一种叶黄素制剂的质量检测方法技术

本发明专利技术公开了一种叶黄素制剂的质量检测方法，包括以下步骤：a、取叶黄素对照品，加流动相制成对照品溶液；b、叶黄素制剂加醇溶液，超声，萃取，收集萃取液，减压回收萃取液至干，定容，即得供试品溶液；c、高效液相色谱法测定，十八烷基健合硅胶填料的柱子，进样得到色谱图；d、计算总峰面积，以叶黄素对照品外标法计算叶黄素含量。本发明专利技术采用了优化的超声频率与超声功率提取方法，增加叶黄素溶出速度，有助于叶黄素溶出和分散均匀，对于存在干扰、微囊包埋的样品提高了分析准确度。测定结果准确可行。本发明专利技术采用醇溶液对样品进行充分溶解后，再用有机溶剂进行萃取，去除大部分杂质，保证结果的准确性，又对HPLC仪器起到保护作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种叶黄素制剂的质量检测方法。
技术介绍
叶黄素是类胡萝卜素之一，属光和色素，分子式为C40H56O2，人体自身不能够合成，完全依赖饮食摄取。叶黄素是构成人眼视网膜黄斑区域的主要色素成分，对维持人体正常视觉及改善视网膜黄斑色素密度起着十分重要的作用，它的抗氧化作用能保护视网膜，并可吸收大量蓝光，保护眼睛不受光线损害。通过一系列的医学研究，类胡萝卜素已被建议用作癌症预防剂，生命延长剂，溃疡抑制剂，心脏病发作与冠状动脉疾病的抑制剂。经研究，每天服用12mg叶黄素，能增加血液中叶黄素水平，降低老年性黄斑退化的危险，降低蓝光对视网膜感受细胞的伤害，有效预防电脑或电视显示器射线对人眼黄斑的损伤。因此，对叶黄素制剂进行准确定量检测显得尤为重要。对现有的技术文献检索发现，国家标准（GB/T 23209-2008）公布了奶粉中叶黄素的测定，针对奶粉中的叶黄素含量测定，样品前处理需在-4℃离心机中离心、氮气浓缩仪、色谱柱采用YMCTM Carotenoid色谱柱，对照品储备液需贮存在-80℃冰箱中，这个条件对样品处理、对照品储备液、色谱柱要求高，适应性不广。 GB 26405-2011 《食品安全国家标准 食品添加剂 叶黄素 》公布添加剂叶黄素及商品化叶黄素中叶黄素的含量测定方法，称取样品，直接用流动相溶解，并定容，即得，如果叶黄素是微囊化颗粒或叶黄素制剂中有多种成分，存在叶黄素溶出不完全，那么此方法不适用。张关顺等《HPLC法测定叶黄素的含量》，未明确样品的前处理。李宁等《HPLC同时测定万寿菊花中叶黄素及玉米黄素的含量》，样品是万寿菊干法适量，研磨成粉末，过100目筛，加入正己烷-无水乙醇（2∶1）60mL,超声振荡提取10min，加入40%的氢氧化钾-甲醇溶液4mL，60℃水浴加热，回流30min后阴暗处放置1h，加入60mL水，用正己烷萃取3次，每次60mL，合并正己烷相，用旋转蒸发器减压浓缩，用流动相溶解于50ml棕色容量瓶中，用流动相定容，摇匀，得供试品溶液，这种方法主要针对草本植物中叶黄素含量测定。陈洁丽等《高效液相色谱法测定叶黄素的含量》，样品采用95%乙醇溶解并定容至刻度即得，彭科怀等《HPLC法测定保健食品中叶黄素的含量》，取样品约1.0g于10mLA色管中加无水乙醇至刻度，在超声波清洗仪上清洗20min，冷却后，补加无水乙醇至刻度，混匀，即得。朱惠芬等《HPLC法测定维视康胶囊中叶黄素的含量》，取样品0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入25mL流动相，称重，超声30min,取出，放冷至室温后，称重，用流动相补足减失的重量，精密吸取续滤液1mL，用流动相定容至50mL，即得。以上样品处理方法对于样品中有其它干扰成分存在时，此方法适应性及准确度不佳。林宏琳等《对照品替代法用于缓解视疲劳片中叶黄素含量测定的研究》，精密称取匀质样品粉末约0.1g于50mL锥形瓶中，添加苏丹I对照品储备液（0.1mg·mL-1）5.0mL为内标，加入纯化水2.5mL，在56℃超声（250W，40kkHz）3min，取出放冷，加入二氯甲烷溶液5mL，振摇30s，然后加入含0.1%BHT的乙腈溶液30mL，超声（250W，40kkHz）处理10min，放冷，移入50mL棕色量瓶中，以含0.1%BHT的乙腈溶液定容至刻度，摇匀，即得。此方法样品前处理采用乙腈溶液作为处理溶剂，试剂对操作人员存在安全性隐患，不适应于常规产品检验。诸多文献均报道叶黄素或含叶黄素产品的含量测定方法，样品前处理方法，有的复杂，难以应用于生产活动中，有的简单，对于样品中存在干扰性成分影响结果的准确度，有的采用对操作人员存在安全隐患的试剂。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种分散均匀、干扰小、操作简便、准确度高的叶黄素制剂的质量检测方法。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种叶黄素制剂的质量检测方法，包括以下步骤：a、取叶黄素对照品，加流动相正己烷-乙酸乙酯制成定量用对照品溶液；b、叶黄素制剂加醇溶液，超声，醇溶液用有机溶剂萃取，收集萃取液，减压回收萃取液至干，用流动相定容，即得供试品溶液；c、依据高效液相色谱法测定，十八烷基健合硅胶填料的柱子，正己烷-乙酸乙酯=75:25为流动相，检测波长为446nm，流速1.5ml/min，取对照品溶液和供试品溶液分别进样，得到色谱图；d、计算供试品溶液中与对照品相应的色谱峰的总峰面积，以叶黄素对照品外标法计算叶黄素含量。