一种降钙素原蛋白的测定试剂及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种降钙素原蛋白的测定试剂及其制备方法，属于生化手段测试技术领域。包括R1试剂、R2试剂和降钙素原蛋白标准品，所述的R1试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、聚乙二醇；所述的R2试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒；所述的降钙素原蛋白标准品的主成分是降钙素原蛋白、磷酸盐缓冲液、牛血清蛋白和叠氮钠。将本申请应用于降钙素原蛋白的测定，具有快速灵敏、准确性好、稳定性好、操作简便等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种降钙素原蛋白的测定试剂及其制备方法，属于生化手段测试

技术介绍
感染是造成人类死亡最重要的因素，据世界卫生组织(WHO)统计数据显示，感染约占全球每年总体死亡率的25.5％(约1,500万人)。其中呼吸道感染是导致患者死亡最主要的感染性疾病，每年约造成430万人死亡。由于造成感染性疾病的临床症状和体征缺乏特异性，因此，临床上除了依靠血常规、胸部影像或者是微生物学检查来反映感染的真实情况，还借助于一些特殊的血清学检测项目指标来早期诊断感染，鉴别病原体类型，评估感染程度并有效指导抗菌药物的使用。降钙素原(PCT)是临床上采用较多的用于发现炎症，评估抗生素治疗效果和预后，评估SIRS的重症度(全身炎症反应综合征)，脓毒血症以及脓毒血症性休克的预后情况的检测项目。PCT是无激素活性的降钙素原前肽物质，由116个氨基酸组成，分子量为13KD的糖蛋白。PCT的半衰期为25-30小时，在体外稳定性很好。健康人血浆PCT含量极低(＜0.1ng/ml)，0.5ng/ml被认为是检测感染性疾病诊断的分界值。PCT选择性地对系统性细菌感染、真菌感染及寄生虫感染有反应，而对无菌性炎症和病毒感染无反应或仅有轻度反应。许多学者研究发现，全身性细菌、真菌和寄生虫感染时，PCT水平异常增高，增高的程度与感染的严重程度及预后相关，在全身性细菌感染和脓毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察等方面有很高的临床价值。PCT水平的监测，对于严重威胁生命的感染性疾病过程和跟踪治疗方案是很有用的，PCT浓度的升高标志着炎症反应正在进行中，使用足够的抗生素、炎症灶清除术治疗等，PCT值下降，证明治疗方案正确，预后良好，反之需改变治疗方案。PCT为所有不知病因的炎症性疾病的鉴别诊断提供帮助与支持，如细菌性与毒素性的急性成人呼吸窘迫综合症(ARDS)的鉴别；胆源性与毒素性胰腺炎的鉴别；细菌性与病毒性脑膜炎的鉴别；微生物诱导的发热与非细菌性发热的鉴别，特别是发热待查(FOU)的诊断，病毒感染或自身免疫失调与免疫抑制条件下的急性细菌感染的鉴别，发热的病因的鉴别，如在肿瘤患者中被肿瘤溶解物或化疗诱导与细菌、真菌或其他感染病因区别。PCT可早期诊断新生儿和婴儿全身性细菌感染与败血症引起的急性发热；术后常规，包括术后感染预警及用药监测，术后切除感染灶(如腹膜炎、软组织感染)后的治疗指导，监测腹膜炎、吻合口漏和无典型腹部症状的疾病过程；器官移植后的监测。移植前排除急性细菌或其他感染，鉴别急性器官排斥、急性病毒、细菌与真菌感染；长期在ICU的患者及长期机械通气患者的监测，监测疾病过程及指导治疗；监测高危患者，早期获得有关并发症和内环境衰退的信息。许多临床研究证明，PCT在不同医学领域对诊断和指导治疗有很高的价值，与目前多应用的诊断指标相比，PCT在鉴别诊断和控制感染及严重炎症方面提供了额外的信息。随着临床实践性研究的不断深入，临床数据的不断积累，PCT作为一个全身性细菌感染和脓毒症辅助和鉴别诊断的常规指标将成为共识，已经得到广泛的应用。目前国内检测降钙素原蛋白(PCT)的方法主要有胶体金法和酶联免疫法(ELISA)。胶体金法操作简便、快速、结果判断直观，但检测的灵敏度较低；ELISA法的检测灵敏度相对较高，但是操作步骤繁琐、费时，自动化程度低，不适用于大量检测。基于此，做出本申请。
技术实现思路
为了克服现有降钙素原蛋白(PCT)在测试过程中存在的上述缺陷，本专利技术首先提供一种快速灵敏、准确性好、稳定性好、操作简便，适用于临床全自动或半自动生化分析的降钙素原蛋白(PCT)测定试剂。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：一种降钙素原蛋白(PCT)的测定试剂，包括R1试剂、R2试剂和降钙素原蛋白标准品，所述的R1试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、聚乙二醇6000(PEG)；所述的R2试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒；所述的降钙素原蛋白标准品的主成分是降钙素原蛋白、磷酸盐缓冲液、牛血清蛋白(BSA)和叠氮钠。