天然降压素制造技术

原发性高血压是世界医学领域的特大难题，尤其是该病引发的脑出血，给人类的生命带来严重的威胁。种类繁多的化学药物虽然可以维持高血压的现状，但是最终还是使该病的病变实质逐日加重。为治愈高血压，本发明专利技术运用中医药经典理论，经数十年的基础和临床研究，发现了可有效治愈高血压的天然中草药，如葛根、灵芝、夏枯草等。利用超临界流体萃取技术提取各味中药的有效成份，制成可治愈高血压的中药新药——天然降压素。研究证明，该药治愈高血压的机制是，可通过促进SOD的基因表达，提高SOD的活性，清除自由基；促SOD的基因表达，增加NO的生成；抑制内皮细胞的凋亡，改善和恢复内皮细胞的功能，从实质上修复病变的血管，发挥治愈性的降压功能。

【技术实现步骤摘要】
天然降压素属中医药高科技领域。天然降压素的处方组成：人参、鹿茸、枸杞子、何首乌、天麻、钩藤、地骨皮、葛根、灵芝草、远志、夏枯草、银杏叶、菊花、茯苓、甘草。天然降压素的制取：将处方中的15味中草药分别筛制干净，60目粉碎机分别粗粉，分别放入超临界CO2流体萃取器。流体萃取的压力最佳是41mpa.流体萃取的最佳温度是55℃.流体动态萃取的最佳时间是32分钟。流体萃取中最优的夹带剂是乙醇。流体萃取中的夹带剂用量是整体提取量的20分之一。动态流体萃取32分钟，进行界面提取，分别提出各味中药的有效成分，如降压素素、人参甙、亚油酸、牛磺酸、枸杞多糖。上述提取的各种中药有效成分，混合之后即为天然降压素。天然降压素疗效的基础研究原发性高血压的实质，是血管内皮细胞的功能障碍。体内氧化应激条件下所产生的自由基损伤，是造成血管内皮细胞功能障碍的重要机制。自由基可以灭活NO[1]，抑制NOS的活性[2]，导致NO的生成大大减少，ET-1的合成与释放大大增加，表现出持久的缩血管效应，使原发性高血压得以起动和维持。根据这一理论认识，为有效的治疗原发性高血压，将研究发现的可治愈原发性高血压的天然中草药，如葛根、远志、灵芝草[3]，应用超临界流体萃取技术，提取各味植物药草的主要有效成分，制成中药新药----天然降压素，经高效液相色普技术纯化，配成一定浓度的试验用药液，进行原发性高血压大鼠的基础实验研究。一、材料与方法1、实验动物：雄性原发性高血压大鼠(SHR)，购于北京利华实验动物中心。体重200-220克，血压(176.6±3.4)。主要仪器：定量PCR仪(美国ABI公司)；流式细胞仪(美国BD公司FACSC-alibur)；透射电子显微镜(日立7500型)；RBP-1型大鼠血压计(中日友好医院医学研究所)；生化分析仪lisa 3000plus(法国HYEL)；酶标仪(美国Bio-Tec生物科技公司产品)；主要试剂：逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)试剂盒，购自美国QIAGEN公司；NO、NOS、MDA、SOD试剂盒，购于南京建成生物工程研究所；ET-1试剂盒，由北京华美生物工程有限公司提供。2、实验药物：灵芝草，购于北京同仁堂药店，经超临界流体萃取技术萃取，萃取压力30千帕，萃取温度65℃，夹带剂为60％乙醇，萃取时间60分钟。所提膏状提取物，经高效液相色谱技术纯化，冷冻干燥后，粉碎装入胶囊，每粒0.3g，相当于原生药6g。实验时取胶囊内容物加蒸馏水溶化，配成60g/L的剂 量。阳性对照药卡托普利片，常州制药厂生产，批号312731，每片25mg，研末加蒸馏水配成含量为2.5g/L。二、实验方法：1.动物分组和治疗：雄性原发性高血压大鼠(SHR)30只，血压(176.6±3.4)mmHg，随机分成对照组、天然降压素治疗组(简称天然降压素组)、阳性药物卡托普利对照组(简称阳性组)。各组SHR在正常饲养的基础上，对照组给以蒸馏水灌胃治疗，天然降压素组给以天然降压素0.6g/kg灌胃治疗，阳性组给以卡托普利0.03g/kg，每天1次灌胃治疗。2.大鼠血压测量：治疗8周后，测量SHR大鼠的血压，重复测定3次。3.