一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法技术

本发明专利技术公开了一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，步骤：称取烟草下脚料，清水；按一定料液比加入缓冲液和提取液，混合后均匀研磨成浆液；将得到的浆液进行浆液压榨、滤膜过滤和离心机离心，加入液氮研磨充分，按一定料液比加入缓冲液，混合后均匀研磨成浆液；取浆液沉淀物，加入洗涤液充分混合、冷置、离心，进行浓缩并干燥后得到烟叶蛋白粉末，加入一定量的丙酮溶液和乙醇溶液，离心、振荡分离后加入酚/SDS溶液，低温冷冻干燥，置于－80℃保存或直接进行蛋白电泳。本发明专利技术旨在提供一种植物叶蛋白的提取工艺方法，该工艺方法的最大特点是采用多重制备工艺方法，通过前两次蛋白粗提取，再加上第三次精提取，大大提高了最终产品的纯度，使得纯度达到98％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及烟草蛋白
，具体为一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法。
技术介绍
烟草蛋白是以烟草叶为原料，经过压榨取汁、分离浓缩干燥而制备的蛋白质浓缩物，植物叶蛋白是存在于植物茎叶内一种多聚合物质，属于功能性蛋白质类，叶蛋白营养价值很高，含有几十种氨基酸，包含了人体所必需的8种氨基酸，还含有维生素，但不含胆固醇；有别于动物肌肉蛋白质附带的饱和脂肪酸和胆固醇，是人类膳食中蛋白质的重要补充，还有研究表明，食用叶蛋白能够显著提高人体血红蛋白含量，改善人体因蛋白质缺乏而引起的贫血状况。对叶蛋白的开发，从20世纪40年代，人们开始叶蛋白的制取研究，到70年代建立了提取叶蛋白的工厂，目前世界上已有10多个国家有叶蛋白生产的专门机构，中国有广阔的叶蛋白资源，开发利用叶蛋白是解决中国食品、饲料行、业中蛋白质资源紧缺的一条重要途径。但中国对叶蛋白的研究起步较晚，自20世纪80年代后期才开始开展资源、生产技术应用、效能等综合研究，并取得了一些成果。叶蛋白提取方法也在慢慢完善，从一开始的简单直接加热法，到后来酸碱加热法、盐析法、发酵法和超滤等。在提取纯度提高的同时，叶蛋白的应用也越来越广，现在已经不仅仅用于饲料行业，由于叶蛋白是一种无毒无害的天然高级营养食品，其构成蛋白质的氨基酸丰富，蛋白质结构好易消化吸收，所以在食品行业也有所应用。由于提取的核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶，可用来治疗肾脏病，提取的SOD可以消除超氧阴离子自由基，所以在医疗方面也有一定的应用。目前植物叶蛋白的提取方法主要有直接加热法、酸热法、碱热法、有机溶剂法、发酵法等，虽然方法较多，但是每种方法均有一些不足之处。直接加热法耗能比较高，成本高，在升温过程中还可能造成部分蛋白变性损失；酸热法和碱热法均会造成一定程度的环境污染，而且使最终得到的叶蛋白产品的气味颜色等方面发生变化，这两种方法仍存在消耗能量的问题；有机溶剂法在提取过程中有机溶剂回收难度大，残存问题严重；发酵法则耗时较长，工艺较复杂。为此，研制一种烟草蛋白提取方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，包括以下具体步骤：1)称取1-10g烟草下脚料，清水洗去表面杂物，打碎；2)按一定料液比加入0.5-5mL缓冲液和1.5-15mL提取液，混合后均匀研磨成浆液；3)将得到的浆液进行浆液压榨、滤膜过滤和离心机离心，去除废渣，得到滤液一和废渣一；4)称取1-10g废渣一，加入液氮研磨充分，按一定料液比加入5-50mL缓冲液，混合后均匀研磨成浆液；5)取浆液沉淀物，加入5-50mL洗涤液充分混合、冷置、离心，得滤液二和废渣二；6)取滤液一和滤液二，对滤液一和滤液二进行浓缩并干燥后得到烟叶蛋白粉末，加入一定量的丙酮溶液和乙醇溶液，离心、振荡分离后加入酚/SDS溶液，重复上述加入丙酮溶液和乙醇溶液洗沉淀；7)取得上述步骤的最后沉淀物，用密封膜封口，密封膜开设有几个小孔，低温冷冻干燥，置于－80℃保存或直接进行蛋白电泳。进一步地，步骤2)中缓冲液为三羟甲基氨基甲烷溶液，提取液为7mol/L尿素、2mol/L硫脲、0.4％CHAPS和10mmol/L DTT。进一步地，步骤3)中研磨至均匀后，浆液转移至1.5mL离心管中，以10000r/min离心10min，上清液为所需的总蛋白。进一步地，步骤4)中提取液为含质量分数10％的TCA、20mmol/L DTT、1mmol/L PMSF的丙酮溶液。进一步地，步骤5)中充分混合后，在－20℃放置1h；以13000r/min转速和4℃温度条件下离心15min，所述洗涤液为20mmol/L DTT、1mmol/L PMSF的丙酮溶液。进一步地，步骤6)中丙酮溶液为预冷的质量分数为10％的TCA丙酮溶液，振荡混合均匀后，以12000r/min、4℃离心3min，所述乙醇溶液为含有0.1mol/L乙酸铵的体积分数为80％的乙醇溶液，振荡混合后12000r/min、4℃离心3min，室温干燥10min以除去剩余的丙酮。进一步地，步骤6)中加入酚/SDS溶液，振荡混匀后，放置5min，以12000r/min、4℃离心3min；转移上层苯酚相至新试管中，加入含有0.1mol/L乙酸铵的乙醇溶液，置－20℃中10min，12000r/min、4℃离心5min，用无水乙醇洗沉淀，再用体积分数80％的丙酮洗沉淀。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，本专利技术旨在提供一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，该工艺方法的最大特点是采用多重制备工艺方法，且工艺简单，耗能低，耗时短，成本低，适合于大规模生产，该工艺方法通过两次压榨使得出汁率在90％以上，提取率可高达95％，通过前两次蛋白粗提取，再加上第三次精提取，大大提高了最终产品的纯度，使得纯度达到98％以上。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，包括以下具体步骤：1)称取1g烟草下脚料，清水洗去表面杂物，打碎；2)按一定料液比加入0.5mL缓冲液和1.5mL提取液，混合后均匀研磨成浆液；3)将得到的浆液进行浆液压榨、滤膜过滤和离心机离心，去除废渣，得到滤液一和废渣一；4)称取1g废渣一，加入液氮研磨充分，按一定料液比加入5mL缓冲液，混合后均匀研磨成浆液；5)取浆液沉淀物，加入5mL洗涤液充分混合、冷置、离心，得滤液二和废渣二；6)取滤液一和滤液二，对滤液一和滤液二进行浓缩并干燥后得到烟叶蛋白粉末，加入一定量的丙酮溶液和乙醇溶液，离心、振荡分离后加入酚/SDS溶液，重复上述加入丙酮溶液和乙醇溶液洗沉淀；7)取得上述步骤的最后沉淀物，用密封膜封口，密封膜开设有几个小孔，低温冷冻干燥，置于－80℃保存或直接进行蛋白电泳。实施例2一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，包括以下具体步骤：1)称取5g烟草下脚料，清水洗去表面杂物，打碎；2)按一定料液比加入3mL缓冲液和7mL提取液，混合后均匀研磨成浆液；3)将得到的浆液进行浆液压榨、滤膜过滤和离心机离心，去除废渣，得到滤液一和废渣一；4)称取5g废渣一，加入液氮研磨充分，按一定料液比加入30mL缓冲液，混合后均匀研磨成浆液；5)取浆液沉淀物，加入30mL洗涤液充分混合、冷置、离心，得滤液二和废渣二；6)取滤液一和滤液二，对滤液一和滤液二进行浓缩并干燥后得到烟叶蛋白粉末，加入一定量的丙酮溶液和乙醇溶液，离心、振荡分离后加入酚/SDS溶液，重复上述加入丙酮溶液和乙醇溶液洗沉淀；7)取得上述步骤的最后沉淀物，用密封膜封口，密封膜开设有几个小孔，低温冷冻干燥，置于－80℃保存或直接进行蛋白电泳。实施例3一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，包括以下具体步骤：1)称取10g烟草下脚料，清水洗去表面杂物，打碎；2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，其特征在于包括以下具体步骤：1)称取1‑10g烟草下脚料，清水洗去表面杂物，打碎；2)按一定料液比加入0.5‑5mL缓冲液和1.5‑15mL提取液，混合后均匀研磨成浆液；3)将得到的浆液进行浆液压榨、滤膜过滤和离心机离心，去除废渣，得到滤液一和废渣一；4)称取1‑10g废渣一，加入液氮研磨充分，按一定料液比加入5‑50mL缓冲液，混合后均匀研磨成浆液；5)取浆液沉淀物，加入5‑50mL洗涤液充分混合、冷置、离心，得滤液二和废渣二；6)取滤液一和滤液二，对滤液一和滤液二进行浓缩并干燥后得到烟叶蛋白粉末，加入一定量的丙酮溶液和乙醇溶液，离心、振荡分离后加入酚/SDS溶液，重复上述加入丙酮溶液和乙醇溶液洗沉淀；7)取得上述步骤的最后沉淀物，用密封膜封口，密封膜开设有几个小孔，低温冷冻干燥，置于－80℃保存或直接进行蛋白电泳。

