抗-间皮素免疫缀合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗‑间皮素免疫缀合物及其应用。具体地，本发明专利技术提供免疫缀合物，所述免疫缀合物由结合间皮素的抗体（例如，单克隆抗体）或抗体片段组成，所述抗体或抗体片段缀合到细胞毒性剂（例如，美坦辛或其衍生物）上，且/或所述免疫缀合物与一种或更多种额外的抗癌剂共同施用或共同配制。本发明专利技术的免疫缀合物可以用于本发明专利技术的方法中，以治疗和/或诊断和/或监测癌症，例如实体瘤。所述缀合物包含含有对膜‑锚定的40 kDa间皮素多肽是特异性的抗原‑结合区的抗体和功能片段，所述间皮素多肽在几种肿瘤中过表达，所述肿瘤例如胰腺肿瘤和卵巢肿瘤、间皮瘤和肺癌细胞。

【技术实现步骤摘要】
本专利申请是专利申请号为201080029126.1，申请日为2010年4月16日的同题专利申请的分案申请。
本专利技术提供了免疫缀合物，所述免疫缀合物包含具有对间皮素（mesothelin）蛋白的特异性的抗体或其片段以及治疗剂。这种免疫缀合物的组合物可以用于治疗、预防或诊断间皮素相关病症，例如癌症。
技术介绍
癌症的发生最常见地与老化有关，由此所有新癌症病例中的65%是65岁及以上的患者。在美国，癌症是第二大死亡原因，排名第一的是心脏病。实际上，美国癌症学会（American Cancer Society）已经估计，假定当前的死亡率保持不变，在美国将有1/4的人死于癌症。仅在美国，预期在2008年有1,437,180个新癌症病例，且565,650人死于癌症。基于抗体的疗法被证实可以非常有效地治疗各种癌症，包括实体瘤。例如，赫赛汀®已经成功地用于治疗乳腺癌。开发成功的基于抗体的疗法的关键是，分离出抗体，所述抗体针对经发现在肿瘤细胞上优先表达的细胞表面蛋白。间皮素前体多肽是一种糖磷脂酰肌醇 (GPI)-锚定的、糖基化的细胞表面蛋白，其被蛋白水解地裂解成30 kDa N-端分泌型多肽和40 kDa C-端多肽，其主要以膜-结合的、GPI-锚定的形式存在 (Chang, K.和I. Pastan, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, (1996) 93(1):136)，且在本文中命名为间皮素。间皮素被某些肿瘤细胞（特别是间皮瘤细胞、胰腺肿瘤细胞和卵巢癌细胞）优先表达，同时它在正常组织中的表达受到限制，使它成为开发肿瘤疗法的一种有吸引力的靶标 (Argani, P. 等人, Clin. Cancer Res. (2001) 7(12): 3862; Hassan, R., 等人, Clin. Cancer Res. (2004) 10(12 Pt 1):3937)。间皮素的功能是未知的，在间皮素基因表达缺陷型的小鼠中，没有观察到明显的生殖异常、血液学异常或解剖学异常 (Bera, T.K.和I. Pastan, Mol. Cell. Biol. (2000) 20(8):2902)。已经提出，将针对表达间皮素的癌细胞的、基于抗体的靶向疗法用于治疗肺癌、卵巢癌和胰腺癌。Mab K1是被描述的第一种针对膜-结合的间皮素多肽的抗体(Chang, K., 等人, Int. J. Cancer, (1992) 50(3):373)。通过免疫小鼠，制备Mab K1。由于该抗体的低亲和力和差的内化率，认为由与化学修饰的截短形式的假单胞菌外毒素A相连的Mab K1组成的免疫毒素不适用于临床开发 (Hassan, R., 等人, J. Immunother. (2000) 23(4):473; Hassan, R., 等人, Clin. Cancer Res. (2004) 10(12 Pt 1): 3937)。随后，开发了具有更高亲和力的单链抗体，包括SS1-(dsFv)-PE38，其表现出在体外杀死肿瘤细胞的活性 (Hassan, R., 等人, Clin. Cancer Res. (2002) 8(11): 3520)以及在表达人间皮素的肿瘤的鼠模型中的效力 (Fan, D., 等人, Mol. Cancer Ther. (2002) 1(8): 595)。这些数据证实了间皮素是开发用于治疗多种癌症的免疫疗法的一种有吸引力的靶标。已经证实，SS1-(dsFv)-PE38具有快速的血液清除率，且报道了通过聚乙二醇化融合蛋白来增加分子量的尝试 (Filpula, D., 等人, Bioconjugate Chem. (2007) 18(3): 773)。MS-1、MS-2和MS-3是结合间皮素的抗体，它们在细胞表面处引起免疫效应活性，这是由于它们的人IgG1 同种型和内化进表达间皮素的细胞中(WO 2006/099141 A2)。这些抗体之一，即未缀合的、嵌合的(小鼠/人) IgG1抗-间皮素抗体MORAb 009，目前正在临床试验中测试用于治疗胰腺癌的治疗效果。假定的MORAb 009作用机理是，触发免疫效应功能诸如ADCC和功能阻断。具有改善的与攻击性癌症（诸如卵巢癌、胰腺癌和肺癌）做斗争的效力的新疗法是非常合乎需要的，并代表着本领域的进展。这样，本专利技术公开了新的免疫缀合物组合物，其可用于治疗、预防和/或诊断间皮素相关病症，例如癌症。
