一种猫爪草的人工栽培方法技术

本发明专利技术公开一种中草药猫爪草的人工栽培方法，在中草药人工栽培方面首次利用猫爪草花托外植体诱导培养的方法，分化诱导培养得到猫爪草幼苗，经驯化、炼苗、移栽培育后得到可作为中药材使用的猫爪草块根，还得到优良的猫爪草种质资源。本发明专利技术经愈伤分化培养得到的猫爪草幼苗，既克服人工移栽的区域限制与成本劣势，又克服了通过种子繁殖时得到种质资源的基因的非典型性，具有在推广猫爪草人工栽培领域的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种猫爪草的人工栽培方法，具体涉及一种基于猫爪草花药离体培育的人工栽培方法。
技术介绍
猫爪草是毛茛科多年生草本植物小毛茛，以块根入药。主要产于江苏、浙江、安徽、江西、河南、湖北、贵州、广西等地区。猫爪草味微甘、性平，入肺、肝二经，有散结、消肿、清热、解毒的功能。主治肺结核、颈上瘰疬、咽喉炎、痔疮等，还可治疗多种癌症、淋巴瘤等，防癌效果显著，治愈率高，是中药中抗肿瘤、解毒、散结的一种好药材。由于猫爪草为野生，采挖方便，具有较广泛疗效，市场需求量大，且价格比较高，引发产区农民积极采挖，使猫爪草野生资源日益减少，成为目前紧缺的中药材，因此，人工栽培猫爪草成为一种必然的趋势。现有技术人工栽培猫爪草的方法主要是人工移栽、块根繁殖、种子繁殖。由于野生猫爪草的成本低且部分地区较为常见，药农大多采用人工移栽的方法栽培猫爪草，但是该方法仅适用于具有大量野生猫爪草的环境，不适用于大多数地区。块根繁殖是利用猫爪草的块根旁的小块根扦插栽种的方法来实现人工繁殖，块根繁殖的系数低，不能满足大规模生产的需要，而且由于培养环境如光照、水分、温度、营养等以及激素浓度等因素易造成猫爪草种苗发生无性变异。毛茛科植物具有很大的变异性，而猫爪草通过异花传粉也会导致其基因混杂，通过此方法得到的种子继续培育后达不到预期药用效果，易造成猫爪草中棕榈酸乙酯、肉豆蔻酸、棕榈酸、β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇等有效成分的缺失。
技术实现思路
为克服现有技术的缺陷，本专利技术的目的是提供一种猫爪草的人工栽培方法，具体步骤如下：(1)花托外植体预处理：选取猫爪草的花蕾，在4℃环境中冷藏3～5天后，将花蕾取出自然恢复至室温，剥去苞片和小花，用纯净水冲洗，先在0.05％的升汞水溶液中消毒5～8min，再用70％的酒精消毒20～40s，之后用无菌水冲洗3次，即得到猫爪草花托外植体。以上涉及的百分比均为体积百分比。(2)外植体接种及诱导培养：将猫爪草花托外植体移入到灭菌后的第一培养基中，将温度设定为23±1℃，以蓝光灯为光源，光照强度控制为400～800Lx，光周期控制为光14h/暗10h，每十天更换一次培养基，直到诱导出愈伤组织。所述第一培养基的组成成分为：KNO3 800～1300mg/L，2-氨基-5-羧基戊酰胺800～1200mg/L，KH2PO4 300～450mg/L，CaCl2·2H2O 320～350mg/L，MgSO4·7H2O 180～240mg/L，EDTA 120～180mg/L，FeSO4·7H2O 30～50mg/L，MnSO4·4H2O 50～80mg/L，ZnSO4·7H2O 15～30mg/L，H3BO3 8～10mg/L，KI 5～10mg/L，Na2MoO4·2H2O 1～5mg/L，CoCl2·6H2O 0.2～0.5mg/L，4-碘苯氧乙酸0.15～0.20mg/L，肌醇30～80mg/L，甘氨酸0.5～1.0mg/L，维生素B1 0.5～0.75mg/L，维生素B6 1.0～1.5mg/L，烟酸1.0～1.5mg/L，蔗糖30～50g/L，琼脂10～15g/L，激动素KT 0.5～1.0mg/L，萘乙酸NAA0.3～0.4mg/L，山梨醇50～70g/L，生物素0.15～0.20mg/L，盐酸吡哆醇0.5～1.0mg/L，盐酸硫胺素0.5～1.0mg/L，甲基亚硝基脲1.5～2.0mg/L，吲哚丁酸1.5～2.0mg/L，丙氨酸5～10mg/L，叶酸5～10mg/L，调环酸钙1.5～2.0mg/L，秋水仙碱1.5～2.0mg/L，水解蛋白2.0～2.5g/L。