本发明专利技术公开了miRNA‑4512在骨肉瘤诊断中的应用，所述骨肉瘤为软骨母细胞型骨肉瘤。本发明专利技术通过第二代高通量测序发现miRNA‑4512在骨肉瘤患者血液中显著降低，进一步研究发现，miRNA‑4512与骨肉瘤的发生发展相关。通过检测miRNA‑4512的含量，可以为患者提供预警，指导医生介入治疗，提高患者的生存率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及miRNA-4512在骨肉瘤诊断中的应用。
技术介绍
骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，由恶性增殖的肉瘤细胞直接产生肿瘤性骨样组织或不成熟骨，也称成骨肉瘤，其组织学特点是增生的梭形肿瘤细胞直接产生骨样基质或不成熟骨，显微镜下可见许多肿瘤细胞，细胞及细胞核大小、形状不一，有小型多核巨细胞，梭形细胞，不成熟的软骨细胞及恶性成骨细胞，细胞核大，染色很深。几乎所有骨肉瘤转移均经血液转移至肺，少数转移至脑、肾等内脏器官以及经淋巴结转移。骨肉瘤可分为不同的亚型，软骨母细胞型骨肉瘤作为普通型骨肉瘤的一个亚型和其他普通型骨肉瘤的临床治疗和预后并无大的差别，但因影像学表现及病理组织学上与软骨肉瘤有相互重叠之处,容易误诊为软骨肉瘤，故主要应与软骨肉瘤进行鉴别。软骨母细胞型骨肉瘤以产生软骨基质为主，大多为高级别透明软骨，除了颌骨和盆骨的软骨母细胞型骨肉瘤以外，肿瘤内的软骨基质很少有明显黏液变性或出现其他形式的软骨肉瘤成分。软骨母细胞型骨肉瘤的瘤组织中，1/2以上呈软骨肉瘤样结构，在此基础上可化生形成肿瘤骨。骨肉瘤总发病率约占人类恶性实体肿瘤的0.2％，发病年龄多在15-25岁之间，男性多于女性，好发部位是长管状骨的干髓端，股骨远端和胫骨近端最多见，其次是肱骨和腓骨近端，其他部位如股骨近端、脊椎、骼骨等骨组织均可发生。该肿瘤的恶性程度甚高，预后极差，特点是局部和远处转移发生早，临床做出骨肉瘤诊断时，其中大部分患者已经出现肺的微小转移灶，5年生存率低。近年来由于新辅助化疗和化疗方案的进步以及手术技术的不断提高，明显提高了骨肉瘤患者的生存率。目前采用手术联合化疗的综合治疗方案，骨肉瘤病人5年生存率为55-68％，仍然不令人满意，其预后不良的主要原因早期发生转移，当前的抗转移治疗尚不能获得满意效果。骨肉瘤的侵袭及转移严重影响着患者的生活质量和预后，基因水平的治疗成为广大学者研究的热点，但其具体机制以及治疗方案仍有待进一步研究，而基因治疗中寻求有效的治疗靶点成为需要解决的关键问题之一。最近的研究表明microRNA(miRNA)在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用。miRNAs是一种内源性非编码的单链小分子RNA，约有18-26个核若酸，主要作用机制是通过与目标靶基因的mRNA分子的3'端非编码区域特异结合来抑制靶基因的mRNA转录后的翻译，从而参与了人体内多个生理和病理过程。寻找与骨肉瘤发生发展相关的miRNA对骨肉瘤的科学研究和临床上的应用就有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种miRNA诊断标志物，该诊治标志物为miRNA-4512。本专利技术的目的之二，提供一种产品，能够实现骨肉瘤的早期诊断，提高骨肉瘤患者的生存率和生活质量。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了miRNA-4512或其同源物在制备诊断骨肉瘤的产品中的应用。进一步，所述骨肉瘤为软骨母细胞型骨肉瘤。进一步，所述产品通过测定样本中miRNA-4512或其同源物的表达水平以诊断骨肉瘤。进一步，所述产品包括通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测miRNA-4512或其同源物的水平以诊断骨肉瘤的产品。其中，miRNA-4512或其同源物在骨肉瘤组织中表达下调，与对照相比，当患者血液中的miRNA-4512显著降低时，可以判断患者患有骨肉瘤或者有患骨肉瘤的风险。进一步，所述产品包括芯片和/或试剂盒。其中，所述芯片包括固相载体以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于上面所述的miRNA-4512的部分或全部序列。所述试剂盒包括用于检测上面所述的miRNA-4512的表达水平的试剂。进一步，所述试剂盒包括扩增miRNA-4512的引物对，序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本专利技术提供了一种诊断骨肉瘤的产品，所述产品能够通过检测样本中miRNA-4512或其同源物的水平来诊断骨肉瘤。