2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，其首先将壳寡糖标准品(壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖)及壳寡糖样品配成适宜浓度，注入高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析；然后记录壳寡糖标准品的出峰保留时间和峰面积以及壳寡糖样品中各峰的保留时间和峰面积，通过与标准物质的出峰保留时间进行比对，确定样品中各峰对应的2～6个聚合度壳寡糖；最后通过标准物质的浓度与峰面积的比值与样品中2～6个聚合度壳寡糖的峰面积，计算出样品中2～6个聚合度壳寡糖的浓度，通过与样品配制浓度的比值计算2～6个聚合度壳寡糖的总含量。本发明专利技术填补了行业内壳寡糖含量检测方法的空白。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食品检测领域，具体涉及一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法。
技术介绍
随着经济社会的发展和生活水平的提高，人们对于健康的追求也随之提升，健康且安全的功能性食品越来越受到消费者的青睐。壳寡糖是以壳聚糖为原料，经酶水解后得到的一种生物高分子，是以氨基葡萄糖为糖单元组成的功能性多糖。壳寡糖是自然界中唯一带正电荷的碱性多糖，具有稳定的三维结构，对人体具有众多有益的功能，应用前景十分广泛。它可以增进钙及矿物质的吸收，能够选择性地增殖益生菌，抑制致病菌的生长，消除人体氧负离子自由基，活化机体细胞，中和人体肿瘤周围的酸性物质，激活人体中有抗癌作用的免疫细胞，起到配合化疗、改善病症、减轻痛苦、延长生命的作用，还能够调节血脂、血糖，调节免疫系统等。壳寡糖的抑菌性可替代抗生素使用，利用其抑菌作用，可调节动物肠道内微生物的活动，预防或治疗由金黄色葡萄球菌、放线杆菌、突变链球菌等细菌引起的动物疾病，对提高畜、禽、水产动物的免疫力、抗病力及促进生长等效果十分显著。然而，目前现有技术中却没有对2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的技术问题，本专利技术提出了一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，该方法填补了行业内壳寡糖含量检测的空白。其技术解决方案包括：一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，依次包括以下步骤：a配置壳寡糖标准溶液及样品溶液，将壳寡糖标准物质壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖和壳六糖分别配制成2％、2％、4％、8％、16％浓度的标准溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；将壳寡糖样品配制成30％浓度的样品溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；b准备流动相，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，将乙腈和水分别经0.45μm的有机滤膜和无机滤膜过滤，按比例混合均匀，超声脱气30min，备用；c将壳寡糖标准溶液和样品溶液依次注入高效液相色谱仪中进行分离检测，色谱柱型号为Shodex Asahipak NH2P-50 4E，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，流动相流速1mL/min，色谱柱柱温30℃；d记录各聚合度壳寡糖标准物质的出峰保留时间和峰面积，样品溶液经高效液相色谱检测后，出峰保留时间与标准物质的出峰保留时间进行归属，记录峰面积，通过标准物质溶液的浓度与峰面积的比值和样品中2～6个聚合度壳寡糖的浓度与峰面积的比值相等的关系计算出2～6个聚合度的壳寡糖的浓度，进而计算出的2～6个聚合度的壳寡糖的浓度与配制样品的浓度的比值即为各个聚合度壳寡糖的含量，将各个聚合度壳寡糖的含量相加之和即为样品中2～6个聚合度壳寡糖的总含量。作为本专利技术的一个优选方案，上述高效液相色谱仪配备示差折光检测器。作为本专利技术的另一个优选方案，步骤c中，样品溶液注入高效液相色谱仪后，此时的色谱柱对2～6个聚合度的壳寡糖有不同的洗脱速率。本专利技术所带来的有益技术效果：本专利技术提供了一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，填补了行业内壳寡糖含量检测方法的空白，为壳寡糖国家标准的制定提供了一种检测依据。本专利技术对于壳寡糖产业的技术提升和健康发展具有重要的促进作用，壳寡糖丰富了低聚功能糖的产品种类，满足市场及消费者的健康需求，具有很好的市场前景和经济效益。具体实施方式本专利技术提出了一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，为了使本专利技术的优点、技术方案更加清楚、明确，下面结合具体实施例对本专利技术做详细说明。下面实施例所用高效液相色谱仪为日立D-2000型，色谱柱型号为Shodex Asahipak NH2P-50 4E。实施例1：本专利技术，2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，具体步骤如下：1.样品的处理(1)将标准物质壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖和壳六糖分别配制成2％、2％、4％、8％、16％浓度的标准溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；(2)将壳寡糖样品配制成30％浓度的样品溶液，经0.22μm滤膜过滤，4℃冷藏，备用；2.高效液相色谱仪分离检测高效液相色谱仪配备示差折光检测器，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，流动相流速1mL/min，色谱柱温度为30℃，取2～6个聚合度壳寡糖标准溶液和样品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪中进行检测；3.记录2～6个聚合度壳寡糖标准物质的出峰保留时间及峰面积，壳寡糖样品溶液经高效液相色谱检测后，出峰保留时间通过标准物质的出峰保留时间进行归属，记录峰面积，通过壳寡糖标准物质的浓度和峰面积的比值与样品中单个聚合度的壳寡糖的峰面积和浓度的比值相等的关系，计算单个聚合度壳寡糖的浓度，该浓度与样品总浓度的比值即为该聚合度壳寡糖的含量。在样品溶液注入高效液相色谱仪后，色谱柱对2～6个聚合度的壳寡糖有不同的洗脱速率，从而使2～6个聚合度的壳寡糖可以很好地分离，样品中2～6个聚合度壳寡糖可以通过与标准物质出峰保留时间进行归属，判定出样品峰中2～6个聚合度的壳寡糖；通过标准物质的浓度与峰面积的比值和样品中对应的2～6个聚合度壳寡糖的峰面积，求得2～6个聚合度壳寡糖各自的浓度；壳寡糖样品中2～6个聚合度壳寡糖各自的浓度占样品溶液浓度的比值即为2～6个聚合度壳寡糖分别的含量，2～6个聚合度壳寡糖各自含量的总和即为样品中2～6个聚合度壳寡糖的总含量。需要说明的是，在本说明书的教导下本领域技术人员所做出的任何等同方式，或明显变型方式均应在本专利技术的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，其特征在于，依次包括以下步骤：a配置壳寡糖标准溶液及样品溶液，将壳寡糖标准物质壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖和壳六糖分别配制成2％、2％、4％、8％、16％浓度的标准溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；将壳寡糖样品配制成30％浓度的样品溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；b准备流动相，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，将乙腈和水分别经0.45μm的有机滤膜和无机滤膜过滤，按比例混合均匀，超声脱气30min，备用；c将壳寡糖标准溶液和样品溶液依次注入高效液相色谱仪中进行分离检测，色谱柱型号为Shodex Asahipak NH2P‑50 4E，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，流动相流速1mL/min，色谱柱柱温30℃；d记录各聚合度壳寡糖标准物质的出峰保留时间和峰面积，样品溶液经高效液相色谱检测后，出峰保留时间与标准物质的出峰保留时间进行归属，记录峰面积，通过标准物质溶液的浓度与峰面积的比值和样品中2～6个聚合度壳寡糖的浓度与峰面积的比值相等的关系计算出2～6个聚合度的壳寡糖的浓度，进而计算出的2～6个聚合度的壳寡糖的浓度与配制样品的浓度的比值即为各个聚合度壳寡糖的含量，将各个聚合度壳寡糖的含量相加之和即为样品中2～6个聚合度壳寡糖的总含量。...

【技术特征摘要】
1.一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，其特征在于，依次包括以下步骤：a配置壳寡糖标准溶液及样品溶液，将壳寡糖标准物质壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖和壳六糖分别配制成2％、2％、4％、8％、16％浓度的标准溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；将壳寡糖样品配制成30％浓度的样品溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；b准备流动相，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，将乙腈和水分别经0.45μm的有机滤膜和无机滤膜过滤，按比例混合均匀，超声脱气30min，备用；c将壳寡糖标准溶液和样品溶液依次注入高效液相色谱仪中进行分离检测，色谱柱型号为Shodex Asahipak NH2P-50 4E，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，流动相流速1mL/min，色谱柱柱温30℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：李悦明，夏秀梅，辛跃强，赵常有，徐建春，
申请(专利权)人：青岛科海生物有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37