本发明专利技术公开了一种同时检测无籽刺梨果实中3种黄酮类成分的方法，该方法是先取待检无籽刺梨果实干燥粉末，以甲醇或含水甲醇提取，减压旋干滤液，加入超纯水，用水饱和正丁醇按照醇水比4:1萃取两次，再用乙酸乙酯萃取两次，合并滤液，减压旋干并定容后制备出供试品溶液，然后选择芦丁、槲皮素、山奈酚为对照品，制备对照品溶液；分别将对照品溶液和供试品溶液在同一色谱条件下的高效液相色谱仪中进行进样分析，根据外标法监测无籽刺梨中上述3种成分即可。本发明专利技术首次在同一色谱条件下检测了上述无籽刺梨果实中主要黄酮类成分，共指认了3个具体化合物，可更全面跟准确地用于无籽刺梨果实黄酮类活性成分的深入研究。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种黄酮类成分的检测方法，尤其是无籽刺梨果实中3种黄酮类成分的检测方法。
技术介绍
无籽刺梨(Rosa sterilis S.D.Shi)属蔷薇科蔷薇属多年生攀援类果树，为贵州特有种，是一种药食同源的植物，2015年被国家林业局授权为植物新品种，其生态价值与经济价值对于喀斯特石漠化地区具有重要意义。其生态价值主要体现在石漠化治理、水土保持和生态修复等方面，药用和保健价值主要体现在无籽刺梨医药和保健产品逐步上市，市场前景较好。已有研究表明，无籽刺梨生物活性成分中黄酮类物质含量最高。黄酮类物质是小分子化合物，广泛存是许多中草药的有用成分，有较好的抗氧化性和清除自由基的能力。国内外已有研究表明某些黄酮类化合物既是药理因子，又是重要的营养因子，为一种新发现的营养素，不同分子结构的黄酮可作用于身体不同器官，对人体具有重要的生理保健功效。然而，就目前研究现状而言，关于无籽刺梨质量控制的报道很少，采用HPLC法测定其中某类成分的研究更少，已有研究中测定的成分较为单一，如单独测定无籽刺梨果实中芦丁、没食子酸。尚未见使用HPLC同时测定无籽刺梨中3类以上成分的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为进一步加深无籽刺梨活性成分的深入研究，采用HPLC法建立无籽刺梨的多指标含量测定方法，同时测定芦丁、槲皮素和山奈酚3种黄酮类成分的含量，以弥补现有技术的不足，加深对无籽刺梨黄酮类物质成分的了解及其含量测定，为其合理利用提供科学依据。本专利技术的技术方案如下：本专利技术提供同时检测无籽刺梨果实中芦丁、槲皮素和山奈酚的方法，它包括如下操作步骤：（1）取待检无籽刺梨果实干燥粉末，以甲醇或含水甲醇提取，减压旋干滤液，加入10ml超纯水，分别水饱和正丁醇萃取两次（醇水比4:1），10ml乙酸乙酯萃取两次，合并滤液，减压旋干并定容至10ml，为制备供试品溶液；（2）选择芦丁、槲皮素、山奈酚为对照品，制备对照品溶液；（3）分别将对照品、供试品溶液在同一色谱条件下的高效液相色谱仪中进行进样分析，根据外标法监测无籽刺梨中上述3种成分即可，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料；检测波长：360nm；流速：0.6-1.0ml/min；流动相：流动相为A：乙腈，B：0.05-0.4%磷酸水溶液；梯度洗脱程序： 0-5min，90-87%B；5-10min，87%B；10-15min，87%-85%B；15-20min，85%-84%B；20-32min，84%-82%B；32-35min，82%-80%B；35-40min，80%-78%B；40-55min，78%-75%B；55-70min，75%-70%B；70-80min，70%-60%B；80-90min，60%-35%B；90-95min，35%-20%B；95-105min，20%-10%B；105-110min，10%-5%B；110-115min，5%-10%B；115-120min，10%-20%B；120-130min，20%-90%B；130-150min，90%B。本专利技术需要指出，由于无籽刺梨中糖、酸等含量较高，待提取液制备完全后，应尽可能的将其中大极性物质最大可能去除，以保持谱图基线平稳和各未知物良好的分离，同时还需保证前处理方法的回收率达标。因此在HPLC法分析过程中，实现无籽刺梨提取液中各物质基线分离和目标物含量测定是难点。本专利技术所建立的方法可同时分离测定芦丁、槲皮素和山奈酚3种成分。目前公开的刺梨色谱条件均不能实现同时对本专利技术中的3种成分进行含量测定。进一步地，步骤（1）中，在以甲醇或含水甲醇提取时，提取溶剂甲醇浓度为50-100%v/v，优选为100%v/v，在采用100%v/v浓度时提取效果远高于采用50%v/v浓度。更进一步地，步骤（1）中，在以甲醇或含水甲醇提取时，提取方法选自回流、超声以及超声加回流3种之一。进一步地，色谱条件中，流速为0.7ml/min。进一步地，色谱条件中，磷酸水溶液浓度为0.1%。进一步地，色谱条件中，色谱柱尺寸为4.6mm×250mm，5μm。更进一步地，色谱条件中，色谱柱柱温为30℃±2℃。本专利技术检测方法中，出峰数量较多，分离度良好，基线平稳，能够对无籽刺梨果实中主要黄酮类成分进行有效检测，为其深入研究提供可靠检测手段。本专利技术首次在同一色谱条件下检测了上述无籽刺梨果实中主要黄酮类成分，共指认了3个具体化合物，可更全面跟准确地用于无籽刺梨果实黄酮类活性成分的深入研究。