地霉菌降解发酵药渣中残余林可霉素的环氧化物水解酶基因及其应用制造技术

本发明专利技术公开了地霉菌降解发酵药渣中残余林可霉素的环氧化物水解酶基因及其应用，该基因全长1200bp，来源于地霉菌属酵母菌S9菌株，其cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如表中SEQ ID No.2所示，编码399个氨基酸。该基因的异源表达产物具有较强的降解林可霉素的功能，其降解能力可达30.25％，可用于水解林可霉素结构中的环氧健。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因领域，具体涉及一种地霉菌降解发酵药渣中残余林可霉素的环氧化物水解酶基因及其应用。
技术介绍
林可霉素类药物是由链霉菌产生的林可酰胺类抗生素，属于目前结构最稳定的抗生素之一。它的作用机理是通过与核糖体的大亚基结合，抑制蛋白质合成，对大多数革兰阳性菌和某些厌氧的革兰阴性菌有抗菌作用。但是在利用微生物发酵生产林可霉素过程中，由于存在提炼纯度低等问题，造成废渣中残留林可霉素含量高，难降解等诸多问题，造成严重环境污染，难以达到直接利用或排放标准。因此，将林克链霉菌发酵药渣中残余的高浓度的林可霉素进行生物降解，是将废渣有效实现废物利用的关键步骤，目前备受关注。作为单细胞真核微生物的酵母菌菌体蛋白质含量高，富含多种维生素，能够用作饲料，可利用工厂排出的有机废料、废水生长繁殖。利用酵母菌降解废渣中高浓度的林可霉素，这不仅变废为宝，还能解决环境污染问题，可谓一举两得。同时，在微生物家族中，酵母菌是食品、饲料等工业化生产技术最成熟的种类，研究开发酵母菌药渣饲料有着重要的意义。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种地霉菌降解发酵药渣中残余林可霉素的环氧化物水解酶基因及其应用。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：本专利技术所述的环氧化物水解酶基因全长1200bp，来源于半乳糖酶S9菌株 (Galactomyces geotrichum S9)，其cDNA核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如表中SEQ ID No.2所示，编码399个氨基酸。本专利技术从林可霉素生产药厂的大量废水废渣中筛选到的地霉菌属酵母菌S9菌株，该菌株对林可a霉素具极高降解活性，通过多批次降解林可霉素药物活性试验确定其活性后，于2012年3月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国武汉武昌珞珈山，保藏编号CCTCC No：201256。本专利技术提取了该菌株S9的总DNA，以柯斯质粒为载体构建了1个含约9 600个克隆的宏基因组文库，对文库进行活性筛选获得1个具有降解林可霉素活性的克隆。亚克隆及测序分析发现1个潜在的可编码399个氨基酸的ORF(Open Reading Frame)，其蛋白质产物与1个来源于Cryptococcus ga ttii WM276的epoxide hydrolase 1基因的同源性最高，两者的一致性为99％，相似性为78％。本专利技术构建了所述的环氧化物水解酶基因的酵母表达载体ehs9/pWX530，在宿主酿酒酵母细胞中分泌表达，用离子交换层析纯化表达产物，分子量大小为45KDa。本专利技术利用ELISA方法，对所述的环氧化物水解酶基因表达产物测试降解能力，制作标准曲线，结果表明，Ehs的降解能力达到30.25％。附图说明图1为本专利技术实施例中ELISA测试林可霉素含量标准曲线图。具体实施方式为了使本专利技术的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术采用的酵母菌是半乳糖酶S9菌株(Galactomyces geotrichum S9)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心；地址：中国武汉武汉大学(武昌珞珈山)；保藏日期：2012年3月5日；保藏登记入册编号CCTCC No：M201256。该酵母 菌中的环氧化物水解酶基因共编码1200bp，编码399个氨基酸，将该基因异源表达后，其表达产物亦具有降解林可霉素的功能。该基因降解功能主要是水解林可霉素结构中的环氧健，从而使其分解成小分子物质。实施例步骤一、从林可霉素生产药厂的大量废水废渣中筛选到的地霉菌属酵母菌S9菌株，该菌株对林可a霉素具极高降解活性，通过多批次降解林可霉素药物活性试验确定其活性后，委托武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC)对菌株进行鉴定，确定为地霉菌Geotrichum sp.。步骤二、提取了该菌株S9的总DNA中，以柯斯质粒为载体构建了1个含约9600个克隆的宏基因组文库，对文库进行活性筛选获得1个具有降解林可霉素活性的克隆。亚克隆及测序分析发现1个潜在的可编码399个氨基酸的ORF(Open Reading Frame)，其蛋白质产物与1个来源于Cryptococcus ga ttii WM276的epoxide hydrolase 1基因的同源性最高，两者的一致性为99％，相似性为78％。步骤三、构建了所述的环氧化物水解酶基因的酵母表达载体ehs9/pWX530，在宿主酿酒酵母细胞中分泌表达，用离子交换层析纯化表达产物，分子量大小为45KDa。步骤四、利用ELISA方法，对所述的环氧化物水解酶基因表达产物测试降解能力，制作标准曲线，结果表明，Ehs的降解能力达到30.25％。以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
地霉菌降解发酵药渣中残余林可霉素的环氧化物水解酶基因，其特征在于，所述的环氧化物水解酶基因的cDNA核苷酸序列如表中SEQ ID No.1所述。

【技术特征摘要】
2015.09.01 CN 20151055969471.地霉菌降解发酵药渣中残余林可霉素的环氧化物水解酶基因，其特征在于，所述的环氧化物水解酶基因的cDNA核苷酸序列如表中SEQ ID No.1所述。2.地霉菌降解发酵药渣中残余林可霉素的环氧化物水解酶基因，其特征在于，所述的环氧化物水解酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛秋红，张林，龚姝榕，刘海波，惠丰立，
申请(专利权)人：南阳师范学院，
类型：发明
国别省市：河南;41