抗c-Met抗体和抗c-Met抗体-细胞毒性药物偶联物及其医药用途制造技术

本发明专利技术涉及抗c-Met抗体和抗c-Met抗体-细胞毒性药物偶联物及其医药用途。具体地，本发明专利技术涉及一种抗c-Met抗体，c-Met的抗原结合片段，包含所述抗c-Met抗体CDR区的嵌合抗体、人源化抗体，及其抗体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂化合物，以及包含人源化抗c-Met抗体和抗原结合片段及其抗体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂化合物的药物组合物，以及其作为抗癌药物的用途，尤其在制备用于治疗c-Met介导的疾病或病症的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术公开了一种抗c-Met抗体或其抗原结合片段，包含所述抗c-Met抗体CDR区的嵌合抗体、人源化抗体，及抗c-Met抗体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂化合物，以及包含人c-Met抗体或其抗原结合片段及其抗体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂化合物的药物组合物，以及其作为抗癌药物的用途。尤其涉及一种人源化的抗c-Met抗体及抗c-Met抗体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂化合物，在制备用于治疗c-Met介导的疾病或病症的药物中的用途。
技术介绍
近年来分子生物学和肿瘤药理学研究表明，酪氨酸激酶(Protein Tyrosine Kinases,PTKs)相关的细胞信号转导通路在肿瘤的形成和发展中发挥了极其重要的作用，超过50％的原癌基因和癌基因产物都具有酪氨酸激酶活性。c-Met原癌基因属于PTKs家族中Ron亚族，其编码的c-Met蛋白是肝细胞生长因子/离散因子(Hepatocyte Growth Factor/Scatter Factor,HGF/SF)的高亲和性受体。HGF/c-Met信号通路与血管新生和肿瘤生长过程密切相关，其持续激活是组织细胞癌变或癌细胞增殖亢进的重要原因，抑制该通路已成为肿瘤靶向治疗的新手段。c-Met原癌基因位于人类第7号染色体长臂(7q31)，大小超过120kb，编码分子量约150kD的c-Met蛋白前体，经局部糖基化生成一个170kD的糖蛋白，该糖蛋白进一步剪切为亚基(50kDa)和亚基(140kDa)，以二硫键相连，形成成熟的c-Met蛋白受体。该异二聚体包含两条链，链有胞外区、跨膜区(也称膜伸展片段)和胞内区(包含细胞内酪氨酸激酶结合位点)。链只有胞外部分，但它是高度糖基化，通过二硫键附着于链上。两个亚基的胞外区域是相应配体的识别部位，胞内区域具有酪氨酸激酶活性。c-Met激活的机制分为三种：一是依赖HGF的激活机制，二是不依赖HGF激活机制，三是经过其他膜途径，例如通过透明质酸膜表面受体的CD44、粘附素以及RON信号传导途径等等。其中最常见的是依赖HGF的激活机制。HGF的N末端与c-Met结合，促进链上Tyr1234和Tyr1235二聚化和自磷酸化，C-末端附近的Tyr1349和Tyr1356磷酸化产生多个接头蛋白的结合位点，这些接头蛋白诱导了P13K/Akt、Ras/Mapk、c-Src和STAT3/5介导的下游信号的激活，引发不同细胞反应，如细胞生存和活动(与P13K/Akt通路密切相关)，肿瘤转移 和细胞增殖(主要由Ras/Mapk介导)。此外，c-Met与其它膜受体存在交联(cross-talk)，现已确知这种交联可促进肿瘤形成及转移，由于c-Met是导致肿瘤形成及转移的许多通路的交叉点，以c-Met为靶标可相对较容易地实现对许多通路的同时干扰，c-Met成为抗肿瘤生成和转移治疗的一个有希望的靶点。抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头化合物与具有生物活性的细胞毒素相连，充分利用了抗体对肿瘤细胞特异或高表达抗原结合的特异性和细胞毒素的高效性，避免对正常细胞的毒副作用。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响。ADC药物由抗体(靶向)，接头和毒素三部分组成。其中，好的靶点(抗体部分)决定了ADC药物的特异性，这不仅包括特异靶向结合，还包括有效的内吞。目前针对c-Met激酶靶点抑制剂主要有三类：HGF和c-Met生物拮抗剂、HGF和c-Met抗体，以及小分子c-Met抑制剂。现有的临床结果表明，直接针对HGF,c-Met的抗体，或c-Met小分子抑制疗效不甚理想。针对c-Met的ADC药物可能是该靶点最有效的方法治疗肿瘤。目前，尚没有c-Met ADC药物临床研究。本专利技术首创抗c-Met抗体ADC药物，不仅保留了本专利技术抗c-Met抗体的抗体依赖性的细胞增殖抑制作用，同时又增加了潜在的细胞毒素药物的效应。而且因为其毒素靶向在肿瘤细胞内释放，药物毒副作用并没有随着疗效的增加而同步增大。本专利技术提供特异性结合人c-Met的人源化抗体和嵌合抗体，并且该人源化抗体和嵌合抗体特征在于具有高亲和力，高药效，有内吞功效，稳定性好和无c-Met激动活性等特点。在这些优良性能基础上，本专利技术同时还提供特异性结合人c-Met的抗体-细胞毒性药物偶联物或其可药用盐或溶剂化合物，不仅保留了本专利技术抗c-Met抗体的抗体依赖性的细胞增殖抑制作用，同时又增加了潜在的细胞毒素药物的效应和治疗疾病的广谱性。而且因为其毒素靶向在肿瘤细胞内释放(本专利技术抗c-Met抗体的内吞作用)，药物毒副作用并没有随着疗效的增加而同步增大。
技术实现思路
