美洲大蠊冻干粉质量控制方法技术

本发明专利技术公开了一种美洲大蠊冻干粉质量控制方法，包括利用薄层色谱法进行氨基酸鉴别、利用紫外‑可见分光光度法对氨基酸和多肽进行含量测定、利用高效液相色谱法对尿嘧啶、次黄嘌呤、肌酐进行含量测定。本发明专利技术的美洲大蠊冻干粉质量控制方法，从氨基酸定性鉴别、氨基酸、多肽、核苷类成分含量测定、氨基酸组成分析、多肽分子量测定等几个方面对美洲大蠊冻干粉质量进行检测控制。对美洲大蠊冻干粉的质量提供了有力的保证，保障了以美洲大蠊冻干粉为中间体的后期制剂的质量和疗效。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药
，具体地说，涉及一种美洲大蠊冻干粉质量控制方法。
技术介绍
美洲大蠊(Periplaneta americana(L.))为昆虫纲有翅亚纲蜚蠊目蜚蠊科大蠊属昆虫的干燥虫体，又名蟑螂、石姜、滑虫、偷油婆、茶婆子，入药始载于《神农本草经》，谓“味咸，寒。主血瘀、症坚、寒热，破积聚，喉咽痹，内寒，无子”，具有活血化瘀、解毒消疳、利水消肿等功效，用于治疗小儿疳积、疔疮、痈肿、喉蛾、无名肿毒、梅毒以及毒蛇、蜈蚣咬伤等疾病。含有蛋白质、氨基酸、肽类、糖类等多种有效成分，现代研究表明，在抗癌、提高免疫力、治疗心血管疾病、修复皮肤等方面具有显著的作用。癌症是仅次于心血管疾病的人类第二大杀手，严重危害人类健康，已逐渐成为重大的社会公共卫生问题。西医对肿瘤的治疗仍以手术、放疗和化疗为主，毒副作用严重和广泛，导致病人机体状况的恶化及生命质量的下降，多数患者因不能忍受而放弃治疗，甚至死于过度治疗。中医药对肿瘤的治疗起着不可估量的作用，恶性肿瘤属于中医“癌”、“岩”、“恶肿”、“积聚”等范畴，中药治疗恶性肿瘤立足于整体观念，扶正与祛邪相结合，标本兼治，从而增强疗效，具有西医不可比拟的独特优势(多途径、多靶点和多环节的共同作用)，逐渐成为抗肿瘤研究的热点。美洲大蠊具有高蛋白的资源优势，其体内粗蛋白质含量在20％-70％之间，远远高于猪肉、牛肉、鸡肉等肉类。美洲大蠊还富含氨基酸18种以上，包括人体半必需氨基酸2种和人体必需氨基酸7种。文献报道现已从美洲大蠊中分离鉴定出50多种神经肽，如神经肽原肛肽、昆虫抗菌肽等。其中昆虫抗菌肽是具有生物活性短链多肽，具对热稳定、广谱抗菌等特点，能抑制多种肿瘤细胞及动物实体瘤的生长，且不会对正常细胞造成伤害。廖吉在“蜚蠊油脂在保健食品和医药上的应用及制备方法”(CN1500495A)中指出：“蜚蠊含油酸，亚油酸，亚麻酸等不饱和脂肪酸，其含量高达71.903％，具有抗菌和修复创伤，增强免疫力等作用”。蒙松年、焦春香等采用GC-MS对美洲大蠊的提取物进行分析，发现含有较多烯醇、烯酸类和烷烃、多元醇、大环内酯类物质。此外，美洲大蠊体内还含有信息素、糖类(如粘多糖等)，酶，酯酶，辅酶A及丰富的矿物质和微量元素。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术所要解决的技术问题是提供一种美洲大蠊冻干粉质量控制方法。本专利技术公开了一种美洲大蠊冻干粉质量控制方法，包括利用薄层色谱法进行氨基酸鉴别、利用紫外-可见分光光度法对氨基酸和多肽进行含量测定、利用高效液相色谱法对尿嘧啶、次黄嘌呤、肌酐进行含量测定。进一步的，所述氨基酸鉴别方法为称取0.5g美洲大蠊冻干粉，加70％的乙醇10ml，超声10min，过滤，收集滤液，水浴挥干，残渣加70％的乙醇5ml溶解，作为供试品溶液；分别取丙氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加70％的乙醇制成1mg/ml的对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为75:15:10的正丁醇-甲酸-水溶液为展开剂，饱和30min后展开，取出，晾干，喷以0.2％茚三酮乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰；观察硅胶G薄层板，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，在日光下显相同颜色的斑点。进一步的，所述多肽含量测定方法为：精密称取牛血清白蛋白对照品(BSA)51.80mg，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇匀，配成每1ml含0.5180mg牛血清白蛋白的对照品溶液；精密称取冻干粉0.2g，置容量瓶中，加入70％的乙醇2.0ml，精密称定重量，超声提取10min，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液1ml用70％乙醇定容于100ml容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液；取供试品溶液和对照品溶液各1ml，分别加碱性铜试剂5.00ml，混匀，快速加入酚试剂0.5ml，快速摇匀，55℃水浴15min，取出冷却至室温，显色后，照分光光度法，在740nm处测定吸光度，计算即得。进一步的，所述氨基酸含量测定方法为：精密称取16.08mg丙氨酸对照品，置100ml容量瓶中，加10％的异丙醇溶解，并稀释至刻度，作为母液；精密量取所述母液4ml，至50ml容量瓶中，用水稀释至刻度，配制成每1ml含12.86μg丙氨酸的对照品溶液；精密称取冻干粉0.2g，置具塞锥形瓶中，加入70％的乙醇10ml，精密称定重量，超声提取15min，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，摇均，滤过，取续滤液1ml用70％乙醇定容于100ml容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液；取供试品溶液和对照品溶液各2ml至10ml具塞刻度试管中，分别加入蒸馏水至2ml，加0.1ml新鲜配制的1％Vc溶液，3ml茚三酮醇溶液，混匀，在100℃水浴中加热15min，取出迅速冷至室温，加入60％乙醇至刻度，在570nm处测定吸光度，计算即得。进一步的，所述尿嘧啶、次黄嘌呤、肌酐进行含量测定方法为色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇为流动相A，0.7％冰乙酸溶液为流动相B进行梯度洗脱；检测波长为254nm，柱温30℃，流速0.7ml/min；洗脱梯度为：0-15min 100％的0.7％冰乙酸溶液-99％的0.7％冰乙酸溶液，15-40min 99％的0.7％冰乙酸溶液-92％的0.7％冰乙酸溶液，40-50min 92％的0.7％冰乙酸溶液-45％的0.7％冰乙酸溶液；对照品溶液的制备：取尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷对照品，精密称定，置量瓶中，加超纯水制成含尿嘧啶5.02μg/ml、次黄嘌呤25.2μg/ml、肌苷127.5μg/ml的混合对照品溶液；供试品溶液的制备：精密称取冻干粉0.2g，置具塞锥形瓶中，蒸馏水10ml，精密称定重量，超声提取10min，放冷，用蒸馏水补足减失的重量，摇均，滤过，精密量取续滤液5ml，蒸干，残渣加水定容至10ml量瓶中，0.45μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；测定方法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算即得，冻干粉每克含尿嘧啶不得少于0.22％、次黄嘌呤不得少于0.77％、肌酐不得少于4.62％。与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：1)本专利技术的美洲大蠊冻干粉质量控制方法，从氨基酸定性鉴别、氨基酸、多肽、核苷类成分含量测定、氨基酸组成分析、多肽分子量测定等几个方面对美洲大蠊冻干粉质量进行检测控制。对美洲大蠊冻干粉的质量提供了有力的保证，保障了以美洲大蠊冻干粉为中间体的后期制剂的质量和疗效。2)本专利技术的美洲大蠊冻干粉质量控制方法，进一步完善美洲大蠊饮片、提取物及其制剂的质量标准，对美洲大蠊饮片、提取物及其制剂有一定的参考价值。当然，实施本专利技术的任一产品必不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1所示为本专利技术实施例1中美洲大蠊冻干粉薄层色谱图；图2所示为本专利技术实施例2中美洲大蠊冻干粉紫外扫描图(对照品)；图3所示为本专利技术实施例2中美洲大蠊冻干粉紫外扫描图(供试品)；图4所示为本专利技术实施例2中牛血清白本文档来自技高网...