进一步，所述样本包括血液、尿液、脑脊液、组织液、汗液、唾液、泪液。在本专利技术的具体实施方式中，所述样本为血液。进一步，所述产品包括芯片和/或试剂盒。其中，所述芯片包括固相载体；以及固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括特异性地对应于上面所述的miRNA-4512的部分或全部序列。所述试剂盒包括用于检测上面所述的miRNA-4512的表达水平的试剂。进一步，所述试剂盒包括miRNA-4512的引物和/或探针。所述试剂盒还包括针对现有技术中已经报道的诊断骨肉瘤miRNA的引物和/或探针。将多种miRNA的检测引物和/或探针放置在同一试剂盒中通过检测多种miRNA指标联合诊断骨肉瘤的情况也包含在本专利技术的保护范围之内。所述芯片(即微阵列)包含针对miRNA-4512特异性的一组寡核苷酸(如寡脱氧核苷酸)探针。通过使用该微阵列，可通过逆转录RNA以产生一组靶寡脱氧核苷酸，然后使其与微阵列上的探针寡脱氧核苷酸杂交，从而产生杂交或表达谱，来测定生物样品中多种微小RNA的表达水平。miRNA特异性的探针寡核苷酸或对miRNA特异性的探针寡核苷酸是指具有经选择与特定miRNA基因产物杂交或与该特定miRNA基因产物的逆转录物杂交的序列的探针寡核苷酸。在本专利技术的具体实施方式中，所述miRNA-4512是成熟miRNA-4512，核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO.1所示。应当知道，本专利技术的miRNA-4512包括组成型核酸分子的功能等同物，即变体，“变体”是指，与对应野生型miRNA基因产物具有少于100％的同一性并且具有对应野生型miRNA基因产物的一个或多个生物活性的miRNA。此类生物活性的实例包括但不限于，与骨肉瘤发生发展的细胞过程(例如，细胞分化、细胞生长、细胞死亡)的抑制。这些变体包括物种变体和由于miRNA基因的一个或多个突变(例如，置换、缺失、插入)而产生的变体。在某些实施方案中，变体与对应野生型miRNA基因产物具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％的同一性。其显示完整miRNA-4512核酸分子相同的功能，它们可能通过核苷酸残基的缺失、置换或者插入而突变。本领域人员熟知，为了保证miRNA的稳定性，可以在miRNA的一端或者两端增加保护性碱基，如TT，也可对miRNA碱基进行修饰，但是不影响miRNA的功能。因此，本领域技术人员熟知，在不影响miRNA-4512功能的条件下，对miRNA-4512进行碱基修饰或者在两端增加碱基获得的序列同样包含在本专利技术的保护范围之内。本专利技术的miRNA-4512核酸分子可以以单链或双链的形式存在。成熟的miRNA-4512主要呈单链形式，而miRNA-4512前体是部分自互补的，以形成双链结构。本专利技术的核酸分子可以是RNA、DNA、PNA、LNA的形式。根据SEQ ID NO.1所示的核酸序列，可以生成用于给定miRNA基因产物的RNA印记杂交的合适探针，包括但不限于，与目标miRNA基因产物具有至少约70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或完全互补的探针。标记的DNA和RNA采用常规方法制备，例如核酸探针用本文档来自技高网...
【技术保护点】
miRNA‑4512或其同源物在制备诊断骨肉瘤的产品中的应用。
【技术特征摘要】
1.miRNA-4512或其同源物在制备诊断骨肉瘤的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述骨肉瘤为软骨母细胞型骨肉瘤。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述产品通过测定样本中miRNA-4512或其同源物的表达水平以诊断骨肉瘤。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括通过使用qRT-PCR、印记杂交、原位杂交、阵列杂交、基因芯片或新一代测序来检测miRNA-4512或其同源物的水平以诊断骨肉瘤的产品。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括芯片和/或试剂盒。6.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：石小峰，孙锦云，杨承刚，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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