本专利技术提供一种特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其包含至少1个选自以下CDR区的序列或其突变序列：抗体重链可变区HCDR区序列：SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8；和抗体轻链可变区LCDR区序列：SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一种如上所述的c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含至少1个选自如下的HCDR区序列或其突变序列：SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一种如上所述的c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体轻链可变区包含至少1个选自如下的LCDR区序列或其突变序列：SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一种如上所述的c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体包含重链可变区序列SEQ ID NO:6(HCDR1)，SEQ ID NO:7(HCDR2)和SEQ ID NO:8(HCDR3)，或其突变序列，和轻链可变区序列SEQ ID NO:9(LCDR1)，SEQ ID NO:10(LCDR2)和SEQ ID NO:11(LCDR3)或其突变序列。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一种如上所述的c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述的CDR区突变序列为CDR区发生1-3个优化抗体活性的氨基酸突变，其中所述的HCDR2区突变序列优选为SEQ ID NO:12。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一种如上所述的c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述的c-Met抗体或其抗原结合片段为鼠源抗体或其片段。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一种如上所述的c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述的鼠源抗体重链可变区序列为：SEQ ID NO:4。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一种如上所述的c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述的鼠源抗体轻链可变区序列为：SEQ ID NO:5。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一种如上所述的c-Met抗体或其抗原结合片段，其中所述的鼠源抗体的-重链可变区为：SEQ ID NO:4，轻链可变区为：SEQ ID NO:5。在本专利技术一个优选的实施方案中，提供一本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性结合c‑Met受体的抗体或其抗原结合片段，其包含至少1个选自以下的CDR区序列或其突变序列：抗体重链可变区HCDR区序列：SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8；和抗体轻链可变区LCDR区序列：SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11。

【技术特征摘要】
2015.04.17 CN 20151018560231.特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其包含至少1个选自以下的CDR区序列或其突变序列：抗体重链可变区HCDR区序列：SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8；和抗体轻链可变区LCDR区序列：SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11。2.根据权利要求1所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体重链可变区包含至少1个选自如下的HCDR区序列或其突变序列：SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8。3.根据权利要求1所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体轻链可变区包含至少1个选自如下的LCDR区序列或其突变序列：SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:11。4.根据权利要求1-3任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的抗体包含重链可变区序列SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8，或其突变序列，和轻链可变区序列SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11或其突变序列。5.根据权利要求1-4任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的突变序列为CDR区发生1-3个优化抗体活性的氨基酸突变，其中HCDR2区突变序列优选为SEQ ID NO:12。