达，同时ST2蛋白的表达与损伤后的心脏纤维化反应直接关联。相对于其他心脏标志物，ST2具有稳定性高、生物变异度低的优点，ST2是最新一代的心衰标志物，反应心肌纤维化，在评估心衰预后和危险分级方面明显优于其他心衰生物标志物。因此，提供一种用于检测ST2的试剂盒及检测方法，为心衰的预后和危险分级判断提供可靠的依据，对心力衰竭的诊治将具有重大意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒，采用双抗体夹心法来实现化学发光免疫分析ST2指标，具有高效、灵敏、高特异性的优点，重复性和可靠性良好，可以为心衰的预后和危险分级判断提供可靠的依据。本专利技术的目的还在于提供一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法。本专利技术的目的还在于提供一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒的应用。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒，包括：包被ST2抗体ab89728的微孔板、ALP标记抗ST2抗体ab196525、分析缓冲液、发光底物CSPD、洗涤液、质控标准品；所述分析缓冲液为：在0.05M/L、pH值为8.0的Tris-Hcl溶液中添加BSA形成的混合溶液，混合溶液中BSA的质量百分比浓度为1％；所述洗涤液为：在0.05M/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中添加吐温20形成的混合溶液，混合溶液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％；所述质控标准品为重组ST2蛋白ab166883。一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，包括：包被ST2抗体ab89728的微孔板通过以下步骤制备：把抗ST2抗体ab89728用包被缓冲液稀释至0.05～3微克/微升，制得抗体包被液，向微孔板的每孔中加入50微升的所述抗体包被液，然后置于37℃包被2小时，之后用生理盐水冲洗三次，然后再向所述微孔板的每孔中加入100微升的封板液，之后置于室温封闭2小时，再用生理盐水冲洗两次，制得包被ST2抗体ab89728的微孔板；ALP标记抗ST2抗体ab196525通过以下步骤制备：取0.5～3毫克的ALP、1～4毫克的ab196525抗体，加入PBS缓冲液，在磁力搅拌下，再加入0.05毫升戊二醛，得到混合液，混合液的总体积控制为0.5毫升，所述混合液室温搅拌15分钟，之后避光反应4小时，然后向所述混合液中加入0.1M/L的乙醇胺，室温搅拌2小时，之后用PBS缓冲液在4℃下透析过夜，得到透析液，所述透析液与等质量的甘油混合，然后向透析液与甘油形成的混合物中加入质量百分比浓度为0.1％的NaN3溶液，制得ALP标记抗ST2抗体ab196525；分析缓冲液配制方法：在0.05M/L、pH值为8.0的Tris-Hcl溶液中添加BSA形成混合溶液，混合溶液中BSA的质量百分比浓度为1％；洗涤液配制方法：在0.05M/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中添加吐温20形成混合溶液，混合溶液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％；质控标准品采用重组ST2蛋白ab166883。优选的，所述的包被缓冲液为0.05M/L、pH值为9.0的碳酸盐缓冲液。优选的，所述的封板液配制方法为：向0.05M/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中加入BSA形成混合溶液，混合溶液中BSA的质量百分比浓度为1％。一种权利要求1所述的用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒的应用，包括以下步骤：S1：用含有BSA的质量百分比浓度为0.1％的PBS缓冲液作为稀释液，将质控标准品重组ST2蛋白ab166883稀释制成具有系列浓度梯度的标准品溶液；S2：向包被ST2抗体ab89728的微孔板的孔中，分别加入具有系列浓度梯度的标准品溶液和待测样本溶液，具有系列浓度梯度的标准品溶液和待测样本溶液的加入量均为50微升，然后再向孔中加入50微升ALP标记抗ST2抗体ab196525工作溶液，震荡均匀之后在37℃温育1小时，然后用洗涤液冲洗5次，在吸水纸上控干，再加入底物工作液和分析缓冲液各50微升，室温避光反应10分钟后，在发光仪上测量发光强度；S3：根据系列浓度梯度的标准品溶液的浓度和测得的发光强度值，绘制标准工作曲线，然后根据待测样本溶液的发光强度值，通过标准工作曲线计算得出待测样本溶液的浓度。优选的，步骤S1中，所述稀释液中BSA的质量百分比浓度为1％。优选的，步骤S2中，ALP标记抗ST2抗体ab196525工作溶液的配制方法为：将ALP标记抗ST2抗体ab196525与水按照体积比：ALP标记抗ST2抗体ab196525:水＝1:2000稀释制得。优选的，步骤S2中，所述底物工作液的配制方法为：将500～800微升的二乙醇胺、100微升1M/L的NaOH溶液、100微升1M/L的MgCl2溶液及100微升质量百分比浓度为10％的NaN3溶液混匀，高压蒸汽灭菌，制得底物缓冲液；取所述底物缓冲液800微升，加入200微升的增强剂和50微升的发光底物CSPD，灭菌容器内混匀，制得底物工作液。化学发光免疫分析技术(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是将高灵敏度的化学发光测定技术和高选择性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、蛋白质、维生素、药物等的检测分析，是继酶免、放免、荧光、时间分辨荧本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，包括：包被ST2抗体ab89728的微孔板、ALP标记抗ST2抗体ab196525、分析缓冲液、发光底物CSPD、洗涤液、质控标准品；所述分析缓冲液为：在0.05M/L、pH值为8.0的Tris‑Hcl溶液中添加BSA形成的混合溶液，混合溶液中BSA的质量百分比浓度为1％；所述洗涤液为：在0.05M/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中添加吐温20形成的混合溶液，混合溶液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％；所述质控标准品为重组ST2蛋白ab166883。
【技术特征摘要】
1.一种用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，包括：包被ST2抗体ab89728的微孔板、ALP标记抗ST2抗体ab196525、分析缓冲液、发光底物CSPD、洗涤液、质控标准品；所述分析缓冲液为：在0.05M/L、pH值为8.0的Tris-Hcl溶液中添加BSA形成的混合溶液，混合溶液中BSA的质量百分比浓度为1％；所述洗涤液为：在0.05M/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中添加吐温20形成的混合溶液，混合溶液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％；所述质控标准品为重组ST2蛋白ab166883。2.一种权利要求1所述的用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：包被ST2抗体ab89728的微孔板通过以下步骤制备：把抗ST2抗体ab89728用包被缓冲液稀释至0.05～3微克/微升，制得抗体包被液，向微孔板的每孔中加入50微升的所述抗体包被液，然后置于37℃包被2小时，之后用生理盐水冲洗三次，然后再向所述微孔板的每孔中加入100微升的封板液，之后置于室温封闭2小时，再用生理盐水冲洗两次，制得包被ST2抗体ab89728的微孔板；ALP标记抗ST2抗体ab196525通过以下步骤制备：取0.5～3毫克的ALP、1～4毫克的ab196525抗体，加入PBS缓冲液，在磁力搅拌下，再加入0.05毫升戊二醛，得到混合液，混合液的总体积控制为0.5毫升，所述混合液室温搅拌15分钟，之后避光反应4小时，然后向所述混合液中加入0.1M/L的乙醇胺，室温搅拌2小时，之后用PBS缓冲液在4℃下透析过夜，得到透析液，所述透析液与等质量的甘油混合，然后向透析液与甘油形成的混合物中加入质量百分比浓度为0.1％的NaN3溶液，制得ALP标记抗ST2抗体ab196525；分析缓冲液配制方法：在0.05M/L、pH值为8.0的Tris-Hcl溶液中添加BSA形成混合溶液，混合溶液中BSA的质量百分比浓度为1％；洗涤液配制方法：在0.05M/L、pH值为7.4的PBS缓冲液中添加吐温20形成混合溶液，混合溶液中吐温20的质量百分比浓度为0.05％；质控标准品采用重组ST2蛋白ab166883。3.根据权利要求2所述的用于检测ST2的化学发光免疫分析试剂盒的制备方法，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：段瑞敏，程贵昌，
申请(专利权)人：河南华程氏生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41
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