本发明专利技术涉及一种利用离子液体提取/HPLC检测荷花叶中荷叶碱的方法，其包括以下步骤：(1)样品萃取：称取荷叶粉末样品放入带有搅拌子的容器中，加入固液比为1:20～60的离子液体溶液，200～600w微波功率下微波辅助提取2～12min；(2)检测：采用HPLC进行检测，HPLC色谱条件为：采用Kromasil ODS-C18柱，4mm×250mm,5um；流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸；流速为0.5～1ml/min；检测波长为270nm；柱温为25℃。该方法简便、快捷、准确，重复性好，适合于荷花叶中荷叶碱的含量测定。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药材活性成分检测领域，尤其涉及一种利用离子液体提取/HPLC检测荷叶中荷叶碱的方法。
技术介绍
荷叶为多年生水生草本睡莲科植物莲的叶，上表面深绿色或黄绿色，较粗糙；下表面淡灰棕色，较光滑，有粗脉21至22条，处中心向四周射出，中心有突起的叶西峡钱基。我国荷叶资源丰富，除青海、西藏外，各地均有分布，以长江、黄河和珠江等三大流域分布最广。中医学认为，荷叶性味苦涩性平，归肝、脾、胃、心经，有清暑利湿、升发清阳、凉血止血等功效，用于暑热烦渴，暑湿泄泻，脾虚泄泻，血热鼻屺，便血便漏。现代药理研究证明荷叶的浸剂或煎剂能直接扩展血管、抑制高胆固醇血症和动脉粥样硬化从而具有降压、降脂减肥、抗心率失常等多种生理功能。生物碱是一类天然的有机化合物，是一类除蛋白质、肽类、氨基酸及维生素B以外的存在于生物体内的含有氮碱基的环状化合物，能与酸结合成盐。大多数生物碱为无色结晶形固体，不溶于水，但与酸结合后易溶于水，有明显的熔点和旋光性，苦味，挥发性不强。荷叶含有莲碱(Roemerine)、原荷叶碱(Pronuciferine)和荷叶碱(Nuciferine)等多种生物碱及维生素。其中，荷叶碱是一种阿朴啡型生物碱(如下式所示)，为荷叶中的主要降脂活性成分，能促进脂肪的分解，同时具有利尿通便、通肠毒、降脂除油、清暑解热等作用，能明显降低血清中甘油三醇和胆固醇含量，具有调节血脂的保健作用，能够降血脂作用、抗自由基、抑制高胆固醇血症和动脉硬化等药疗、食疗功效，而且还具有抗有丝分裂的作用，有较强的抑菌效果，现代医学广泛应用于肥胖症和高血压症，是开发天然、特效、安全减肥药品和减肥食品最具潜力的天然产物之一。传统方法以有机试剂为溶剂采用加热回流、索氏提取、超声提取等方法来提取荷叶 中的荷叶碱，传统方法需要较高的温度和相当长的提取时间才能达到提取荷叶碱的目的，而较高的温度或者长时间的提取可能导致目标产物分解，使提取率降低。离子液体是由一种含氮杂环的有机阳离子和一种无机阴离子组成的盐，在室温或室温附近温度下呈液态，与传统的有机溶剂和电解质相比，离子液体具有以下优点：几乎没有蒸汽压、不挥发、无色、无味；有较大的稳定温度范围，较好的化学稳定性及较宽的电化学稳定点位窗口；通过阴阳离子的设计可调节其对无机物、水、有机物及聚合物的溶解性，并且其酸度可调至超酸。利用离子液体的上述优点，对现有的荷叶碱提取方法进行改进，从而形成一套完善的荷叶中荷叶碱提取、检测方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术而提供一种荷叶碱提取率较高、检测结果准确且稳定性较高的利用离子液体提取/HPLC检测荷花叶中荷叶碱的方法。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种利用离子液体提取/HPLC检测荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)样品萃取：称取荷叶粉末样品放入带有搅拌子的容器中，加入固液比为1:20～60的离子液体溶液，200～600w微波功率下微波辅助提取2～12min；(2)检测：采用HPLC进行检测，HPLC色谱条件为：采用Kromasil ODS-C18柱，4mm×250mm,5um；流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸；流速为0.5～1ml/min；检测波长为270nm；柱温为25℃。离子液体是由一种含氮杂环的有机阳离子和一种无机阴离子组成的盐，在室温或室温附近温度下呈液态，又称为温室离子液体、室温熔融盐、有机离子液体等，本专利技术中所述离子液体溶液由体积比为1:1～9的离子液体和甲醇混合而成，所述离子液体为[Bmin]Br(溴化3-甲基-1-丁基咪唑)、[Bmim]BF4(1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐)、[Bmim]PF6(1-丁基-3-甲基咪唑六氟硼酸盐)、[Hmim]PF6(1-已基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐)、[Dmim]PF6(1-癸基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐)中的至少一种。与甲醇做萃取溶液相比，离子液体的加入明显影响荷叶中荷叶碱的萃取效果，但影响的大小与离子液体的种类有关。离子液体溶液所具有的强萃取能力与其自身的性质有关，一方面，离子液体具有多种分子作用力和强的溶解能力，尤其是氢键作用力、极性作用力、离子电荷作用力等，这些作用有助于荷叶碱在离子液体溶液中溶解，从而使荷叶碱从荷叶中能有效地被萃取出来；另一方面，离子液体是由有机阳离子和有机或无机阴离子组成的有机盐，对微波具有强的吸收和转化能力团，能有效提高离子液体溶液对微波的吸收和转化，使溶剂和样品迅速升温，所以能够快速萃取出荷叶中荷叶碱，因此作为优选，所述离子液体溶液中的离子液体为[Bmim]BF4，该[Bmim]BF4与甲醇的体积 比为1:9。作为优选，所述步骤(1)中荷叶粉末样品与离子液体溶液的固液比为1:30。作为优选，所述步骤(1)中微波功率为400w，提取时间为10min，提取温度为60℃。作为优选，所述步骤(2)中的流动相中乙腈-水-三乙胺-冰醋酸的体积比为56:44:1:0.5，流速为1ml/min。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：本专利技术中利用离子液体与甲醇混合形成离子液体溶液作为萃取剂，结合微波辅助提取，避免了现有的荷花叶荷叶碱提取中目标产物分解、提取率较低的问题，从而获得满意的提取率，结合HPLC检测技术，使得荷花叶中荷叶碱含量在5.00～70.00ug×ml-1的范围内呈良好的线性关系，加标回收率在92.3％到102.7％之间，相对标准偏差小于11％，该方法简便、快捷、准确，重复性好，适合于荷叶中荷叶碱的含量测定。附图说明图1为实施例1的1-2中荷叶碱标准曲线图；图2为实施例2的2-1中不同离子液体溶液对萃取荷花叶中荷叶碱效果的影响；图3为实施例2的2-1中[Bmim]BF4离子液体溶液的HPLC图谱；图4为实施例2的2-2中离子液体浓度对荷花叶中荷叶碱提取率的影响；图5为实施例2的2-2中[Bmim]BF4在V离子液体/V甲醇(1:9)的HPLC图谱；图6为实施例2的2-3中不同微波功率对荷花叶中荷叶碱提取率的影响；图7为实施例2的2-3中微波功率400w时的HPLC图谱；图8为实施例2的2-4中萃取时间对荷花叶中荷叶碱萃取率的影响；图9为实施例2的2-4中萃取时间为10min时的HPLC图谱；图10为实施例2的2-5中液固比对荷叶碱萃取率的影响；图11为实施例2的2-5中液固比为30时的HPLC图谱；图12为对比例中回流萃取的HPLC图谱；图13为对比例中超声萃取的HPLC图谱。具体实施方式以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。实施例1：检测条件 1-1、HPLC色谱条件HPLC色谱条件为：采用Kromasil ODS-C18柱(4mm×250mm,5um)，流动相为乙腈- 水-三乙胺-冰醋酸(56:44:1:0.5)；流速：1ml×min-1；检测波长：270nm；柱温：25℃。1-2、标准曲线的制备精密量取荷叶碱标准品(中国药检所)10mg，定容在10ml的容量瓶中备用，在分别配置成浓度为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.03mg/ml、0.05mg/ml、0.07mg/ml荷叶碱标准品溶液，采用HPLC法测定荷叶中荷叶碱含量。以峰面积为纵坐标，荷叶碱浓度为横坐标制作标准曲线，荷叶碱标准品本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用离子液体提取/HPLC检测荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)样品萃取：称取荷叶粉末样品放入带有搅拌子的容器中，加入固液比为1:20～60的离子液体溶液，200～600w微波功率下微波辅助提取2～12min；(2)检测：采用HPLC进行检测，HPLC色谱条件为：采用Kromasil ODS‑C18柱，4mm×250mm,5um；流动相为乙腈‑水‑三乙胺‑冰醋酸；流速为0.5～1ml/min；检测波长为270nm；柱温为25℃。
【技术特征摘要】
1.一种利用离子液体提取/HPLC检测荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)样品萃取：称取荷叶粉末样品放入带有搅拌子的容器中，加入固液比为1:20～60的离子液体溶液，200～600w微波功率下微波辅助提取2～12min；(2)检测：采用HPLC进行检测，HPLC色谱条件为：采用Kromasil ODS-C18柱，4mm×250mm,5um；流动相为乙腈-水-三乙胺-冰醋酸；流速为0.5～1ml/min；检测波长为270nm；柱温为25℃。2.如权利要求1所述的利用离子液体提取/HPLC检测荷叶中荷叶碱的方法，其特征在于，所述离子液体溶液由体积比为1:1～9的离子液体和甲醇混合而成，所述离子液体为[Bmin]Br、[Bmim]BF4、[Bmim]PF6、[Hmim]PF6、[Dmim]PF6...
【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳小琨，杨立业，李庆龙，
申请(专利权)人：浙江海洋学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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