特异于钙粘素‑17的抗体制造技术

本公开提供了抗体，包括分离的单克隆抗体,其以高亲和性特异性地结合钙粘素‑17。还提供了编码钙粘素‑17抗体的核酸分子、用于表达钙粘素‑17抗体的表达载体、宿主细胞和方法。还提供了包含钙粘素‑17抗体的双特异性分子和药物组合物。公开了用于检测钙粘素‑17的方法，以及用于治疗各种癌症、包括结肠直肠癌的方法。

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2010年4月20日、专利技术名称为“特异于钙粘素-17的抗体”的中国专利技术质粒申请No.201080023755.3的分案申请。与相关申请的交叉引用本申请根据35USC 119(e)要求于2009年4月20日递交的美国申请61/170,980的利益，通过引用将其全部并入。
本专利技术一般性地涉及免疫学和分子生物学领域。更具体地，本文提供了抗细胞粘着分子钙粘素-17的抗体和其它治疗性蛋白，编码此类抗体和治疗性蛋白的核酸，用于制备本专利技术的单克隆抗体和其它治疗性蛋白的方法，以及用于治疗疾病(例如由钙粘素-17的表达/活性介导的，和/或与其配体的异常表达/活性相关的)的方法。
技术介绍
钙粘素是钙依赖性的细胞粘着分子。在连接的细胞中，它们优选地以嗜同性的方式与其自身相互作用；因此，钙粘素可促成对异质细胞类型的分选。钙粘素分子钙粘素-17也已知为肝-肠钙粘素或肠肽相关转运子HPT-1。钙粘素-17可在肝和肠的形态组织中起作用。其还参与肠的肽转运。钙粘素-17结构的特征在于，其具有含有7个钙粘素结构域的细胞外结构域、单一的疏水性跨膜结构域和短的C末端胞质尾区。仅已知一种人钙粘素-17同种型，即Genbank登录号NM_004063。钙粘素-17在SWISS-PROT和trEMBL数据库(由瑞士生物信息研究所(SIB)和欧洲生物信息研究所(EBI)所有，可在www.expasy.com获得)中具有登录号Q 12864。小鼠的钙粘素-17直向同源物(Q9R100)与人钙粘素-17显示出76％的同一性。根据SWISS-PROT，钙粘素-17在胃肠道和胰管中表达。其未在肾、肺、肝、脑、肾上腺或皮肤中被检测到。钙粘素-17的表达已在下列中被报导：胃癌(参见，例如Ito et al.，Virchows_Arch.2005Oct；447(4):717-22；Su et al，Mod Pathol.2008 Nov；21(11): 1379-86；Ko et al.，Biochem Biophys Res Commun.2004Jun25；319(2):562-8；和Dong et al.，Dig Dis Sci 2007Feb；52(2):536-42)，胰腺癌和结肠直肠癌(Su et al.，Mod Pathol.2008Nov；21(11):1379-86)以及肝细胞癌(Wong et al.，Biochem Biophys Res Commun.2003Nov 21；311(3):618-24)。国际专利申请WO2008/026008公开了钙粘素-17作为结肠直肠癌的标记物以及作为治疗性抗体和其它药物试剂的生物学靶点。专利技术概述本专利技术提供了针对钙粘素-17的抗体、编码此类抗体和治疗性蛋白的核酸；用于制备抗钙粘素17单克隆抗体和其它治疗性蛋白的方法；和用于治疗疾病的方法，所述疾病为例如钙粘素-17介导的病症，例如人类的癌症，包括结肠直肠癌。因此，本专利技术提供了分离的单克隆抗体，尤其是鼠的、嵌合的、人源化的和全人单克隆抗体，所述单克隆抗体与钙粘素-17结合并且显示出一种或多种所需的功能特性。此类特性包括例如，与人类钙粘素-17的高亲和力特异性结合。还提供了使用本专利技术的抗体、蛋白和组合物治疗多种由钙粘素-17介导的疾病的方法。本专利技术提供了结合人钙粘素-17上的表位的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分、抗体片段或抗体模拟物，所述表位被含有包含选自SEQ ID NO:38，35，36，37，39，40，41，42，43，44，45和46所示的氨基酸序列的重链可变区和包含选自SEQ ID NO:49，47，48，50，51，52，53，54，55，56，57和58所示的氨基酸序列的轻链可变区的抗体识别。在一些实施方式中，所述分离的抗体是IgG1，IgG2，IgG3或IgG4同种型的全长抗体。在一些实施方式中，本专利技术的抗体选自：完整抗体、抗体片段、人源化抗体、单链抗体、免疫缀合物、去岩藻糖化(defucosylated)的抗体，和双特异性抗体。抗体片段可以选自：UniBody、结构域抗体和纳米抗体(Nanobody)。在一些实施方式中，本专利技术的免疫缀合物包含治疗剂。在本专利技术的另一个方面，治疗剂是细胞毒素或放射性的 同位素。在一些实施方式中，本专利技术的抗体选自：Affibody、DARPin、Anticalin、Avimer、Versabody和Duocalin。在备选实施方式中，本专利技术的组合物包含分离的抗体或抗原结合部分和药学上可接受的载体。在其它方面，本专利技术的抗体是包含根据本专利技术的分离的抗体或其抗原结合部分和药学上可接受的载体的组合物。在一些实施方式中，本专利技术包括编码结合人类钙粘素-17上的表位的分离的抗体或抗原结合部分的重链或轻链的分离的核酸分子。本专利技术的其它方面包括包含此类核酸分子的表达载体和包含此类表达载体的宿主细胞。在一些实施方式中，本专利技术提供了用于制备抗钙粘素-17抗体的方法，所述方法包括步骤：获得包含编码本专利技术的抗体的一个或多个核酸分子的宿主细胞；使所述宿主细胞在宿主细胞培养物中生长；为宿主细胞培养物提供所述一个或多个核酸分子被表达的条件；和从宿主细胞或宿主细胞培养物中回收抗体。在其它实施方式中，本专利技术涉及用于治疗或预防与表达钙粘素-17的靶细胞相关的疾病的方法，所述方法包括步骤：向受试者施用有效治疗或预防该疾病的量的抗钙粘素-17抗体或其抗原结合部分。在一些方面，通过本专利技术的抗体或其抗原结合部分治疗或预防的疾病是人类的癌症。在一些实施方式中，通过本专利技术的抗体治疗或预防的疾病是结肠直肠癌。在其它实施方式中，本专利技术涉及用于治疗或预防与表达钙粘素-17的靶细胞相关的疾病的抗钙粘素-17抗体或其抗原结合部分。在一些方面，通过本专利技术的抗体或其抗原结合部分治疗或预防的疾病是人类的癌症。在一些实施方式中，通过本专利技术的抗体治疗或预防的疾病是结肠直肠癌。在其它实施方式中，本专利技术涉及抗钙粘素-17抗体或其抗原结合部分用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防与表达钙粘素-17 的靶细胞相关的疾病。在一些方面，通过本专利技术的药物治疗或预防的疾病是人类的癌症。在一些实施方式中，通过本专利技术的药物治疗或预防的疾病是结肠直肠癌。