多聚体Fc蛋白制造技术

本发明专利技术涉及结合人Fc受体的多聚体融合蛋白。本发明专利技术还涉及包含所述蛋白的药物组合物，以及它们在治疗免疫性病症中的用途。融合蛋白在位置309上的半胱氨酸残基不存在的情况下包含尾部。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及结合人Fc受体的多聚体融合蛋白。本专利技术还涉及包含所述多聚体融合蛋白的治疗组合物，以及它们在治疗免疫性病症中的用途。背景免疫性病症包括具有不同病征、症状、病因学和致病机制的多种疾病。许多这类疾病的特征在于致病性抗体和/或致病性免疫复合物的积极参与。在某些疾病诸如ITP(可变地称为免疫性血小板减少症、免疫性血小板紫癜、特发性血小板减少性紫癜)中，针对致病性抗体的靶抗原(Hoemberg,Scand HJ Immunol，第74卷(5),p489-495,2011)和疾病进程是相当清楚的。通常利用多种常规药剂(作为单一疗法或组合地)来治疗此类免疫性病症。此类药剂的实例是皮质类固醇(其与许多副作用相关)、静脉注射免疫球蛋白(IVIG)和抗D。抗体，通常被称为免疫球蛋白，是包含通过链间二硫键保持在一起的两条相同的重(H)链和两条相同的轻(L)链的Y形分子。每一条链由在序列上变化的并且负责抗原结合的一个可变结构域(V)组成。每一条链还由至少一个恒定结构域(C)组成。在轻链中，存在单个恒定结构域。在重链中，存在至少3个，有时4个恒定结构域，这取决于同种型(IgG、IgA和IgD具有3个，IgM和IgE具有4个)。在人中，存在称为IgA、IgD、IgE、IgG和IgM的5个不同种类或同种型的免疫球蛋白。所有这些种类具有基本的4链Y形结构，但它们相异在于它们的重链(分别称为α、δ、ε、γ和μ)。IgA还可被进一步细分成2个亚类，称为IgA1和IgA2。存在4个亚类的IgG，称为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。抗体的Fc结构域通常包含每一条重链的至少最后两个恒定结构域，所述恒定结构域二聚化以形成Fc结构域。Fc结构域负责提供抗体效应子功能，包括决定抗体半衰期(原理上通过对FcRn的结合)、遍布身体的分布、固定补体的能力以及对细胞表面Fc受体的结合。抗体同种型之间的差异最明显地在于Fc结构域中，并且这导致在对抗原结合后不同效应子功能的触发。结构差异还导致抗体的聚合状态的差异。因此，IgG、IgE和IgD通常是单体，而IgM以五聚体和六聚体两种形式存在，IgA在血清中主要以单体形式存在并且在浆液粘液性分泌中主要以二聚体形式存在。静脉注射免疫球蛋白(IVIG)是来自成千上万的健康血液供体的混合免疫球蛋白。IVIG最初被用作IgG替代疗法来预防具有低IgG水平的患者的机会致病菌感染(综述于Baerenwaldt,Expert Rev Clin Immunol，第6卷(3),p425-434,2010中)。在具有ITP的儿童中发现IVIG的抗炎性质(Imbach,Helv Paediatri Acta，第36卷(1),p81-86,1981)后，IVIG现被许可用于治疗ITP、Guillain-Barré综合征、川崎病和慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(Nimmerjahn,Annu Rev Immunol，第26卷，p513-533,2008)。在牵涉致病性免疫复合物的疾病中，已有人提出，少部分成分免疫球蛋白级分不成比例地有效。据观测，微量(通常1-5％)的IgG以多聚体形式存在于IVIG内。大多数该多聚体级分被认为是二聚物和较少量的三聚体及更高级形式。还已提出，另外的二聚体可在输注后通过接受者的抗独特型抗体的结合形成。有一种理论认为，这些多聚体形式因它们增强的亲合力而与免疫复合物竞争对低亲和力Fcγ受体的结合(Augener,Blut,第50卷,p249-252,1985；Teeling,Blood第98卷(4),p1095-1099,2001；Machino,Y.,Clin Exp Immunol,第162卷(3),p415-424,2010；Machino,Y.等，BBRC,第418卷,p748-753,2012)。另一个理论是IVIG内的IgG的唾液酸糖形式，尤其是高水平的α2-6唾液酸形式的存在，引起Fcγ受体激活状态的变化(Samuelsson,Science,第291卷,p484-486,2001；Kaneko,Science,第313卷,p670-673,2006；Schwab,European J Immunol第42卷,p826-830,2012；Sondermann,PNAS,第110卷(24),p9868-9872,2013)。在牵涉致病性抗体的疾病中，已有人提出，向人施用的非常大剂量的IVIG(1-2g/kg)有效地越过了通过FcRn进行的正常IgG动态平衡机制。有效地供体IVIG对接受者IgG的巨大稀释导致患者致病性抗体的增强的分解代谢和较短的血清半衰期。其它提出的功效机制包括致病性抗体的抗独特型中和以及补体因子的瞬时减少(Mollnes,Mol Immunol，第34卷，p719-729,1997；Crow,Transfusion Medicine Reviews，第22卷(2),p103-116,2008；Schwab,I.和Nimmerjahn,F.Nature Reviews Immunology，第13卷，p176-189,2013)。IVIG的临床使用存在明显的不利方面。IVIG因生产方法和供体库的固有差异而在制造商之间具有可变的产品质量(Siegel,Pharmacotherapy第25卷(11)p78S-84S,2005)。以非常大的剂量，通常以1-2g/kg的量级给予IVIG。该大剂量使得必须进行长持续时间的输注(4-8小时，有时持多天)，这可令患者不悦并且可导致输注相关的不良事件。严重的不良事件可发生，IgA不足的个体中的反应是众所周知的。还可在接受IVIG的患者中观测到细胞因子释放，但这通过剂量和输注速率的细心控制得以大大地减少至最少。作为每患者使用的大量和对人供体的依赖的结果，IVIG的生产是昂贵的，并且全球供应受到严重限制。总体上IVIG的不利方面意味着有必要在能够干扰致病性抗体和致病性免疫复合物的疾病生物学的分子的临床供应、管理和功效方面进行改善。用作IVIG疗法的潜在替代的多聚体Fc融合蛋白已在文献中进行了描述。(Mekhaiel等；Nature Scientific Reports 1:124，2011年10月19日出版的)。Mekhaiel等描述了六聚hIgG1-FC-LH309/310CL-尾部(tailpiece)。本专利技术人已经产生了含有修饰蛋白质的效应子功能的突变的多聚体融合蛋白，修饰蛋白质的效应子功能包括Fc受体结合改变和/或补体结合改变。所述修饰大大改善本专利技术的多聚体融合蛋白的安全性和功效。因此，在本专利技术中，我们提供具有改进的可制造性和更大的功效及安全性的改进的多聚体融合蛋白，其解决了IVIG和现有技术替代方案的许多不利方面。可在细心控制的条件下大量产生所述蛋白，从而消除了有限供应和质量可变的问题。此外，改进的功效及安全性允许施用更小的剂量并降低了不良事件的风险。由Mekhaiel等描述的蛋白质被开发来主要用作疫苗，并且通常将其与称为“融合伴侣”诸如抗原、病原体相关分子模式(PAMP)、药物、配体、受体、细胞因子或趋化因子的不同蛋白质融合。在一个实例中，本专利技术的蛋白质不包含融合伴侣。多聚体融合蛋白已在现有技术中进行了描本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含两个或更多个多肽单体单元的多聚体融合蛋白；其中每一个多肽单体单元包含含有两个重链Fc区的抗体Fc‑结构域；其中每一个重链Fc区在位置309上包含半胱氨酸残基以及改变FcR结合和/或补体结合的至少一个另外突变，并且在其C末端与尾部融合，所述尾部使所述单体单元组装成多聚体；并且其中每一个多肽单体单元不包含抗体可变区。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.05 GB 1403914.3;2014.03.05 GB 1403915.0;201.一种包含两个或更多个多肽单体单元的多聚体融合蛋白；其中每一个多肽单体单元包含含有两个重链Fc区的抗体Fc-结构域；其中每一个重链Fc区在位置309上包含半胱氨酸残基以及改变FcR结合和/或补体结合的至少一个另外突变，并且在其C末端与尾部融合，所述尾部使所述单体单元组装成多聚体；并且其中每一个多肽单体单元不包含抗体可变区。2.权利要求1的多聚体融合蛋白，其中所述抗体Fc-结构域来源于IgG。3.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其中所述重链Fc区包含来源于IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的CH2和CH3结构域。4.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于的IgG1的CH3结构域。5.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其在位置355上包含精氨酸残基。6.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其在位置355上包含半胱氨酸残基。7.权利要求1至3的任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgG4的CH3结构域，其中位置355上的谷氨酰胺残基已被精氨酸残基(Q355R)或半胱氨酸残基(Q355C)取代。8.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgM的CH4结构域。9.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其中尾部来源于IgM或IgA。10.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区在其N末端具有铰链区。11.权利要求10的多聚体融合蛋白，其中所述铰链区包含突变的序列CPPC。12.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其包含6个或12个多肽单体单元。13.权利要求1-6和9-12的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgG1的CH2和CH3结构域，其中位置234上的亮氨酸残基和/或位置331上的脯氨酸残基已被另一种氨基酸取代。14.权利要求1-13的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgG1的CH2和CH3结构域，其中位置234上的亮氨酸残基已被苯丙氨酸残基取代并且位置331上的脯氨酸残基已被丝氨酸残基取代(L234F/P331S)。15.权利要求1-12的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来自IgG4的CH2和CH3结构域，其中选自位置234上的苯丙氨酸残基、位置296上的苯丙氨酸残基、位置327上的甘氨酸残基、位置330上的丝氨酸残基和位置331上的丝氨酸残基的一个或多个氨基酸残基已被另一种氨基酸取代。16.权利要求1-12或15的任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgG4的CH2和CH3结构域，其中位置234上的苯丙氨酸残基已被亮氨酸残基取代(F234L)。17.权利要求1-12或15的任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgG4的CH2和CH3结构域，其中位置234上的苯丙氨酸残基已被亮氨酸残基取代并且位置296上的苯丙氨酸残基已被酪氨酸残基取代(F234L/F296Y)。18.权利要求1-12或15的任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgG4的CH2和CH3结构域，其中位置327上的甘氨酸残基已被丙氨酸残基取代并且位置330上的丝氨酸残基已被丙氨酸残基取代(G327A/S330A)。19.权利要求1-12或15的任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgG4的CH2和CH3结构域，其中位置327上的甘氨酸残基已被丙氨酸残基取代并且位置331上的丝氨酸残基已被脯氨酸残基取代(G327A/S331P)。20.权利要求1-12或15的任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区包含来源于IgG4的CH2和CH3结构域，其中位置330上的丝氨酸残基已被丙氨酸残基取代并且位置331上的丝氨酸残基已被脯氨酸残基取代(S330A/S331P)。21.权利要求1-12的任一项的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区是包含来源于IgG4的CH2结构域和来源于IgG1的CH3结构域的杂交体。22.权利要求21的多聚体融合蛋白，其中每一个重链Fc区中选自位置234上的苯丙氨酸残基、位置296上的苯丙氨酸残基、位置327上的甘氨酸残基、位置330上的丝氨酸残基和位置331上的丝氨酸残基的一个或多个氨基酸残基已被另一种氨基酸取代。23.权利要求21的多聚体融合蛋白，其中位置234上的苯丙氨酸残基已被亮氨酸残基取代，并且位置296上的苯丙氨酸残基已被酪氨酸残基取代(F234L/F296Y)。24.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其包含增加抑制巨噬细胞对抗体包被的靶细胞的吞噬作用的效力的一个或多个突变。25.权利要求24的多聚体融合蛋白，其包含选自F234L、F234L和F296Y、G327A、G327A和S331P、S330A和S331P以及G327A和S330A的一个或多个突变。26.权利要求25的多聚体融合蛋白，其中所述重链Fc区包含来源于IgG4的CH2结构域和来源于IgG1或IgG4的CH3结构域。27.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其包含减少细胞因子释放的一个或多个突变。28.权利要求27的多聚体融合蛋白，其包含选自L234F、L234F和P331S、A327G以及Y296F的一个或多个突变。29.权利要求28的多聚体融合蛋白，其中所述重链Fc区包含来源于IgG1的CH2结构域和CH3结构域。30.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其包含减少血小板活化的一个或多个突变。31.权利要求30的多聚体融合蛋白，其包含选自L234F以及L234F和P331S的一个或多个突变。32.权利要求31的多聚体融合蛋白，其中所述重链Fc区包含来源于IgG1的CH2结构域和CH3结构域。33.前述权利要求任一项的多聚体融合蛋白，其包含改变其Fc-受体结合特征谱的一个或...

【专利技术属性】
技术研发人员：F·法拉赫阿拉尼，R·A·格里芬，D·P·汉弗莱斯，S·J·彼得斯，B·J·史密斯，P·E·斯蒂芬斯，
申请(专利权)人：UCB生物制药私人有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE