本发明专利技术涉及蒿属植物奇蒿中单体化合物去氢母菊内酯酮的提取方法及其应用，属于天然植物提取及应用技术领域。该提取物为菊科蒿属植物中所特有的倍半萜类化合物。所述奇蒿提取物去氢母菊内酯酮经如下步骤制得：将中药奇蒿粉碎，用70％乙醇加热回流提取，将提取物经减压浓缩，得粗提物。粗提物经硅胶柱层析，粗提取经萃取，硅胶柱层析，凝胶柱色谱，反相高效液相制备色谱法制得纯度为99％的去氢母菊内酯酮。本发明专利技术所述奇蒿提取物去氢母菊内酯酮的提取方法简单，所得提取物经体外细胞实验证明：具有显著的抗临床型无乳链球菌，可用于制备抑制无乳链球菌的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于天然植物提取及应用
，具体涉及蒿属植物奇蒿中单体奇蒿黄酮的提取及其在制备抑制无乳链球菌和金黄色葡萄球菌药物中的应用。
技术介绍
无乳链球菌(Streptococcus.agalactiae,SAG)又称为B族链球菌，是一种常见的革兰氏阳性球菌，常寄存于女性生殖道、直肠及呼吸道，为条件致病菌，在健康人群中带菌率高达15％～35％。在免疫力低下、抗菌药物广泛应用或院内感染时，SAG易引起泌尿生殖道感染(张卓然，倪语星.临床微生物和微生物检验[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2003：86；赵明泽.无乳链球菌感染的临床特点及耐药性分析[J].浙江临床医学,2010,12(9):1019-1020.)、皮肤感染、心内膜炎、产后感染、新生儿败血症和新生儿脑膜炎等，是引起新生儿菌血症和脑膜炎的常见致病菌(吴健宁，林润华，林健，等.孕妇泌尿生殖道112例无乳链球菌感染的耐药性分析[J].医学研究杂志，2008，37(3)：88-89.)。在西方发达国家，SAG是新生儿感染最常见的致病菌，美国孕妇SAG定植率高达40％-50％，随着对SAG定植孕妇产时进行预防性抗生素治疗，美国新生儿SAG早发型败血症发病率发生明显降低(Newborn C O I D C O F A,CJ B,CL B,et al.Policy statement—Recommendations for the prevention of perinatal group B streptococcal(GBS)disease.[J].Pediatrics,2011,128(3):611-616.JR V.Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease Revised Guidelines from CDC,2010[J].MMWR Recommendations&Reports,2010.)。我国对SAG感染的研究报道较少，国内有医院检验室曾检验出新生儿SAG感染的血培养呈阳性，由SAG感染引起的新生儿肺炎、上呼吸道感染数量较多(吴健宁,林润华,林健等.孕妇泌尿生殖道112例无乳链球菌感染的耐药性分析[J].医学研究杂志,2008,37(3):88-89)。随着临床医生和实验室工作员对SAG感染的重视，近年来我国新生儿SAG感染的病例报道呈逐渐上升趋势，引发新生儿早发型败血症位居首位的致病菌为SAG，占总感染细菌的26.15％，根据数据统计，2012年SAG感染病例明显增加
(戴怡蘅,曾立军,高平明.新生儿B族链球菌败血症16例临床分析[J].中国新生儿科杂志,2012,27(1):44-46.黄小艺,刘志伟.妇幼保健院新生儿早发型血流感染分析[J].中华医院感染学杂志,2012,22(11):2329-2332.)。因此，我国医务工作者应尽早对孕妇进行SAG定植检查，对高危发病人群进行预防干预，降低新生儿早发型SAG的发生。SAG易感染围产期新生儿及产妇，对非孕妇成人也发生感染。相关报道表示SAG对免疫力低下的非孕妇成人引起感染的疾病主要有皮肤软组织感染、菌血症、肺炎、骨髓炎，还有其他少见病例如脑膜炎、链球菌中毒性休克综合征、感染性心内膜炎等(TH S,MM F,S P,et al.Increasing Burden of Invasive Group B Streptococcal Disease in Nonpregnant Adults,1990-2007[J].Clinical Infectious Diseases,2009,49(1):85-92.)。由无乳链球菌感染引起的心肌内膜炎死亡率高，该疾病单纯的采用抗生素治疗难以控制疾病的发展(SD P,AC M,DA M,et al.Infective endocarditis caused by Streptococcus agalactiae.[J].Int J Cardiol,1989,(2):179-183.)。SAG也是现在非孕妇成人化脓性关节炎的主要病原体，且由该菌引起的败血症关节炎死亡率最高(Nolla J M,G,Corbella X M P,et al.Group B streptococcus(Streptococcus agalactiae)pyogenic arthritis in nonpregnant adults.[J].Medicine,2003,82(2):119-128.)。我国无锡市人民医院SAG主要发生于老年人和患有基础疾病的患者，其引起的非孕妇成人感染主要有泌尿道感染、呼吸道感染、生殖道感染和皮肤软组织感染(王艳艳,任静,徐燕等.无乳链球菌在非孕妇成人患者中的临床分布特点与耐药性分析[J].中国医药科学,2013,(7):87-88.)。非孕妇成人感染SAG的病例在不断增加且病情严重，控制SAG的感染的发生迫在眉睫。