HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用制造技术

本发明专利技术公开了HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用，并提供了一组HPSE基因表达量检测引物，包括上游引物HPSE‑F和下游引物HPSE‑R，序列分别如SEQ ID NO.1~2所示。本发明专利技术研究显示，猪体内HPSE基因表达量与PRRSV感染息息相关，HPSE基因编码的乙酰肝素酶（Heparanase）通过调节细胞膜上硫酸乙酰肝素表达量，进而调节PRRSV释放和感染效率；当HPSE表达量低时，猪对PRRSV具有抗性，反之易感。HPSE基因可以作为一种新型的判定PRRSV易感性或抗性的标准，为鉴别猪对PRRSV易感性以及PRRSV抗性猪的筛选和培育奠定了坚实的基础，对猪蓝耳病的防控具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药
，具体地，涉及HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），俗称蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive andrespiratory syndrome virus，PRRSV）引起，于1987年最早出现在美国，随后在欧洲出现报道。我国于1996年由郭宝清等首次分离到PRRSV，将分离毒株命名为CH-1a，证实了该病在我国存在。早在1992年，世界动物卫生组织（Office International Des Epizooties，OIE）就将该病列为B类传染病。目前，PRRS是养猪业中最重要的传染病之一，在全球对养猪业造成巨大的经济损失。2005年，PRRS对美国养猪业造成的经济损失高达56,000万美元，而现在，每年损失估计将高达66,400万美元。PRRS几乎分布在所有的养猪国家。猪感染PRRSV后，一般会继发细菌如副猪嗜血杆菌、链球菌等感染。在临床上，PRRS与猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2，PCV-2）混合感染病例较多。2006年，我国大部分省份及越南爆发了猪高热病（Porcine high fever syndrome，PHFS），给养猪业造成了巨大的经济损失，此病是由变异的PRRSV引起，命名为高致病型猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus，HP-PRRSV）。HP-PRRSV特征为高热、高致病性及高死亡率。目前，农业部已将该病列入重大动物疫病强制免疫计划。PRRSV的防控是目前我国乃至世界的难题。PRRSV难于防控主要表现在以下几方面：（1）嗜巨噬细胞性和免疫抑制性疾病，PRRSV主要感染猪的肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages，PAMs），PAMs是免疫细胞，破坏PAMs，从而破坏机体免疫系统，从而引起免疫抑制；（2）抗原变异性，目前PRRSV变异较快，弱毒疫苗的使用是促使病毒变异的一个原因，最近有文献报道，美国出现了蓝耳新毒株NADC30，而我国也分离到类似美国的新毒株，命名为NADC30-like，而另有文献报道从猪场中分离到与疫苗毒基因组高度同源的PRRSV致病毒株，且毒力增强，分析有可能是疫苗毒反强或重组并散毒；（3）疫苗没有交叉保护力，目前市场上PRRSV疫苗几乎无交叉保护力，不同毒株间不交叉保护力；（4）抗体依赖性增强，PRRSV的感染会刺激机体产生抗体，但低效价的抗体不但不能中和病毒，反而对病毒的增殖有促进作用；（5）病毒持续性感染，PRRSV感染后，能够长时间在猪体内检测到病毒血症，PRRSV在体内持续时间长达5个月；（6）混合感染，目前临床上多见蓝耳与其他疾病混合感染，特别是圆环病毒、副猪嗜血杆菌、猪肺疫等与PRRSV的混合感染，使PRRSV的防控难上加难。目前研究显示，PRRSV感染靶细胞并在胞内大量复制后，需从细胞膜表面释放出来，这时膜上的硫酸乙酰肝素（Heparan sulfate，HS）会与病毒粒子相互黏连，抑制病毒粒子释放。故若能找到调控HS的基因即可调节PRRSV释放，影响PRRSV感染，从而可针对此基因开展新的猪蓝耳病防控技术。并且，若能找到调控HS的基因，还可以以此基因作为猪对PRRSV抗性或易感性的判定标准，筛选猪对蓝耳病病毒的抗性或易感性，这可能是未来蓝耳病防治的重要途径之一，通过建立筛选PRRSV抗性或易感性猪的方法，为PRRSV抗病育种奠定基础。