【技术保护点】
美洲大蠊冻干粉质量控制方法，其特征在于，包括利用薄层色谱法进行氨基酸鉴别、利用紫外‑可见分光光度法对氨基酸和多肽进行含量测定、利用高效液相色谱法对尿嘧啶、次黄嘌呤、肌酐进行含量测定。

【技术特征摘要】
1.美洲大蠊冻干粉质量控制方法，其特征在于，包括利用薄层色谱法进行氨基酸鉴别、利用紫外-可见分光光度法对氨基酸和多肽进行含量测定、利用高效液相色谱法对尿嘧啶、次黄嘌呤、肌酐进行含量测定。2.如权利要求1所述的美洲大蠊冻干粉质量控制方法，其特征在于，所述氨基酸鉴别方法为称取0.5g美洲大蠊冻干粉，加70％的乙醇10ml，超声10min，过滤，收集滤液，水浴挥干，残渣加70％的乙醇5ml溶解，作为供试品溶液；分别取丙氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸对照品，精密称定，置棕色量瓶中，加70％的乙醇制成1mg/ml的对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述四种溶液各1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为75:15:10的正丁醇-甲酸-水溶液为展开剂，饱和30min后展开，取出，晾干，喷以0.2％茚三酮乙醇溶液，105℃加热至斑点清晰；观察硅胶G薄层板，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，在日光下显相同颜色的斑点。3.如权利要求1所述的美洲大蠊冻干粉质量控制方法，其特征在于，所述多肽含量测定方法为：精密称取牛血清白蛋白对照品51.80mg，置100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解至刻度，摇匀，配成每1ml含0.5180mg牛血清白蛋白的对照品溶液；精密称取冻干粉0.2g，置容量瓶中，加入70％的乙醇2.0ml，精密称定重量，超声提取10min，放冷，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液1ml用70％乙醇定容于100ml容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液；取供试品溶液和对照品溶液各1ml，分别加碱性铜试剂5.00ml，混匀，快速加入酚试剂0.5ml，快速摇匀，55℃水浴15min，取出冷却至室温，显色后，照分光光度法，在740nm处测定吸光度，计算即得。4.如权利要求1所述的美洲大蠊冻干粉质量控制方法，其特征在于，所述氨基酸含量测定方法为：精密称取16.08mg丙氨酸对照品，置100ml容量瓶中，加10％的异丙醇溶解，并稀释至刻度，作为母液；精密量取所述母液4ml，至50...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丹，刘明华，余昕，陈斯玮，周洁，孙琴，傅超美，
申请(专利权)人：西南医科大学，
类型：发明
国别省市：四川;51