具有上述特征降钙素原蛋白(PCT)测定试剂的制备方法如下：(1)R1试剂的配制：将磷酸盐缓冲液加入到容器中，搅拌均匀，加入聚乙二醇，继续搅拌至完全溶解；用磷酸盐缓冲液定容；(2)R2试剂的配制：将磷酸盐缓冲液加入到容器中，搅拌均匀，加入羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒，继续搅拌至完全溶解，用磷酸盐缓冲液定容；(3)降钙素原蛋白标准品的配制：将磷酸盐缓冲液加入到容器中，搅拌均匀后，加入降钙素原蛋白，搅拌至完全溶解；加入牛血清蛋白，继续搅拌至完全溶解；加入叠氮钠，搅拌至完全溶解；用磷酸盐缓冲液定容得到校准品。进一步的，作为优选：所述的聚乙二醇为聚乙二醇6000。步骤(3)中，磷酸盐缓冲液定容得到标准品的具体工序为：先用磷酸盐缓冲液定容至100mL,获得校准品一；取上述标准液一50mL，加入50mL磷酸盐缓冲液继续搅拌十分钟，获得校准品二；取50mL校准品二，加入50mL磷酸盐缓冲液继续搅拌十分钟，获得校准品三；取50mL校准品三，加入50mL磷酸盐缓冲液继续搅拌十分钟，获得校准品四；取50mL校准品四，加入50mL磷酸盐缓冲液继续搅拌十分钟，获得校准品。所述的搅拌速度均为300-500转/分。本专利技术的工作原理如下：样本中的降钙素原蛋白(PCT)在磷酸盐缓冲系统中与试剂中羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒发生抗原抗体反应，于促聚剂聚乙二醇作用下产生凝集以使浊度上升，570nm波长处检测反应液吸光度的变化，其变化程度与样本中的PCT含量成正比。具体实施方式本实施例一种降钙素原蛋白(PCT)的测定试剂，包括R1试剂、R2试剂和降钙素原蛋白标准品，所述的R1试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、聚乙二醇6000(PEG)；所述的R2试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒；所述的降钙素原蛋白标准品的主成分是降钙素原蛋白、磷酸盐缓冲液、牛血清蛋白(BSA)和叠氮钠。其中上述降钙素原蛋白(PCT)测定试剂的制备方法如下：(1)R1试剂的配制：①将2.0L磷酸盐缓冲液加入到适当容器中；②开启电动搅拌器，搅拌速度均为450转/分；③将28.8g聚乙二醇6000(PEG)加入上述溶液中，搅拌十分钟，直至完全溶解；④用磷酸盐缓冲液定容至2.4L。(2)R2试剂的配制：①将500mL磷酸盐缓冲液加入到适当容器中；②开启电动搅拌器，搅拌速度均为450转/分；③将0.18g羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒加入上述溶液中，搅拌十分钟，直至完全溶解；④用磷酸盐缓冲液定容至600mL。(3)降钙素原蛋白标准品的配制：①将80mL磷酸盐缓冲液加入到适当容器中；②开启电动搅拌器，搅拌速度均为450转/分；③将5.0mg降钙素原蛋白加入上述溶液中，搅拌十分钟，直至完全溶解；④将4.5mg牛血清蛋白加入上述溶液中，搅拌十分钟，直至完全溶解；⑤将42mg叠氮钠加入上述溶液中，搅拌十分钟，直至完全溶解；⑥用磷酸盐缓冲液定容至100mL,获得校准品五；⑦取上述溶液(校准品五)50mL，加入50mL磷酸盐缓冲液继续搅拌十分钟，获得校准品四；⑧取50mL校准品四，加入50mL磷酸盐缓冲液继续搅拌十分钟，获得校准品三；⑨取50mL校准品三，加入50mL磷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种降钙素原蛋白的测定试剂，其特征在于：包括R1试剂、R2试剂和降钙素原蛋白标准品，所述的R1试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、聚乙二醇；所述的R2试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒；所述的降钙素原蛋白标准品的主成分是降钙素原蛋白、磷酸盐缓冲液、牛血清蛋白和叠氮钠。

【技术特征摘要】
1.一种降钙素原蛋白的测定试剂，其特征在于：包括R1试剂、R2试剂和降钙素原蛋白标准品，所述的R1试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、聚乙二醇；所述的R2试剂的主成分是磷酸盐缓冲液、羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒；所述的降钙素原蛋白标准品的主成分是降钙素原蛋白、磷酸盐缓冲液、牛血清蛋白和叠氮钠。2.如权利要求1所述的一种降钙素原蛋白的测定试剂，其特征在于：所述的聚乙二醇为聚乙二醇6000。3.如权利要求1所述的一种降钙素原蛋白的测定试剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）R1试剂的配制：将磷酸盐缓冲液加入到容器中，搅拌均匀，加入聚乙二醇，继续搅拌至完全溶解；用磷酸盐缓冲液定容；（2）R2试剂的配制：将磷酸盐缓冲液加入到容器中，搅拌均匀，加入羊抗人PCT抗体的致敏乳胶颗粒，继续搅拌至完全溶解，用磷酸盐缓冲液定容；（3）降钙素原蛋白标准品的配制：将磷酸盐缓冲液加入到容器中，搅拌均匀后，加入降钙素原蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：方朝君，
申请(专利权)人：浙江达美生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33