在其它实施方式中，本专利技术是结合人类钙粘素-17上的表位的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分、抗体片段或抗体模拟物，所述表位被含有重链可变区和轻链可变区的抗体识别，所述重链可变区和轻链可变区选自：SEQ ID NO:35所示的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:47所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:36所示的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:48所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:37所示的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:48所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:38所示的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:49所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:39所示的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:50所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:40所示的重链可变区氨基酸序列和SEQ ID NO:51所示的轻链可变区氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
结合人钙粘素‑17上的表位的分离的抗体，所述表位被包含重链可变区和轻链可变区的抗体所识别，其中：所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:38,35,36,37,39,40,41,42,43,44,45和46中所示的氨基酸序列；且所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO：49,47,48,50,51,52,53,54,55,56,57和58中所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
2009.04.20 US 61/170,9801.结合人钙粘素-17上的表位的分离的抗体，所述表位被包含重链可变区和轻链可变区的抗体所识别，其中：所述重链可变区包含选自SEQ ID NO:38,35,36,37,39,40,41,42,43,44,45和46中所示的氨基酸序列；且所述轻链可变区包含选自SEQ ID NO：49,47,48,50,51,52,53,54,55,56,57和58中所示的氨基酸序列。2.包含重链可变区和轻链可变区的分离的抗钙粘素-17抗体，其中所述重链可变区和轻链可变区选自:SEQ ID NO:38中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:49中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:39中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:50中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:40中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:51中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:35中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:47中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:36中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:48中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:37中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:48中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:41中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:52中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:42中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:53中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:40中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:54中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:40中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:55中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:43中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:56中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:44中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:55中所示的轻链可变区氨基酸序列；SEQ ID NO:45中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:57中所示的轻链可变区氨基酸序列；和SEQ ID NO:46中所示的重链可变区氨基酸序列以及SEQ ID NO:58中所示的轻链可变区氨基酸序列。3.权利要求1或2的抗体,其中所述抗体为IgGl,IgG2,IgG3或IgG4同种型的全长抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·罗尔夫，J·A·特雷特，
申请(专利权)人：牛津生物疗法有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB