一种茶多酚中EGCG含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种茶多酚中EGCG含量的检测方法，包括(1)设定高效液相色谱条件；(2)制备对照品溶液；(3)制备供试品溶液；(4)含量测定；分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后利用色谱图计算EGCG的含量。本发明专利技术所述检测方法以梯度洗脱方式，能有效地分离开茶多酚中较难分离的EGCG和EC两种主要成分；且该方法简便，灵敏度高，重现性好，样品分离度、对称性及峰形均较好，且保留时间适中，更加适合于常规检测，可有效用于EGCG含量的检测和质量控制。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种化合物检测方法，具体涉及一种茶多酚中EGCG含量的检测方法。
技术介绍
癌症已成为21世纪威胁人类生存的头号杀手，平均每年有600多万人死于各种癌症。中国已成为世界癌症高发国之一，每年新增200多万名癌症患者，占全球总数的20％，并且每年呈快速增长趋势。临床上目前治疗癌症的药物主要是化学药品，但由于化学药物毒性大，在杀死肿瘤细胞的同时也无选择性的杀死白细胞、淋巴细胞等自身免疫细胞，导致各种并发症和严重的不良反应，而且疗程长，费用高，在临床使用中有较大的局限性。中药在治疗癌症方面有独特的优势，以中药为代表的天然药物具有毒副作用小、作用靶点多样、耐受性好等特点，在治疗肿瘤方面越来越受到重视。茶多酚，又名抗氧灵、维多酚、防哈灵，是茶叶中所含的一类多羟基类化合物，简称TP，主要化学成分为儿茶素类(黄烷醇类)、黄酮及黄酮醇类、花青素类、酚酸及缩酚酸类、聚合酚类等化合物的复合体。其中儿茶素类化合物为茶多酚的主体成分，占茶多酚总量的65％～80％。儿茶素类化合物主要包括儿茶素(EC)、没食子儿茶素(EGC)、儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)4种物质。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。EGCG为茶多酚中的主要的组成成分之一，本专利技术的专利技术者研究发现，目前尚未有有效的检测方法对其进行质量控制，研究及开发一种适合于常规检测EGCG含量的检测方法则显得尤为重要。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的问题，本专利技术提供了一种茶多酚中EGCG含量的检测方法,该方法操作简单，具有良好的精密度、重现性和可靠性，可用于EGCG含量的检测和质量控制。技术方案：为了实现上述目的一种茶多酚中EGCG含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)设定高效液相色谱条件：色谱柱为C18，以浓度为0.1％-0.2％的乙酸水溶液为流动相A，以体积比为(60-70)：(30-40)甲醇-乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.8-1.2mL·min，柱温为20-40℃，检测波长为275-281nm，进样量10-20μl；所述流动相A和B在液相进行过程中的体积比为(75-90)：(10-25)；(2)制备对照品溶液：称取EGCG对照品，加入流动相A制成溶液，作为对照品溶液；(3)制备供试品溶液：称取茶多酚粉末，加入流动相A，超声提取，静置，摇匀，滤过，作为供试品溶液；(4)含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后，利用色谱图计算EGCG的含量。作为优选，步骤(1)所述流动相A中乙酸的浓度为0.1％。作为优选，步骤(1)所述流动相B中甲醇-乙腈的体积比为60：40。作为优选，步骤(1)所述流速为1.00mL·min-1，柱温为35℃，检测波长为278nm，进样量20μl。作为优选，所述流动相A和B在液相进行过程中0分钟开始的体积比为90:10；20分钟开始为75:25；35分钟开始后为90:10。所述检测方法，还包括对EGCG对照品溶液浓度X和峰面积积分值Y进行线性回归的步骤；所述步骤为制备不同浓度的对照品溶液按上述色谱条件进行测定，得到不同的峰面积积分值，以峰面积积分值(Y)和对照品溶液浓度(X)进行线性回归，得回归方程。所述检测方法，还包括对高效液相色谱仪进行精密度检测的步骤；所述步骤为将制备的对照品溶液，按上述色谱条件连续进样进行测定，得到不同的峰面积积分值，计算RSD，分析仪器精密度。所述检测方法，还包括对供试品溶液的稳定性进行检测的步骤；所述步骤为制备供试品溶液，按上述色谱条件在不同时间分别进样测定，测得不同峰面积积分值，计算RSD，分析供试品溶液的稳定性。所述检测方法，还包括检验EGCG含量的检测方法的重复性的步骤；所述步骤为制备多份平行供试品溶液，按上述色谱条件分别进样测定，测得不同峰面积积分值，计算RSD，分析所述方法重复性。所述检测方法，还包括进行加样回收率实验的步骤；所述步骤为取已知含量的EGCG样品，加入相应量的对照品，按上述方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，计算加样回收率。所述检测方法，还包括进行EGCG定量限测定的步骤；所述步骤为将制备的对照品溶液稀释测定，测得信噪比10∶1时，分析EGCG的最低检测浓度。所述检测方法，还包括EGCG检测限测定的步骤；所述步骤为将制备的对照品溶液稀释测定，测得信噪比3：1时，分析EGCG的最低检测浓度。