在上述叶黄素制剂的质量检测方法中，步骤b所述醇溶液优选为乙醇溶液，本专利技术在样品制备过程中，采用了醇溶液对叶黄素制进行溶解，优选是乙醇溶液，对样品进行溶解，这样可以避免固体样品进行测定过程中由于叶黄素成分包裹在固体中，容易导致样品的不均匀，使测定结果偏低。在上述叶黄素制剂的质量检测方法中，步骤b中所述乙醇溶液的体积浓度优选为20%～80%，可以避免溶剂进行核保取时时候导致的乳化现象，分层迅速，层界面清晰：也避免了两相的混溶，节省了操作时间及方便了萃取的操作。最佳体积浓度为70%。在上述黄素制剂的质量检测方法中，步骤b中叶黄素制剂与醇溶液体积为1∶50～1∶120，优选为1∶00。在上述叶黄素制剂的质量检测方法中，超声频率：20kHz～40kHz，超声功率：100W～300W，优选的超声频率：25kHz，超声功率：200W。尽管超声常用的频率是：20～40kHz，功率是：100W～300W，但是超声频率及功率对样品充分溶解及分散是有所不同，超声的主要作用是空化效应，空化能否发生及发生的强弱与超声频率及功率有关，只有超声频率小于气泡的自然共振频率时，泡核才会闭灭，从而发生超声空化。本专利技术探索超声频率及超声功率对叶黄素制剂溶解效果，发现优选的超声频率是：25kHz，超声功率是：200W，在此条件下叶黄素溶出最符合理论值。在上述叶黄素制剂的质量检测方法中，步骤b中的超声时间优选：5～20min。在上述叶黄素制剂的质量检测方法中，步骤b中的有机溶剂是二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷或乙酸乙酯。在上述叶黄素制剂的质量检测方法中，步骤b中超声后用乙醇溶液1:1体积量的有机溶剂萃取2～5次，有助于充分将叶黄素萃取出来，提高了分析的准确度。优选萃取的次数3次。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：1.在样品制备过程中，采用了优化的超声频率与超声功率提取方法，利用超声波的空化效应、热效应及机械效应等增强溶剂对样品的穿透力，增加叶黄素溶出的速度，有助于样品中叶黄素的溶出和分散均匀，对于存在干扰、微囊包埋的样品提高了分析的准确度。2.本专利技术适用性广，针对叶黄素特点，选择超声结合有机溶剂相似相溶原理，使样品中的叶黄素全部溶解到有机相中，使得测定结果准确，检测方法可行。3.本专利技术检测方法的叶黄素样品是微囊化样品，采用醇溶液对样品进行充分溶解后，再用有机溶剂进行萃取，去除大部分杂质，即保证结果的准确性，又对HPLC仪器起到保护作用。具体实施方式样品为叶黄素制剂，叶黄素含量为0.80g/100g。实施例1：实施本专利技术叶黄素制剂的质量检测方法方案：取0.3g叶黄素制剂，加30%乙醇15ml，20kHz,100W超声5min，用二氯甲烷萃取2次，收集二氯甲烷液，减压回收溶剂至干，用流动本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种叶黄素制剂的质量检测方法，其特征在于包括以下步骤：a、取叶黄素对照品，加流动相正己烷‑乙酸乙酯制成定量用对照品溶液；b、叶黄素制剂加醇溶液，超声，醇溶液用有机溶剂萃取，收集萃取液，减压回收萃取液至干，用流动相定容，即得供试品溶液；c、依据高效液相色谱法测定，十八烷基健合硅胶填料的柱子，正己烷‑乙酸乙酯=75:25为流动相，检测波长为446nm，流速1.5ml/min，取对照品溶液和供试品溶液分别进样，得到色谱图；d、计算供试品溶液中与对照品相应的色谱峰的总峰面积，以叶黄素对照品外标法计算叶黄素含量。

【技术特征摘要】
1.一种叶黄素制剂的质量检测方法，其特征在于包括以下步骤：a、取叶黄素对照品，加流动相正己烷-乙酸乙酯制成定量用对照品溶液；b、叶黄素制剂加醇溶液，超声，醇溶液用有机溶剂萃取，收集萃取液，减压回收萃取液至干，用流动相定容，即得供试品溶液；c、依据高效液相色谱法测定，十八烷基健合硅胶填料的柱子，正己烷-乙酸乙酯=75:25为流动相，检测波长为446nm，流速1.5ml/min，取对照品溶液和供试品溶液分别进样，得到色谱图；d、计算供试品溶液中与对照品相应的色谱峰的总峰面积，以叶黄素对照品外标法计算叶黄素含量。2.如权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，步骤b所述醇溶液为乙醇溶液；乙醇溶液的体积浓度为20～80%。3.如权利要求2所述的质量检测方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾荣华，罗明琍，李金华，刘翠红，宋晓燕，袁诚，王小妹，李益，
申请(专利权)人：广州白云山汉方现代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44