【技术特征摘要】
1.一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，其特征在于包括以下具体步骤：1)称取1-10g烟草下脚料，清水洗去表面杂物，打碎；2)按一定料液比加入0.5-5mL缓冲液和1.5-15mL提取液，混合后均匀研磨成浆液；3)将得到的浆液进行浆液压榨、滤膜过滤和离心机离心，去除废渣，得到滤液一和废渣一；4)称取1-10g废渣一，加入液氮研磨充分，按一定料液比加入5-50mL缓冲液，混合后均匀研磨成浆液；5)取浆液沉淀物，加入5-50mL洗涤液充分混合、冷置、离心，得滤液二和废渣二；6)取滤液一和滤液二，对滤液一和滤液二进行浓缩并干燥后得到烟叶蛋白粉末，加入一定量的丙酮溶液和乙醇溶液，离心、振荡分离后加入酚/SDS溶液，重复上述加入丙酮溶液和乙醇溶液洗沉淀；7)取得上述步骤的最后沉淀物，用密封膜封口，密封膜开设有几个小孔，低温冷冻干燥，置于－80℃保存或直接进行蛋白电泳。2.根据权利要求1所述的一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，其特征在于，步骤2)中缓冲液为三羟甲基氨基甲烷溶液，提取液为7mol/L尿素、2mol/L硫脲、0.4％CHAPS和10mmol/L DTT。3.根据权利要求1所述的一种从烟草下脚料中提取烟草蛋白的方法，其特征在于，步骤3)中研磨至均匀后，浆液转移至1.5mL离心管中，以10000r/min离心10min，上清液为所需...

【专利技术属性】
技术研发人员：贺择，刘齐洲，李江，杨强，蒲鑫，
申请(专利权)人：湖北和诺生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42