(3)转移诱导培养：将步骤(2)得到的愈伤组织转移到第二培养基，温度为27±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1800～2500Lx，光周期控制为光14h/暗10h，愈伤组织诱导出嫩芽后，将嫩芽从猫爪草花托外植体上完整地切下，转移到第三培养基内继续以相同的条件培养至形成猫爪草幼苗。所述第二培养基的组成成分在步骤(2)所述第一培养基基础上添加了吲哚丁酸0.5～2.0mg/L和2,4-二氯苯氧乙酸丁酯1.5～2.0mg/L。所述第三培养基的组成成分在所述第二培养基基础上添加了6-苄氨基嘌呤1.5～2.0mg/L。(4)幼苗的驯化与炼苗：将猫爪草幼苗移栽到炼苗基质中，并逐步转移到外部环境中。所述炼苗基质的组成成分为：珍珠岩、蛭石、锯末、松树皮、水苔、花泥、泥炭土以及钙镁磷钾肥，质量比为1:0.5～1.5:0.2～0.8:0.2～0.8:0.1～0.5:0.05～0.15:0.05～0.15:0.005～0.015，优选质量比为1:1:0.5:0.5:0.3:0.1:0.1:0.01。(5)移栽：选择土层深厚、排水良好的山坡或荒地作为待播田，整平耕细后施加底肥，在步骤(4)所述的幼苗适应外部环境正常生长后，移栽至所述待播田，行距10～15cm，株距5～8cm。所述底肥包括猫爪草专用缓释肥，所述猫爪草专用缓释肥组成及重量份数为：尿素100份、多聚糖50～100份、碳酸氢铵20～25份、碳酸氢铵12～14份、硝酸钙3～6份，磷酸二铵50～60份、钙镁磷肥12～14份、硫酸钾50～60份、磷酸铵锌3～5份、硅酸钾4～7份、硼砂1～3份、硫酸锰1～3份。其中多聚糖为猫爪草生长提供必需的生物碳能，促进甾醇与酸类物质的合成。优选地，所述多聚糖的重量份数为65份。(6)田间管理：生长期内及时进行松土、浇水、除草等常规管理；病虫害管理方面，为保证猫爪草的中药特性，对一般危害性小的虫害不予施加农药，而对病害则以预防为主，当病害发生后采用中药杀菌液对猫爪草进行杀菌处理。(7)收获与采种：当猫爪草栽培满一年后，将其地下部分根部的块根挖出，地上部分的种子予以采集，同时完成猫爪草的人工栽培与育种，既获得经济效益又获得稳定的猫爪草种质资源。本专利技术利用中草药猫爪草花托外植体诱导培养的方法，对猫爪草进行人工栽培，这在中草药人工栽培方面尚属首次。本专利技术涉及的一种猫爪草的人工栽培方法，采用猫爪草的花托外植体经过诱导培养得到猫爪草幼苗，缩短愈伤组织的愈伤分化时间，提高愈伤组织的形成数量与效率。经愈伤分化培养得到的猫爪草，既克服人工移栽的区域限制与成本劣势，又克服了通过种子繁殖时得到种质资源的基因的非典型性。本专利技术具有在推广猫爪草人工栽培领域的应用前景。具体实施方式下面通过具体实施例，进一步对本专利技术的技术方案进行具体说明。应该理解，下面的实施例只是作为具体说明，而不限制本专利技术的范围，同时本领域的技术人员根据本专利技术所做的显而易见的改变和修饰也包含在本专利技术范围之内。实施例1一种猫爪草离体培育方法，具体步骤如下：(1)花托外植体预处理：选取猫爪草的花蕾，在4℃环境中冷藏3天后，将花蕾取出自然恢复至室温，剥去苞片和小花，用纯净水冲洗，先在0.05％的升汞水溶液中消毒5min，再用70％的酒精消毒30s，之后用无菌水冲洗3次，即得到猫爪草花托外植体；以上涉及的百分比均为体积百分比。(2)外植体接种及诱导培养：将猫爪草花托外植体移入到灭菌后的第一培养基中，将温度设定为23±1℃，以蓝光灯为光源，光照强度控制为600Lx，光周期控制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猫爪草的人工栽培方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)花托外植体预处理：选取猫爪草的花蕾，在4℃环境中冷藏3～5天后，将花蕾取出自然恢复至室温，剥去苞片和小花，用纯净水冲洗，先在0.05％的升汞水溶液中消毒5～8min，再用70％的酒精消毒20～40s，之后用无菌水冲洗3次，即得到猫爪草花托外植体；以上涉及的百分比均为体积百