技术实现思路
本专利技术涉及免疫缀合物，所述免疫缀合物包含结合间皮素的抗体（例如，单克隆抗体）或其片段，所述抗体或其片段缀合到细胞毒性剂（例如，美坦辛类（maytansinoid）或其衍生物）上，且/或所述免疫缀合物与一种或更多种额外的抗癌剂共同施用或共同配制。本专利技术的免疫缀合物可以用于治疗和/或诊断和/或监测间皮素相关病症，例如癌症。本专利技术的一个目的是，提供免疫缀合物，所述免疫缀合物包含：对间皮素前体多肽的40 kDa C-端胞外部分是高度选择性的且在有癌抗原125 (CA125; MUC16)存在下不结合间皮素的抗体或其抗原结合抗体片段或其变体，和效应物部分。在PCT/EP2008/009756中，已经描述了间皮素抗体的具体性质，且在本专利技术的一个方面，它们的在有CA125存在下特异性地与间皮素发生免疫反应的特殊能力与细胞毒性剂（例如美坦辛类）缀合的组合，会提供胜过功能阻断抗体的提高的效能，所述功能阻断抗体与CA125竞争间皮素结合。在一个方面，本专利技术的抗体或其片段是IgG抗体或IgG片段。所述抗体或片段也可以是IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgM、IgD、IgE、IgA或IgM抗体、Fab 片段、F(ab')2 片段、scFv 片段、Fv 片段、双特异抗体、直链抗体、单链抗体、生物特异性的抗体、多特异性的抗体或嵌合的抗体(例如包含移植到人或非人抗体结合区上的人抗体支架，或移植到人或非人抗体结合区上的非人抗体支架)。所述嵌合的抗体可以包括，例如，来自非人来源（例如，牛、小鼠、美洲驼羊、骆驼或兔）的抗体支架区。关于抗体工程化的其它信息，可以参考文献，例如，Holliger和Hudson, Nature Biotechnology, (2005年9月) 23: 1126-1136，它通过引用并入本文。前述片段可以从免疫球蛋白得到，或通过合适的方式（例如重组表达）以片段形式制备。本专利技术的抗体或抗体片段也可以是人源化的，其中所述CDR序列或区域(例如CDR1、CDR2、CDR3)可以是非人的，例如鼠的。本专利技术的抗体或抗体片段，或包含所述抗体或片段的组合物，可以包括缀合到抗体或其片段上的细胞毒性剂。在一个方面，所述细胞毒性剂是美坦辛类或其衍生物，但是，也提供了其它细胞毒性剂，它们可以包括，例如，和其它细胞毒性剂，例如，aplidin、auristatin、阿扎立平、阿那曲唑、氮胞苷、博来霉素、硼替佐米、苔藓抑素-1、白消安、刺孢霉素、喜树碱、10-羟基喜树碱、卡莫司汀、西乐葆、苯丁酸氮芥、顺铂、伊立替康(CPT-I 1)、SN-38、卡铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、多西他赛、更生霉素、道诺霉素葡萄糖醛酸苷、柔红霉素、地塞米松、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫缀合物，其包含细胞毒性剂和含有对间皮素(SEQ ID NO:36)特异性的抗原‑结合区的人或人源化的抗体或其功能片段，其中所述抗体或其功能片段识别间皮素的表位，所述表位未被癌抗原125 (CA125)掩蔽。

【技术特征摘要】
2009.04.29 EP 09005909.81.一种免疫缀合物，其包含细胞毒性剂和含有对间皮素(SEQ ID NO:36)特异性的抗原-结合区的人或人源化的抗体或其功能片段，其中所述抗体或其功能片段识别间皮素的表位，所述表位未被癌抗原125 (CA125)掩蔽。2.根据权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述细胞毒性剂是美坦辛类或其衍生物。3.根据权利要求2所述的免疫缀合物，其中所述美坦辛类是DM4。4.根据权利要求1-3中任一项的免疫缀合物，其中所述抗体或其功能片段和所述细胞毒性剂通过可裂解的连接物连接。5.根据权利要求4所述的免疫缀合物，其中所述可裂解的连接物是SPDB连接物。6.根据权利要求1-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：A卡纳特，K贝尔赫斯特，I海斯勒，CC科皮茨，J舒马歇，
申请(专利权)人：拜耳知识产权有限责任公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE