一种氧化酶及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种氧化酶及其应用，在染发过程中采用本发明专利技术的氧化酶，因其活性高，使得在染发过程中，所采用的氧化染料的用量大大降低，酶的用量降低，其反应条件温和，生物相容性高，不会对发质造成损伤，也不会引起过敏性皮肤炎，不会对人体健康造成危害。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术适用于日用化学品领域，具体涉及一种氧化酶及其在染发过程中的应用。
技术介绍
传统的化学法染发过程，由化学氧化剂催化前体分子发生氧化反应进行染色，最常用的化学染发剂为双氧水和对苯二胺。双氧水的氧化能力过强，对发质易带来永久损失；对苯二胺则易引起过敏性皮肤炎，有学者认为其还有致癌作用。近年来氧化酶，特别是漆酶催化的酚类聚合反应染色过程则克服了以上问题(式1)。漆酶是一类能够催化底物单电子氧化的含有铜离子的酶，由于催化的氧化反应具有条件温和，生物相容性高，与生物体内染色过程类似等特点，在印染和日用化学品行业中得到了扩展，具有良好的市场应用前景(Process Biochemistry 47(2012)1295–1307)。目前关于氧化酶染发的报道，如3Biotech(2013)3:267–275报道了来自于铜绿假单胞菌的漆酶、酪氨酸酶和醇还原酶的染色过程；Microbial Biotechnology(2010)3(3),324–335报道了云芝漆酶对不同的前体氧化得到不同颜色；专利CN 201280022797和CN 2012800622070报道了胆红素氧化酶在染发中的应用。以上报道中，存在前体用量较多，氧化酶的活性不高，酶用量较大等问题，难以广泛应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种氧化酶，用于制成染色剂应用于染发过程中，其酶的活性高，用量少。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种氧化酶，所述的氧化酶的氨基酸序列与序列2、4、6、8及10中的任一序列具有至少90％的同源性。其中，序列2、4来自Stachybotrys chartarum的氧化酶；序列6来自Stachybotrys chlorohalonata的氧化酶；序列8来自Gliomastix murorum的氧化酶；序列10来自Colletotrichum salicis的氧化酶。专利技术提供一种编码上述氧化酶的多核苷酸。具体的，该多核苷酸具有选自序列1、3、5、7、9中的任一序列。本专利技术提供一种表达载体，所述表达载体包含上述多核苷酸。本专利技术还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包含上述的表达载体。具体的，该宿主细胞为大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆(Bacillus licheniformis)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)及毕赤酵母(Pichia pastoris)中的一种。优选地，该宿主细胞为大肠杆菌。本专利技术的另一个目的是提供一种染色剂，包括上述氧化酶，所述染色剂中的氧化染料为对苯二胺、对氨基苯酚、对甲苯二胺、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚、6-氨基吲哚、4-羟基吲哚及5,6-二羟基吲哚中的一种。优选地，该氧化染料为5,6-二羟基吲哚。优选地，该染色剂用于角蛋白纤维的染色，其中，所述的角蛋白纤维为人毛发。本专利技术的另一个目的是提供一种染色方法，该方法包含用上述染色剂将角蛋白纤维进行染色处理的步骤。优选地，在温度为20～30℃、pH为6.5～7.5的条件下进行所述染色处理。由于上述技术方案的运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点：本专利技术提供了一种氧化酶及其在染发过程中的应用，在染发过程中，采用本专利技术的氧化酶，可有效降低氧化染料的使用量，该氧化酶的活性高，用量少，对发质无损伤，且不会引起过敏性皮炎，对人体健康无损伤，有利于广泛使用。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细的说明，但本专利技术并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整，未注明的实施条件为常规实验中的条件。实施例1氧化酶的制备序列表中1、3、5、7、9基因片段是由苏州金唯智生物科技有限公司合成的，分别与pET30a(Novagen)质粒的酶切产物连接，转入感受态E.coli BL21(DE3)菌株，筛选得到阳性克隆子，接种到含有抗性的液体LB培养基中，于37℃培养至OD600至0.8，加入诱导剂IPTG，继续培养16小时，离心收集沉淀，加入磷酸盐缓冲液悬浮，冰水浴中超声波破碎10分钟，离心取上清，冷冻得到氧化酶酶粉。实施例2氧化酶在染发过程中的应用采用5,6-二羟基吲哚0.2g、实施例1中所制备得到的氧化酶酶粉10μg，表面活性剂AEO-9 0.3mL溶于10mL 0.01M pH7.0的三乙醇胺-HCl缓冲溶液中，加入1g人类头发，室温下进行染色反应10min，而后将头发取出后干燥，利用分光测色仪(上海仪电WSF型)检查与染色前头发的色差值(ΔE*ab)，并用肉眼观察变黑效果，具体效果见表一。表一酶种类12345ΔE*ab2122202320效果明显变黑明显变黑明显变黑明显变黑明显变黑上述实施例只为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本专利技术的内容并据以实施，并不能以此限制本专利技术的保护范围。凡根据本专利技术精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氧化酶，其特征在于，所述的氧化酶的氨基酸序列与序列2、4、6、8及10中的任一序列具有至少90%的同源性。

【技术特征摘要】
1.一种氧化酶，其特征在于，所述的氧化酶的氨基酸序列与序列2、4、6、8及10中的任一序列具有至少90%的同源性。2.一种编码权利要求1所述的氧化酶的多核苷酸。3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其具有选自序列1、3、5、7、9中的任一序列。4.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求3所述的多核苷酸。5.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求4所述的表达载体。6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其为大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、地衣芽孢杆（Bacillus licheniformis）、黑曲霉（Aspergillus niger）、米曲霉（Aspergillus oryzae）、酿酒酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：鞠鑫，
申请(专利权)人：苏州汉酶生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32