随着抗生素类药物的大量使用，SAG对多种抗生素药物产生了耐药性。相关数据报道，SAG对喹诺酮类、氨基苷类药物具有耐药性和大环内酯类具有高度耐药性(Spanish][I.[Streptococcus agalactiae highly resistant to fluoroquinolones].[J].EnfermedadesInfecciosas y MicrobiologíaClínica,2006,24(9):562-563.；M G,T L,G G,et al.High-Level Aminoglycoside Resistance In The Beta-Hemolytic Group G Streptococcus Isolate Bm2721[J].Antimicrob Agents Chemother.,1999,43(12)::3008–3010.)，对四环素耐药率>90％，对红霉素、克林霉素及左氧氟沙星的耐
药率较高，并呈逐年上升趋势(高晶,刘晓艳.女性泌尿生殖道无乳链球菌的耐药性分析[J].检验医学,2015,(1).1673-8640.2015.01.004.)；SAG对青霉素、氨苄西林、头孢曲松、头孢噻肟和万古霉素无耐药性，常选用青霉素作为治疗SAG感染的首选药物(伍婷婷,闵小春,王威.临床患者感染无乳链球菌分离株的耐药性分析[J].中华医院感染学杂志,2015,(1).2015-131516.)。青霉素药物严重的过敏反应局限了药物的使用，对青霉素过敏的患者可以采用红霉素或克林霉素进行预防和治疗，但其因具有较高的耐药性，因此对红霉素和克林霉素的使用受到了一定的限制。这对青霉素过敏者，治疗由SAG引起的感染提出了挑战。从植物中寻找高效、低毒的抗菌有效成分是现在抗生素药物发展重要方向，本研究基于奇蒿中药材的临床应用(荣远明,叶琦莉,何善明.用中药刘寄奴治疗急性细菌性痢疾34例[J].上海中医药杂志,1983,(1)：21.邓存国.刘寄奴治疗早期乳痈效佳[J].中医杂志,2008,(9):820-821.)，对奇蒿的抗菌有效成分(谭蔚峰，王靖，邢新.中药奇蒿提取物体外抗菌活性的实验研究[本文档来自技高网...
【技术保护点】
蒿属植物奇蒿中单体去氢母菊内酯酮的提取方法，按照下述步骤进行：A、制备总粗提物将中药奇蒿粉碎，取奇蒿粉末10‑50kg，加入70％的乙醇水溶液100‑‑500L，加热70℃回流2h提取2次，将提取液减压浓缩，得总粗提取物；B、分离纯化将步骤A制得的总粗提取物加水溶解，使其混悬，得提取物混悬液，加入石油醚萃取三次，弃去三次石油醚萃取液，得到经石油醚萃取后的提取物混悬液；再向经石油醚萃取后的提取物混悬液中加入氯仿萃取三次，合并三次萃取液，减压回收溶剂得氯仿部位浸膏；将氯仿部位浸膏上硅胶色谱柱，用石油醚‑二氯甲烷‑甲醇‑甲酸系统6:2:1:0.160L和4:2:1:0.120L进行梯度洗脱，流速为3滴/秒，接样体积1L，通过薄层层析法对各流分进行点样，在石油醚‑二氯甲烷‑甲醇‑甲酸为4:2:1:0.1的展开剂系统中，Rf值为0.5的流分合并，减压回收溶剂得到流分Fr1；流分Fr1用反相高效液相制备，制备条件为色谱柱Kromasil C18(250mm×21.2mm i.d.；5μm)；流动相比例为乙腈：0.2％甲酸水＝28:72，流速20ml/min，柱温25℃，检测波长250nm，根据检测器谱图上显示的出峰位置，时间段在28.5min到29.5min内接收流分“Ⅰ”，得到单体去氢母菊内酯酮。...
【技术特征摘要】
1.蒿属植物奇蒿中单体去氢母菊内酯酮的提取方法，按照下述步骤进行：A、制备总粗提物将中药奇蒿粉碎，取奇蒿粉末10-50kg，加入70％的乙醇水溶液100--500L，加热70℃回流2h提取2次，将提取液减压浓缩，得总粗提取物；B、分离纯化将步骤A制得的总粗提取物加水溶解，使其混悬，得提取物混悬液，加入石油醚萃取三次，弃去三次石油醚萃取液，得到经石油醚萃取后的提取物混悬液；再向经石油醚萃取后的提取物混悬液中加入氯仿萃取三次，合并三次萃取液，减压回收溶剂得氯仿部位浸膏；将氯仿部位浸膏上硅胶色谱柱，用石油醚-二氯甲烷-甲醇-甲酸系统6:2:1:0.160L和4:2:1:0.120L进行梯度洗脱，流速为3滴/秒，接样体积1L，通过薄层层析法对各流分进行点样，在石油醚-二氯甲烷-甲醇-甲酸为4:2:1:0.1的展开剂系统中，Rf值为0.5的流分合并，减压回收溶剂得到流分Fr1；流分Fr1用反相高效液相制备，制备条件为色谱柱Kromasil C18(250mm×21.2mm i.d.；5μm)；流动相比例为乙腈：0.2％甲酸水＝28:72，流速20ml/min，柱温25℃，检测波长250nm，根据检测器谱图上显示的出峰位置，时间段在28.5min到29.5min内接收流分“Ⅰ”，得到单体去氢母菊内酯酮。2.根据权利要求1所述的蒿属植物奇蒿中单体化合物去氢母菊内酯酮的提取方法，其特征在于：步骤B中得到流分Fr1后，流分Fr1用Sephadex G-20凝胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇1:1溶液2L等度洗脱，流速为6秒/滴，接样体积50mL，得组分Fr1a-Fr1...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭蔚锋，陈俊，曹青青，冉荣征，崔龙久，杨新伟，于勇，冯飞灵，邱智泉，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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