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有猪蓝耳病防治技术的缺陷和不足，提供乙酰肝素酶基因（Heparanse，HPSE）在筛选抗蓝耳病猪中的应用。本专利技术研究表明，PRRSV感染PAMs和Marc-145细胞后，通过NF-κB信号通路促进HPSE基因表达，提高乙酰肝素酶活性，从而对细胞膜表面硫酸乙酰肝素HS进行切割，防止PRRSV病毒颗粒粘附在HS上，以促进PRRSV病毒颗粒释放，提高PRRSV感染效率。即HPSE基因通过切割细胞表面HS进而提高PRRSV感染率，HPSE基因的表达量与PRRSV的复制息息相关，有望成为一种新型的筛选抗蓝耳病猪的方法，对PRRSV抗性猪的培育具有很好的临床应用价值。本专利技术的目的是提供HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用。本专利技术的另一目的是提供一种提高猪对蓝耳病毒抗性的方法。本专利技术的再一目的是提供HPSE基因在提高猪对蓝耳病毒抗性以及在制备提高猪对蓝耳病毒抗性的药物或制剂方面的应用。本专利技术的再一目的是提供HPSE基因在培育对蓝耳病毒具有抗性的猪品种方面的应用。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现。HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用。所述猪HPSE基因的序列号为NM_001146130.2。所述蓝耳病毒包括经典毒株和高致病性毒株。一种鉴别评价猪对蓝耳病毒易感性的方法（也即上述应用的方法），是检测猪体内HPSE基因的表达水平，根据HPSE基因的表达水平鉴别猪对蓝耳病毒（PRRSV）是具有抗性还是具有易感性。所述鉴别的标准是：HPSE表达量低时，猪对蓝耳病毒（PRRSV）具有抗性；反之具有易感性。具体操作时，HPSE表达量的高低以本领域技术中猪体内HPSE表达量的普遍水平为依据。这里所说的高低是相对的，根据HPSE表达量较高或较低，从而判定猪是否可能对PRRSV具有抗性。另外，本专利技术对于HPSE基因表达量的检测方法不作限制。可以是本领域内任意的基因表达量检测方法。作为一种可优选的实施方案，本专利技术提供了一种检测猪HPSE基因表达量的引物组，所述引物组包括上游引物HPSE-F和下游引物HPSE-R，序列分别如SEQ ID NO.1~2所示。另外，以下所述的应用均应在本专利技术的保护范围之内：HPSE基因在提高猪对蓝耳病毒抗性方面的应用。HPSE基因在制备提高猪对蓝耳病毒抗性的药物或制剂方面的应用。HPSE基因在筛选和/或培育对蓝耳病毒具有抗性的猪品种方面的应用。HPSE基因表达抑制剂在提高猪对蓝耳病毒抗性方面的应用。HPSE基因表达抑制剂在制备提高猪对蓝耳病毒抗性的药物或制剂方面的应用。本专利技术经过大量的研究和探索，首次发现猪体内HPSE基因可以通过切割细胞表面HS进而提高PRRSV感染率；PRRSV感染靶细胞后促进HPSE基因表达，提高乙酰肝素酶活性，从而对细胞膜表面硫酸乙酰肝素HS进行切割，防止PRRSV病毒颗粒粘附在HS上，以促进PRRSV病毒颗粒释放。即HPSE基因表达量与PRRSV感染息息相关，当HPSE表达量低时，猪对PRRSV具有抗性，反之易感。本专利技术还通过体外siRNA干扰和过表达实验充分分析了HPSE基因与PRRSV复制的关系。另外还研究了HPSE基因调节PRRSV复制的分子机制，即HPSE基因表达的乙酰肝素酶通过迁移到细胞膜上切割HS，抑制PRRSV颗粒粘附在HS上，促进其释放。另外，本专利技术选用了不同品种猪研究HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用。分别选取我国地方品种通本文档来自技高网...

【技术保护点】
HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用。

【技术特征摘要】
1.HPSE基因在筛选抗蓝耳病猪中的应用。2.一种筛选抗蓝耳病猪的方法，其特征在于，是检测猪体内HPSE基因的表达水平，根据HPSE基因的表达水平鉴别猪对蓝耳病毒是具有抗性还是具有易感性。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述鉴别的标准是：HPSE表达量低时，猪对蓝耳病毒具有抗性；反之具有易感性。4.一种检测猪HPSE基因表达量的引物组，其特征在于，所述引物组包括上游引物TRE...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭春和，刘小红，陈瑶生，朱振邦，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44