一种CAR‑T细胞病毒感染效率的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种CAR‑T细胞病毒感染效率的检测方法，包括如下步骤：将病毒侵染CAR‑T细胞；待细胞稳定表达，抽提CAR‑T细胞的全基因组DNA；运用荧光定量PCR技术检测整合到全基因组DNA中的病毒拷贝数；数据处理：按Poisson分布规律，计算该病毒的感染效率；其中感染效率公式：P(K)＝1‑P(0)；其中，P(0)＝e‑m；e为自然常数；m为MOI值，即感染复数。本发明专利技术可计算病毒的感染效率，计算方法简便，且精确度高，便于实际操作。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及CAR-T细胞病毒感染效率
，尤其涉及一种CAR-T细胞病毒感染效率的检测方法。
技术介绍
肿瘤的细胞治疗始于上世纪80年代。第一代细胞治疗技术属于采用非特异性的细胞治疗，主要方法包括LAK、NK、CIK等。第二代细胞治疗技术兴起于上世纪90年代，主要代表为DC-CIK，这种治疗技术属于诱导肿瘤特异性细胞治疗。第一代和第二代细胞治疗技术由于疗效有限等原因，在美欧等主要国家已几乎不再开展。第三代细胞治疗技术始于本世纪初，属于基因重组细胞治疗，主要有CAR-T、CAR-NK等。其中，最新的CAR-T技术不仅解决了T细胞的靶向性、杀伤性的问题，还解决了其体内有效增殖的难题。在CAR-T细胞的培养流程中，病毒的侵染能力对细胞的治疗效果有着举足轻重的作用，目前如何有效对CAR-T细胞病毒感染效率进行检测，成为目前亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术提出了一种CAR-T细胞病毒感染效率的检测方法，可计算病毒的感染效率，计算方法简便，且精确度高，便于实际操作。本专利技术提出的一种CAR-T细胞病毒感染效率的检测方法，包括如下步骤：S1、将病毒侵染CAR-T细胞；S2、待细胞稳定表达，抽提CAR-T细胞的全基因组DNA；S3、运用荧光定量PCR技术检测整合到全基因组DNA中的病毒拷贝数；S4、数据处理：按Poisson分布规律，计算该病毒的感染效率；其中感染效率公式：P(K)＝1-P(0)；其中，P(0)＝e-m；P(0)：未被感染细胞的百分率；P(K)：被感染细胞的百分率；e：自然常数；m为MOI值，即感染复数。优选地，m的计算公式为m＝病毒拷贝数：细胞数；其中病毒拷贝数单位为copies/μg，细胞数单位为个/μg，2.5～3.5×105个细胞含有1ugDNA，1μg DNA中病毒的拷贝数通过荧光定量PCR技术检测获知。优选地，3×105个细胞含有1ugDNA。在S2中，通过普通PCR鉴定细胞是否稳定表达。本专利技术中，通过荧光定量PCR技术检测整合到细胞基因组DNA中的病毒拷贝数，根据病毒拷贝数与细胞数的比值计算出该病毒的感染复数，由于病毒感染细胞是一种随机事件，遵循Poisson分布规律，由此可计算病毒的感染效率。计算方法简便，且精确度高，便于实际操作。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1一种CAR-T细胞病毒感染效率的检测方法，包括如下步骤：S1、将病毒侵染CAR-T细胞；S2、待细胞稳定表达，抽提CAR-T细胞的全基因组DNA；S3、运用荧光定量PCR技术检测整合到全基因组DNA中的病毒拷贝数；S4、数据处理：按Poisson分布规律，计算该病毒的感染效率；其中感染效率公式：P(K)＝1-P(0)；其中，P(0)＝e-m；P(0)：未被感染细胞的百分率；P(K)：被感染细胞的百分率；e为自然常数；m为MOI值，即感染复数。实施例2一种CAR-T细胞病毒感染效率的检测方法，包括如下步骤：S1、将病毒侵染CAR-T细胞；S2、待细胞稳定表达，抽提CAR-T细胞的全基因组DNA；S3、运用荧光定量PCR技术检测整合到全基因组DNA中的病毒拷贝数；S4、数据处理：按Poisson分布规律，计算该病毒的感染效率；其中感染效率公式：P(K)＝1-P(0)；其中，P(0)＝e-m；P(0)：未被感染细胞的百分率；P(K)：被感染细胞的百分率；e为自然常数；m为MOI值，即感染复数。m的计算公式为m＝病毒拷贝数：细胞数；其中病毒拷贝数单位为copies/μg，细胞数单位为个/μg，3.5×105个细胞含有1ugDNA，1μg DNA中病毒的拷贝数通过荧光定量PCR技术检测获知。实施例3一种CAR-T细胞病毒感染效率的检测方法，包括如下步骤：S1、将病毒侵染CAR-T细胞；S2、待细胞稳定表达，抽提CAR-T细胞的全基因组DNA；S3、运用荧光定量PCR技术检测整合到全基因组DNA中的病毒拷贝数；S4、数据处理：按Poisson分布规律，计算该病毒的感染效率；其中感染效率公式：P(K)＝1-P(0)；其中，P(0)＝e-m；P(0)：未被感染细胞的百分率；P(K)：被感染细胞的百分率；e为自然常数；m为MOI值，即感染复数。m的计算公式为m＝病毒拷贝数：细胞数；其中病毒拷贝数单位为copies/μg，细胞数单位为个/μg，2.5×105个细胞含有1ugDNA，1μg DNA中病毒的拷贝数通过荧光定量PCR技术检测获知。实施例4一种CAR-T细胞病毒感染效率的检测方法，包括如下步骤：S1、将病毒侵染CAR-T细胞；S2、待细胞稳定表达，抽提CAR-T细胞的全基因组DNA；S3、运用荧光定量PCR技术检测整合到全基因组DNA中的病毒拷贝数；S4、数据处理：按Poisson分布规律，计算该病毒的感染效率；其中感染效率公式：P(K)＝1-P(0)；其中，P(0)＝e-m；P(0)：未被感染细胞的百分率；P(K)：被感染细胞的百分率；e为自然常数；m为MOI值，即感染复数。m的计算公式为m＝病毒拷贝数：细胞数；其中病毒拷贝数单位为copies/μg，细胞数单位为个/μg，3×105个细胞含有1ugDNA，1μg DNA中病毒的拷贝数通过荧光定量PCR技术检测获知。以上所述，仅为本专利技术较佳的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术揭露的技术范围内，根据本专利技术的技术方案及其专利技术构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种CAR‑T细胞病毒感染效率的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将病毒侵染CAR‑T细胞；S2、待细胞稳定表达，抽提CAR‑T细胞的全基因组DNA；S3、运用荧光定量PCR技术检测整合到全基因组DNA中的病毒拷贝数；S4、数据处理：按Poisson分布规律，计算该病毒的感染效率；其中感染效率公式：P(K)＝1‑P(0)；其中，P(0)＝e‑m；P(0)：未被感染细胞的百分率；P(K)：被感染细胞的百分率；e为自然常数；m为MOI值，即感染复数。

【技术特征摘要】
1.一种CAR-T细胞病毒感染效率的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将病毒侵染CAR-T细胞；S2、待细胞稳定表达，抽提CAR-T细胞的全基因组DNA；S3、运用荧光定量PCR技术检测整合到全基因组DNA中的病毒拷贝数；S4、数据处理：按Poisson分布规律，计算该病毒的感染效率；其中感染效率公式：P(K)＝1-P(0)；其中，P(0)＝e-m；P(0)：未被感染细胞的百分率；P(K)：被感染细胞的百分率；e为自...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌发忠，徐华栋，许国贞，刘振云，熊伍平，王维，
申请(专利权)人：安徽未名细胞治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34