生化指标检测：各组大鼠治疗后，空腹6h，麻醉后左颈总动脉插管取血5ml，离心后取上清液，按照试剂盒说明，测定NO、NOS、ET-1、SOD、MDA的含量，及血脂的变化。用考马斯亮蓝比色法进行蛋白定性，测定SOD、NOS的活性。5.分子生物学指标的测定采用Northern Blotting方法、免疫组化、Western印迹和RT-PCR法检测SOD、NOS、HDL的基因表达，用流式细胞术检测内皮细胞的凋亡。4、统计方法：各组实验所得数据用(X±S)表示，采用SPSS17.0统计软件进行成组设计的t检验和方差分析，比较各组之间的差异。三.实验结果1.血压的变化：各组大鼠治疗8周后，天然降压素组大鼠的血压趋于正常水平，和对照组比较，P＜0.01，和阳性组比较，P＜0.01。动性观察可见，天然降压素有增强大鼠体能的作用。具体数据见表1。表1各组大鼠治疗8周后的血压变化(x±S，mmHg)注：天然降压素组、阳性组分别与对照组比较，#：P＜0.05，##：P＜0.01；天然降压素组与阳性组比较，*：P＜0.05，**：P＜0.01。下同2.各组大鼠治疗后血清NO、NOS、ET-1的变化：天然降压素组大鼠的NO的含量显著升高，ET-1的水平显著下降，和对照组比较，P＜0.01。详细数据见表2。表2各组大鼠治疗前NO、NOS、NOS、ET的变化(x±s，n＝10)3.各组大鼠治疗后抗氧化指标的变化：天然降压素组大鼠MDA的含量明显下降，SOD的活性明显上升，和对照组比较，P＜0.01，详细数据见表3。表3各组大鼠治疗后MDA及SOD的变化(x±s，n＝10)4.各组大鼠治疗后基因表达的检测结果：天然降压素组大鼠主动脉SOD、NOS的基因表达明显上调，肝脏HDL的基因表达也明显上调，和对照组比较，P＜0.01。内皮细胞的凋亡率也明显降低，和对照组比较，P＜0.01。表4各组大鼠治后主动脉SOD、NOS、肝脏HDL基因表达的变化及EC的凋亡率(x±s)5.各组大鼠治疗后血脂的变化：各组大鼠治疗8周后，天然降压素组大鼠的血清TC、TG、LDL均明显降低，而HDL的水平显著上升，和对照组比较，P＜0.01。详细数据见表5。表5各组大鼠冶疗后血清脂类代谢的变化(x±s，n＝10)讨论氧化应激条件下所产生的自由基，是内皮细胞功能障碍的重要机制，是原发性高血压的实质。高血压状态时，NO的生成量显著降低，而NO是体内重要的信使分子和效应分子，为血管的舒张、神经信号的传递，起着重要的调控作用[4]。NOS是催化NO合成的主要物质[5]。自由基可以灭活NO，并加速一氧化氮的降解。从而导致内皮细胞功能障碍的发生，导致ET-1的合成和释放增加，表现出持久的缩血管效应。因此，高血压的药物治疗研究，应以清除自由、增加NO的生成，改善和恢复内皮细胞的功能为靶点。体内过高的LDL，可进入内皮细胞，刺激内皮细胞产生活性氧，它可作为信号传导通路的第二信使，诱导内皮细胞的损伤[6]，又可抑制内皮细胞中NOS的活性，并加速NO的降解，导致内皮细胞的凋亡[7]。本研究结果表明，天然降压素组大鼠的SOD的基因表达明显上调，活性明显增强，MDA的含量明显降低，同时 内皮细胞的凋亡率也明显降低，和对照组比较，差异都十分显著。由此证明，天然降压素可有效地促进SOD的基因表达，增强SOD的含量与活性，清除自由基，减少MDA的生成，又可抑制内皮细胞的凋亡，从抗氧化、抗凋亡的角度，改善和恢复内皮细功能，从而使高血压得到有效的治疗。NO和ET-1是内皮细胞分泌的一对相互拮抗的活性物质。正常情况下，两者的拮抗效应处于动态平衡之中，从而维持着血管的正常舒张和收缩功能，以及血压的稳定。高血压状态时，NOS的活性被抑制，NO的生成大大减少，导致ET-1的过度合成和释放。这一活性物质的水平升高，表现为持久的缩血管效应，进一步促使高血压的形成和发展。本研究结果表明，天然降压素组大鼠NOS的基因表达明显上调，NO的生成显著上升，ET的水平显著下降。由此证明，天然降压素可有效地促进NOS的基本文档来自技高网...

【技术保护点】
天然降压素属现代中医药科技领域，该药的处方，由纯天然中草药组成，即：人参、鹿茸、枸杞子、何首乌、天麻、钩藤、地骨皮、葛根、灵芝草远志、夏枯草、银杏叶、菊花、茯苓、甘草。方中各药，利用超临界流体萃取技术提取，再以高效液相色谱技术纯化，后经冷冻干燥制成颗粒，命名为天然降压素。大量研究证明，天然降压素可通过促进SOD的基因表达，提高SOD活性，清除自由基；促进NOS的基因表达，增强NOS的活性，增加NO的生成；抑制内皮细胞的凋亡，调控HDL的基因表达，提高HDL的水平，从而改善和恢复内皮细胞的功能，从实质上有效的发挥降压功能，解决了原发性高血压难以治愈的世界难题。

【技术特征摘要】
1.天然降压素属现代中医药科技领域，该药的处方，由纯天然中草药组成，即：人参、鹿茸、枸杞子、何首乌、天麻、钩藤、地骨皮、葛根、灵芝草远志、夏枯草、银杏叶、菊花、茯苓、甘草。方中各药，利用超临界流体萃取技术提取，再以高效液相色谱技术纯化，后经冷冻干燥制成颗粒，命名为天然降压素。大量研究证明，天然降压素可通过促进SOD的基因表达，提高SOD活性，清除自由基；促进NOS的基因表达，增强NOS的活性，增加NO的生成；抑制内皮细胞的凋亡，调控HDL的基因表达，提高HDL的水平，从而改善和恢复内皮细胞的功能，从实质上有效的发挥降压功能，解决了原发性高血压难以治愈的世界难题。2.根据权利要求书1所述之处方组成，其主要特征是，该方以君、臣、佐、使的法则，所组成，其功能是调和气血，燮理阴阳，平肝熄风、活血化淤、化腐生新、聪耳明目、轻身耐老。3.根据权利要求书1所述之：“清除活性氧“，其主要特征是，天然降压素的主要方药为灵芝草，而灵芝草生深山老林，聚天地之灵气，积万物之精华，为历代养生保健、轻身耐老之佳品。其主要有效成份---灵芝多糖，独具清除活性氧、阻止自由基生成之功，修复病变之血管，是原发性高血压恢复正常。4.根据权利要求书1所述；“增强超氧化物歧化酶的活性”，其主要特征是，超氧化物歧化酶作为体内重要的抗氧化酶之一，可有效地清除活性氧。活性氧是研究衰老和抵抗衰老的主要检测指标。研究证明，天然降压素可促进超氧化物歧化酶的基因表达，增强超氧化物歧化酶的活性，是天然降压素清除活性氧自由基的重要作用机制。5.根据权利要求1所述；抑制内皮细胞的凋亡，从而改善和恢复内皮细胞的功能，从实质上有效的发挥降压功能，解决了原发性高血压难以治愈的世界难题。6.根据权利要求书1所述：“清除和阻止自由基的形成”，其主要特征是；自由基是机体抗氧化反应中产生的有害物质，具有强氧化性，可损害体内的组织与细胞，进而引起细胞的凋亡和人体的衰老。研究证明，天然降压素不仅可以抗氧化，尚可有效的阻止自由基的生成而阻止细胞的老化。7.根据权利要求书1所述；促进NOS的基因表达，增加NO的生成，是改善血管内皮细胞功能的基...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵文元，
申请(专利权)人：赵文元，
类型：发明
国别省市：山东;37