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1：本专利技术检测方法包括如下步骤：（1）取待检无籽刺梨果实干燥粉末，以甲醇或含水甲醇提取，减压旋干滤液，加入10ml超纯水，分别水饱和正丁醇萃取两次（醇水比4:1，体积比），10ml乙酸乙酯萃取两次，合并滤液，减压旋干并定容至10ml，为制备供试品溶液；（2）选择芦丁、槲皮素、山奈酚为对照品，制备对照品溶液；（3）分别将对照品、供试品溶液在同一色谱条件下的高效液相色谱仪中进行进样分析，根据外标法监测无籽刺梨中上述3种成分即可，色谱条件如下：色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料；检测波长：360nm；流速：0.7ml/min；流动相：流动相为A：乙腈，B：0.1%磷酸水溶液；梯度洗脱程序： 0-5min，90-87%B；5-10min，87%B；10-15min，87%-85%B；15-20min，85%-84%B；20-32min，84%-82%B；32-35min，82%-80%B；35-40min，80%-78%B；40-55min，78%-75%B；55-70min，75%-70%B；70-80min，70%-60%B；80-90min，60%-35%B；90-95min，35%-20%B；95-105min，20%-10%B；105-110min，10%-5%B；110-115min，5%-10%B；115-120min，10%-20%B；120-130min，20%-90%B；130-150min，90%B。本实施例所用无籽刺梨粉末是指无籽刺梨果实部分。试验例2：方法学考查1 材料岛津LC-20A高效液相色谱仪（包括二元梯度泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，LC solution色谱工作站），电子分析天平，超纯水机。芦丁、槲皮素和山奈酚对照品均购于成都曼斯特生物科技有限公司（供含量测定用，纯度≥98%）。乙腈、甲醇、正丁醇和乙酸乙酯（色谱纯，科密欧），水为超纯水，其余试剂为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件安捷伦C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为A：乙腈，B：0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱程序：0-5min，90-87％B；5-10min，87％B；10-15min，87％-85％B；15-20min，85％-84％B；20-32min，84％-82％B；32-35min，82％-80％B；35-40min，80％-78％B；40-55min，78％-75％B；55-70min，75％-70％B；70-80min，70％-60％B；80-90min，60％-35％B；90-95min，35％-20％B；95-105min，20％-10％B；105-110mi本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种同时检测无籽刺梨果实中3种黄酮类成分的方法，包括同时检测无籽刺梨果实中芦丁、槲皮素和山奈酚的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：步骤（1）取待检无籽刺梨果实干燥粉末，以甲醇或含水甲醇提取，减压旋干滤液，加入超纯水，用水饱和正丁醇按照醇水比4:1萃取两次，再用乙酸乙酯萃取两次，合并滤液，减压旋干并定容后制备出供试品溶液；步骤（2）选择芦丁、槲皮素、山奈酚为对照品，用100%甲醇制备对照品溶液；步骤（3）分别将对照品溶液和供试品溶液在同一色谱条件下的高效液相色谱仪中进行进样分析，根据外标法监测无籽刺梨中上述3种成分即可。
【技术特征摘要】
1.一种同时检测无籽刺梨果实中3种黄酮类成分的方法，包括同时检测无籽刺梨果实中芦丁、槲皮素和山奈酚的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：步骤（1）取待检无籽刺梨果实干燥粉末，以甲醇或含水甲醇提取，减压旋干滤液，加入超纯水，用水饱和正丁醇按照醇水比4:1萃取两次，再用乙酸乙酯萃取两次，合并滤液，减压旋干并定容后制备出供试品溶液；步骤（2）选择芦丁、槲皮素、山奈酚为对照品，用100%甲醇制备对照品溶液；步骤（3）分别将对照品溶液和供试品溶液在同一色谱条件下的高效液相色谱仪中进行进样分析，根据外标法监测无籽刺梨中上述3种成分即可。2.根据权利要求1所述的同时检测无籽刺梨果实中3种黄酮类成分的方法，其特征在于，高效液相色谱仪中的色谱条件如下：色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料；检测波长：360nm；流速：0.6-1.0ml/min；流动相：流动相为A：乙腈，B：0.05-0.4%磷酸水溶液；梯度洗脱程序： 0-5min，90-87%B；5-10min，87%B；10-15min，87%-85%B；15-20min，85%-84%B；20-32min，84%-82%B；32-35min，82%-80%B；35-40min，80%-78%B；40-55min，78%-75%B；55-70min，75%-70%B；70-80min，...
【专利技术属性】
技术研发人员：全文选，李朝婵，李婕羚，金晶，付远洪，顾云兵，唐凤华，
申请(专利权)人：贵州师范大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52
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