6.根据权利要求1-5任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段为鼠源抗体或其片段。7.根据权利要求6所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的鼠源抗体重链可变区序列为：SEQ ID NO:4。8.根据权利要求6所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的鼠源抗体轻链可变区序列为：SEQ ID NO:5。9.根据权利要求6-8任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的鼠源抗体的重链可变区为：SEQ ID NO:4，轻链可变区为：SEQ ID NO:5。10.根据权利要求1-5任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其为嵌合抗体或人源化抗体或其片段。11.根据权利要求10所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化抗体重链可变区上的重链FR区序列，来源于人种系重链序列，优选人种系重链IGHV 3-33*01；其中所述重链FR区序列包含人种系重链IGHV 3-33*01的FR1，FR2，FR3区和FR4区的框架序列或其突变序列，优选所述突变序列为0-10个氨基酸的回复突变。12.根据权利要求11所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的人源化抗体包含选自SEQ ID NO:13-15所示的重链可变区序列或其变体。13.根据权利要求10所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述人源化抗体轻链可变区上的轻链FR区序列，选自人种系轻链序列，优选人种系轻链IGKV085或IGKV 4-1*01，其中所述轻链FR区序列包含人种系轻链IGKV085和IGKV 4-1*01的FR1，FR2，FR3区和FR4区的框架序列或其突变序列，优选所述突变序列为0-10个氨基酸的回复突变。14.根据权利要求13所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的人源化抗体包含选自SEQ ID NO:16-18所示的轻链可变区序列或其变体。15.根据权利要求10-14任一项的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，所述的人源化抗体包含选自SEQ ID NO:13-15的重链可变区序列和选自SEQ ID NO:16-18的轻链可变区序列。16.根据权利要求1-5和10-15任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其包含选自a)至c)任一的重链可变区序列和轻链可变区序列的组合：a)SEQ ID NO:13的重链可变区序列和SEQ ID NO:16的轻链可变区序列；b)SEQ ID NO:14的重链可变区序列和SEQ ID NO:17的轻链可变区序列；
\t或c)SEQ ID NO:15的重链可变区序列和SEQ ID NO:18的轻链可变区序列。17.根据权利要求10-16任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的人源化抗体的重链恒定区包含源自人源IgG1或其变体、人源IgG2或其变体、人源IgG3或其变体或人源IgG4或其变体的恒定区，优选包含人源IgG1或其变体或人源IgG2或其变体或人源IgG4或其变体的恒定区，更优选人源IgG2或其变体的恒定区。18.根据权利要求17所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其包含选自SEQ ID NO:23-25或与其具有至少90％同源性的全长重链序列。19.根据权利要求10-16任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其所述的人源化抗体的轻链恒定区包含选自人源κ或λ链或其变体的恒定区。20.根据权利要求19所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其包含选自SEQ ID NO:26-28或与其具有至少90％序列同源性的全长轻链序列。21.根据权利要求10-20任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段，其中所述的人源化抗体包含选自以下全长轻链序列和全长重链序列的组合：Ab-9:SEQ ID NO:23的重链序列和SEQ ID NO:26的轻链序列；Ab-10:SEQ ID NO:24的重链序列和SEQ ID NO:27的轻链序列；或Ab-11:SEQ ID NO:25的重链序列和SEQ ID NO:28的轻链序列。22.一种DNA分子，其编码根据权利要求1-21任一项所述的特异性结合c-Met受体的抗体或其抗原结合片段。23.一种表达载体，其含有根据权利要求22所述的DNA分子。24.一种用根据权利要求23所述的表达载体转化的宿主细胞，其中所述的宿主细胞优选为哺乳动物细胞，更优...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳建，张连山，陶维康，付雅媛，张玲，马动，崔东冰，王亚里，许建烟，梁金栋，章瑛，蒋贵阳，邱均专，孙自勇，查济平，魏京平，
申请(专利权)人：江苏恒瑞医药股份有限公司，上海恒瑞医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32