本公开涉及侧向流和相关免疫测定中的信号放大。具体地,本公开提供用于增强测试样品中的抗体检测的方法、装置、组合物(例如捕获复合物)和试剂盒。该方法、装置和组合物利用可检测的Fc结合分子,例如蛋白A、蛋白G、和/或Fc特异性抗体放大免疫测定例如侧向流测定中检测抗体的信号。
Signal amplification in lateral flow and related immunoassay
The present disclosure relates to signal amplification in lateral flow and related immunoassays. In particular, the present invention provides methods, devices, compositions, such as capture complexes, and kits for the detection of antibodies in a test sample. The method, apparatus, and composition use a detectable Fc binding molecule, such as protein A, protein G, and / or Fc specific antibodies to amplify a signal for the detection of antibodies such as side flow measurements in immunoassays.
【技术实现步骤摘要】
本申请是2012年11月20日提交的申请号为201280057143.5(PCT申请号PCT/US2012/066108)、专利技术名称为“侧向流和相关免疫测定中的信号放大”的专利技术专利申请的分案申请。相关申请的交叉引用本申请要求于2011年11月21日提交的美国临时申请第61/562,302号的权益,其通过引用以其整体并入本文。专利技术背景免疫测定用途广泛,并常用于鉴定感染原。某些免疫测定依赖于宿主对给定感染原的免疫反应,例如,通过测定特异性结合该感染原的一种或多种独特抗原的宿主抗体的存在。多种类型的免疫测定系统可用于诊断目的,包括大型、自动化的中央实验室系统和相对简易的柜台检测。这些免疫测定采用多种检测形式,例如凝集反应测定,沉淀素测定,酶联免疫测定,直接荧光测定,免疫组化检测,补体结合测定,血清学试验,免疫电泳测定以及侧向流和通流试验(即快速“条(strip)”检测)。免疫测定能对多种疾病提供快速、简便和高效的诊断。然而,本领域仍存在对具有高灵敏度的改进的免疫测定的需求。专利技术概述本专利技术部分基于发现添加可检测的Fc结合分子(例如蛋白A缀合物,蛋白G缀合物,第二抗体缀合物)可用于在免疫测定,例如基于抗原的捕获或夹心型测定中检测抗体。这些可检测的Fc结合分子可单独或与其他可检测实体组合用于在免疫测定中检测抗体。例如,一旦待测抗体被抗体特异性结合实体(例如抗原)捕获,这些Fc结合分子可用于检测该抗体。在另一个实例中,这些Fc结合分子可用作可检测信号的第二来源,例如与其他标记的或可检测的抗体结合实体(如抗原)组合。该发现可用于本文所述的多种捕获型测定、相关方法、组合物以及试剂盒。因此,某些实施方式包括用于检测测试样品中的抗体的方法,所述方法包含:(a)使所述测试样品与第一检测物接触以形成包含第一检测物和所述抗体的第一复合物,其中第一检测物包含与第一可检测实体缀合的Fc结合分子;(b)使第一复合物与固定于表面的测试区域的捕获实体接触,其中所述捕获实体能够与所述抗体特异性结合;以及(c)检测来自测试区域中的第一可检测实体的信号的存在,其中所述信号的存在表明测试样品中存在所述抗体。在某些实施方式中,第一检测物固定于表面的缀合区域,其中所述缀合区域与表面的测试区域不重叠。在具体实施方式中,Fc结合分子是蛋白A、蛋白G或二者。在某些实施方式中,第一检测物包含各自与可检测实体缀合的蛋白A和蛋白G。在这些实施方式中,可根据待测免疫球蛋白的类型调整蛋白A与蛋白G的比率,从而优化信号放大水平。例如,在一些实施方式中,蛋白A和蛋白G以约10:1至约1:10,更优选约5:1至约1:5的比率存在。在某些实施方式中,捕获实体是抗原或抗原性肽。在具体实施方式中,所述抗原或抗原性肽来自选自以下的生物体:心丝虫,例如犬心丝虫,犬埃里希体(Ehrlichia canis),伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi),埃氏疏螺旋体(Borrelia afzelii),伽氏疏螺旋体(Borrelia garinii),嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum),猫白血病毒,细小病毒,流感A株,流感B株,禽流感病毒,呼吸道合胞体病毒,军团杆菌(Legionella),腺病毒,轮状病毒,猫免疫缺陷病毒,人免疫缺陷病毒和甲类链球菌(Streptococcus)。在某些实施方式中,第一可检测实体是金属纳米颗粒,金属纳米壳,荧光团或有色乳胶颗粒。