有益效果：与现有技术相比，本专利技术的茶多酚中EGCG含量的检测方法具有以下优点；本专利技术所述检测方法以梯度洗脱方式，能有效地分离开茶多酚中较难分离的EGCG和EC两种主要成分；且该方法简便，灵敏度高，重现性好，样品分离度、对称性及峰形均较好，且保留时间适中，更加适合于常规检测，可有效用于EGCG含量的检测和质量控制。附图说明图1为EGCG的结构示意图；图2为实施例4EGCG对照品溶液的高效液相色谱图；图3为实施例7EGCG样品重复性检测的高效液相色谱图；图4为某一批次EGCG样品的高效液相色谱图；图5为另一批次EGCG样品的高效液相色谱图。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1检测方法(1)设定高效液相色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18：4.6×250mm，5um，以浓度为0.1％的乙酸水溶液为流动相A，以体积比为60:40甲醇-乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为1.0mL·min-1，柱温为35℃，检测波长为278nm，进样量20μl，流动相A和B在液相进行过程中0分钟开始的体积比为90:10；20分钟开始为75:25；35分钟开始为90:10；理论板数按EGCG计算应不低于2000。(2)制备对照品溶液：称取EGCG对照品20mg，精密称定，置于50ml容量瓶中，加入流动相A，稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.400mg·ml-1的溶液，作为对照品溶液(3)制备供试品溶液:称取供试品粉末30mg，置于50ml容量瓶中，加入流动相A 30ml，超声提取20min，静置，再用流动相A稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。(4)含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后，利用色谱图计算EGCG的含量。实施例2设定高效液相色谱条件中：以浓度为0.2％的乙酸水溶液为流动相A，以体积比为70:30甲醇-乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为1.2mL·min-1，柱温为40℃，检测波长为281nm，进样量15μl。其他步骤与实施例1相同。实施例3设定高效液相色谱条件中：以浓度为0.15％的乙酸水溶液为流动相A，以体积比为65:35甲醇-乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.8mL·min-1，柱温为20℃，检测波长为275nm，进样量10μl。其他步骤与实施例1相同。实施例4：对EGCG对照品溶液浓度X和峰面积积分值Y进行线性回归分别精密称取对照品，置于10mL容量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，使得含EGCG分别本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茶多酚中EGCG含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)设定高效液相色谱条件：色谱柱为C18，以浓度为0.1％‑0.2％的乙酸水溶液为流动相A，以体积比为(60‑70)：(30‑40)甲醇‑乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.8‑1.2mL·min‑1，柱温为20‑40℃，检测波长为275‑281nm，进样量10‑20μl；所述流动相A和B在液相进行过程中的体积比为(75‑90)：(10‑25)；(2)制备对照品溶液：称取EGCG对照品，加入流动相A制成溶液，作为对照品溶液；(3)制备供试品溶液：称取茶多酚粉末，加入流动相A，超声提取，静置，摇匀，滤过，作为供试品溶液；(4)含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后，利用色谱图计算EGCG的含量。

【技术特征摘要】
1.一种茶多酚中EGCG含量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤:(1)设定高效液相色谱条件：色谱柱为C18，以浓度为0.1％-0.2％的乙酸水溶液为流动相A，以体积比为(60-70)：(30-40)甲醇-乙腈为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.8-1.2mL·min-1，柱温为20-40℃，检测波长为275-281nm，进样量10-20μl；所述流动相A和B在液相进行过程中的体积比为(75-90)：(10-25)；(2)制备对照品溶液：称取EGCG对照品，加入流动相A制成溶液，作为对照品溶液；(3)制备供试品溶液：称取茶多酚粉末，加入流动相A，超声提取，静置，摇匀，滤过，作为供试品溶液；(4)含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后，利用色谱图计算EGCG的含量。2.根据权利要求1所述的一种茶多酚中EGCG含量的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述流动相A中乙酸的浓度为0.1％。3.根据权利要求1所述的一种茶多酚中E...

【专利技术属性】
技术研发人员：季浩，徐娟，阚建伟，于燕燕，孔繁博，张宇，闫成亮，胡亚京，
申请(专利权)人：江苏天晟药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32