分比；(2)外植体接种及诱导培养：将猫爪草花托外植体移入到灭菌后的第一培养基中，将温度设定为23±1℃，以蓝光灯为光源，光照强度控制为400～800Lx，光周期控制为光14h/暗10h，诱导出愈伤组织；(3)转移诱导培养：将步骤(2)得到的愈伤组织转移到第二培养基，温度为27±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1800～2500Lx，光周期控制为光14h/暗10h，愈伤组织诱导出嫩芽后，将嫩芽从猫爪草花托外植体上完整地切下，转移到第三培养基内继续以相同的条件培养至形成猫爪草幼苗；(4)幼苗的驯化与炼苗：将猫爪草幼苗移栽到炼苗基质中，并逐步转移到外部环境中；(5)移栽：选择土层深厚、排水良好的山坡或荒地作为待播田，整平耕细后施加底肥，在步骤(4)所述的幼苗适应外部环境正常生长后，移栽至所述待播田，行距10～15cm，株距5～8cm；(6)田间管理：生长期内及时进行松土、浇水、除草等常规管理；病虫害管理方面，为保证猫爪草的中药特性，对一般危害性小的虫害不予施加农药，而对病害则以预防为主，当病害发生后采用中药杀菌液对猫爪草进行杀菌处理；(7)收获与采种：当猫爪草栽培满一年后，将其地下部分根部的块根挖出，地上部分的种子予以采集，同时完成猫爪草的人工栽培与育种。...

【技术特征摘要】
1.一种猫爪草的人工栽培方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)花托外植体预处理：选取猫爪草的花蕾，在4℃环境中冷藏3～5天后，将花蕾取出自然恢复至室温，剥去苞片和小花，用纯净水冲洗，先在0.05％的升汞水溶液中消毒5～8min，再用70％的酒精消毒20～40s，之后用无菌水冲洗3次，即得到猫爪草花托外植体；以上涉及的百分比均为体积百分比；(2)外植体接种及诱导培养：将猫爪草花托外植体移入到灭菌后的第一培养基中，将温度设定为23±1℃，以蓝光灯为光源，光照强度控制为400～800Lx，光周期控制为光14h/暗10h，诱导出愈伤组织；(3)转移诱导培养：将步骤(2)得到的愈伤组织转移到第二培养基，温度为27±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1800～2500Lx，光周期控制为光14h/暗10h，愈伤组织诱导出嫩芽后，将嫩芽从猫爪草花托外植体上完整地切下，转移到第三培养基内继续以相同的条件培养至形成猫爪草幼苗；(4)幼苗的驯化与炼苗：将猫爪草幼苗移栽到炼苗基质中，并逐步转移到外部环境中；(5)移栽：选择土层深厚、排水良好的山坡或荒地作为待播田，整平耕细后施加底肥，在步骤(4)所述的幼苗适应外部环境正常生长后，移栽至所述待播田，行距10～15cm，株距5～8cm；(6)田间管理：生长期内及时进行松土、浇水、除草等常规管理；病虫害管理方面，为保证猫爪草的中药特性，对一般危害性小的虫害不予施加农药，而对病害则以预防为主，当病害发生后采用中药杀菌液对猫爪草进行杀菌处理；(7)收获与采种：当猫爪草栽培满一年后，将其地下部分根部的块根挖出，地上部分的种子予以采集，同时完成猫爪草的人工栽培与育种。2.根据权利要求1所述的猫爪草的人工栽培方法，其特征在于：步骤(2)所述第一培养基的组成成分为：KNO3 800～1300mg/L，2-氨基-5-羧基戊酰胺800～1200mg/L，KH2PO4 300～450mg/L，CaCl2·2H2O 320～350mg/L，MgSO4·7H2O 180～240mg/L，EDTA120～180mg/L，FeSO4·7H2O 30～50mg/L，MnSO4·4H2O 50～80mg/L，ZnSO4·7H2O 15～30mg/L，H3BO3 8～10mg/L，KI 5～10mg/L，Na2MoO4·2H2O 1～5mg/L，CoCl2·6H2O 0.2～0.5mg/L，4-碘苯氧乙酸0.15～0....

【专利技术属性】
技术研发人员：林少会，许建中，孟剑华，
申请(专利权)人：无锡南理工科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32