在某些实施方式中,金属纳米颗粒或金属纳米壳选自由金颗粒、银颗粒、铜颗粒、铂颗粒、镉颗粒、复合颗粒、金空心球、金涂覆二氧化硅纳米壳和二氧化硅涂覆金壳组成的组。本文提供的某些方法进一步包含使测试样品与第二检测物接触,其中第二检测物包含与第二可检测实体缀合的抗原或抗原性肽,所述抗原或抗原性肽能够与抗体特异性结合。在某些实施方式中,第一和第二检测物固定于缀合区域,其中缀合区域与表面测试区域不重叠。在某些实施方式中,缀合区域进一步包含对照检测物。信号放大水平可通过调整第一检测物与第二检测物的比率来选择。在某些实施方式中,第一检测物与第二检测物的比率为约20:1至约1:20,更优选约20:1至约1:1。在具体实施方式中,第一和第二可检测实体相同。在更具体的实施方式中,第一和第二可检测实体均为金纳米颗粒。在其他实施方式中,第一和第二可检测实体不同。在某些实施方式中,所述表面是侧向流测定装置中的流动通道,微孔板的表面或分析转子中的流动通道。如上所述,某些实施方式使用与可检测实体缀合的第二检测物,该第二检测物是抗原或抗原性肽。在这些及相关实施方式的一些中,抗原或抗原性肽来自选自由心丝虫,例如犬心丝虫,犬埃里希体,沙费埃里希体(Ehrlichia chaffeensis),伊氏埃里希体,伯氏疏螺旋体,埃氏疏螺旋体,伽氏疏螺旋体,嗜吞噬细胞无形体,扁平无形体(Anaplasma platys),猫白血病毒,细小病毒,例如犬细小病毒,流感A株,流感B株,禽流感病毒,呼吸道合胞体病毒,军团杆菌,腺病毒,轮状病毒,猫免疫缺陷病毒,人免疫缺陷病毒和甲类链球菌组成的组的生物体。在某些实施方式中,所述表面是侧向流测定装置中的流动通道或分析转子中的流动通道。在具体实施方式中,测试样品是血液、血清或血浆。还包括抗体检测装置,其包含上样区域;缀合区域,其中所述缀合区域包含可移动的第一检测物,所述第一检测物包括与第一可检测实体缀合的Fc结合分子;以及测试区域,其中所述测试区域包含能够与所述抗体特异性结合的固定的捕获实体;其中所述上样区域,缀合区域和测试区域被设置使得在操作中,液体样品被施加至上样区域时,与缀合区域和测试区域流体连通。在某些实施方式中,所述Fc结合分子是蛋白A和/或蛋白G。在某些实施方式中,捕获实体是抗原或抗原性肽。在具体实施方式中,抗原或抗原性肽来自选自由心丝虫,例如犬心丝虫,犬埃里希体,沙费埃里希体,伊氏埃里希体,伯氏疏螺旋体,埃氏疏螺旋体,伽氏疏螺旋体,嗜吞噬细胞无形体,扁平无形体,猫白血病毒,细小病毒,例如犬细小病毒,流感A株,流感B株,禽流感病毒,呼吸道合胞体病毒,军团杆菌,腺病毒,轮状病毒,猫免疫缺陷病毒,人免疫缺陷病毒和甲类链球菌组成的组的生物体。在具体实施方式中,第一可检测实体是金属纳米颗粒、金属纳米壳、荧光团或有色乳胶颗粒。在具体实施方式中,金属纳米颗粒或金属纳米壳选自由金颗粒、银颗粒、铜颗粒、铂颗粒、镉颗粒、复合颗粒、金空心球、金涂覆二氧化硅纳米壳和二氧化硅涂覆金壳组成的组。在某些实施方式中,所述装置进一步包含对照区域,当液体样品施加至上样区域时,该对照区域与液体样品流体连通。在某些实施方式中,对照区域包含能够与对照检测物特异性结合的固定的结合配偶体。在具体实施方式中,第一检测物包含与第一可检测实体缀合的蛋白A或蛋白G,且所述固定的结合配偶体是抗蛋白A或抗蛋白G抗体。某些装置进一步包含位于测试区域下游的吸收垫(absorbent pad)。在某些装置中,缀合区域位于上样区域的上游。在某些实施方式中,缀合区域位于上样区域的下游。在某些实施方式中,上样区域包含血液分离材料。在某些情况下,缀合区域进一步包含可移动的第二检测物,其中第二检测物包含与第二可检测实体缀合的抗原本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于检测测试样品中的抗体的方法,其包含:(a)使所述测试样品与第一检测物接触以形成包含第一检测物和所述抗体的第一复合物,其中第一检测物包含与第一可检测实体缀合的Fc结合分子;(b)使第一复合物与固定于表面的测试区域的捕获实体接触,其中所述捕获实体能够与所述抗体特异性结合;以及(c)检测来自所述测试区域中的第一可检测实体的信号的存在,其中所述信号的存在表明所述测试样品中存在所述抗体。
【技术特征摘要】
2011.11.21 US 61/562,3021.用于检测测试样品中的抗体的方法,其包含:(a)使所述测试样品与第一检测物接触以形成包含第一检测物和所述抗体的第一复合物,其中第一检测物包含与第一可检测实体缀合的Fc结合分子;(b)使第一复合物与固定于表面的测试区域的捕获实体接触,其中所述捕获实体能够与所述抗体特异性结合;以及(c)检测来自所述测试区域中的第一可检测实体的信号的存在,其中所述信号的存在表明所述测试样品中存在所述抗体。2.抗体检测装置,其包含:上样区域;缀合区域,其中所述缀合区域包含可移动的第一检测物,所述第一检测物包括与第一可检测实体缀合的F...
【专利技术属性】
技术研发人员:C·奎斯科,J·沃克,R·K·梅拉,K·P·阿伦,D·M·布莱利,
申请(专利权)人:爱贝斯股份有限公司,
类型:发明
国别省市:美国;US
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