治疗肝硬化的干细胞制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种治疗肝硬化的干细胞制剂，其中，所述治疗肝硬化的干细胞制剂包括：间充质干细胞、IL‑18结合蛋白、氧化苦参碱以及溶剂，其中，所述间充质干细胞的浓度为(5～10)×106个/ml；所述IL‑18结合蛋白的浓度为0.1～1mg/L；所述氧化苦参碱的浓度为10～100mg/L。本发明专利技术治疗肝硬化的干细胞制剂可以有效减轻肝脏炎症程度，逆转肝纤维化，修复肝脏组织，促进肝功能恢复，且有效抑制肝纤维化形成。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及干细胞与组织工程
，尤其涉及一种治疗肝硬化的干细胞制剂。
技术介绍
肝硬化是一种棘手的肝脏疾病。虽然肝移植是晚期肝硬化的有效治疗方法，但这些病人的预后仍很差；而且肝移植存在供体缺乏、手术损伤、免疫排斥及费用昂贵等问题。肝细胞移植被认为是器官移植的替代方法之一，不仅能临时维持等待肝移植的病人的肝功能，而且还能治疗某些肝脏代谢性疾病。但肝细胞是一种静止细胞，移植的肝细胞增殖数量少，难以达到临床治疗的效果，而且肝细胞难以培养和保存。
技术实现思路
本专利技术的主要目的在于提供一种治疗肝硬化的干细胞制剂，旨在提供间充质干细胞而修复硬化的肝组织和抑制肝纤维化。为实现上述目的，本专利技术提供一种治疗肝硬化的干细胞制剂，所述干细胞制剂包括：间充质干细胞、IL-18结合蛋白、氧化苦参碱以及溶剂，其中，所述间充质干细胞的浓度为(5～10)×106个/ml；所述IL-18结合蛋白的浓度为0.1～1mg/L；所述氧化苦参碱的浓度为10～100mg/L。优选地，所述间充质干细胞的浓度为7.5×106个/ml。优选地，所述IL-18结合蛋白的浓度为0.5mg/l。优选地，所述氧化苦参碱的浓度为50mg/l。优选地，所述间充质干细胞为骨髓间充质干细胞。优选地，所述溶剂为水。本专利技术技术方案，通过将间充质干细胞、IL-18结合蛋白、氧化苦参碱以及溶剂共混制得干细胞制剂，该干细胞制剂能够有效减轻肝脏炎症程度，逆转肝纤维化，修复肝脏组织，促进肝功能恢复，且抑制肝纤维化形成，进而能够治疗肝硬化。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图示出的内容获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1制备的人骨髓间充质干细胞的原代培养3d的形态示意图；图2为本专利技术实施例1制备的人骨髓间充质干细胞的原代培养10d的形态示意图；图3为本专利技术实施例1制备的第3代人骨髓间充质干细胞表面分子CD29-PE/CD34-FITC的表达的流式细胞仪检测统计图；图4为本专利技术实施例1制备的第3代人骨髓间充质干细胞表面分子CD44-PE/CD45-FITC的表达的流式细胞仪检测统计图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供一种治疗肝硬化的干细胞制剂，该干细胞制剂包括原料如下：间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)、IL-18结合蛋白、氧化苦参碱以及溶剂。混合后，在该干细胞制剂中，该间充质干细胞的浓度为(5～10)×106个/ml；该IL-18结合蛋白的浓度为0.1～1mg/L；该氧化苦参碱的浓度为10～100mg/L。换而言之，在1L的干细胞制剂中，该间充质干细胞有(5～10)×109个，该IL-18结合蛋白的用量为0.1～1mg，该氧化苦参碱的用量为10～100mg。本专利技术治疗肝硬化的干细胞制剂能够有效减轻肝脏炎症程度，逆转肝纤维化，修复硬化的肝脏组织，促进肝功能恢复，且抑制肝纤维化形成，进而能够治疗肝硬化；其中，MSCs通过免疫调节如分泌细胞因子(IL-4、IL-10)诱导损伤组织内巨噬细胞表型转换的方式，抑制肝纤维化，修复肝组织，且同时可以减轻多种器官的急性损伤；IL-18结合蛋白(白细胞介素-18结合蛋白)能够通过其相关分子机制影响肝脏微环境，能够促进MSCs的增殖或者分化，从而改善了疗效；氧化苦参碱参与或者阻断了病毒作用中T细胞的免疫应答反应，从而发挥其对病毒性肝纤维化(hepatic fibrosis，HF)治疗效果。需要说明的是，该间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，广泛存在于脐带、骨髓等多种组织中，可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化成肝细胞、神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等；具体地，本专利技术间充质干细胞可以来源于脐带、骨髓、脐血、全身结缔组织或器官间质。该溶剂只要满足提供间充干细胞的存活的介质即可，具体可以是培养基、缓冲液或水等等，至于溶剂的用量可根据实际需求进行调配，均为本领域技术人员的常规做法，在此不做赘述。现通过实施例对本专利技术治疗肝硬化的干细胞制剂做进一步解释，以详细说明其技术方案及带来的技术效果。实施例1一、间充质干细胞的制备材料来源：人骨髓间充质干细胞来源于1例61岁食管癌手术男性患者，由深圳市第一人民医院心胸外科提供，患者对治疗及实验均知情同意，实验方案经医院医学伦理委员会批准。人骨髓间充质干细胞的分离与培养：自食管癌手术患者切除的肋骨取得骨髓2mL，肝素抗凝后，移入含相同体积Percoll淋巴细胞分离液的离心管上层，2000r/min密度梯度离心10min，取中间单核细胞层，以PBS冲洗2次，加入含体积分数为20％的胎牛血清的DMEM培养基，调整细胞浓度为2×108L-1，接种于25cm2培养瓶中，在37℃、体积分数为5％的CO2培养箱中培养，3d后首次换液，弃去未贴壁细胞，以后每两三天换液1次，在倒置相差显微镜下逐日观察细胞形态。细胞达80％～90％融合时，2.5g/L胰酶常规消化，按1:2传代，传代细胞隔日首次换液，以后每隔3d换液1次，当细胞长到80％～90％融合时继续传代培养。人骨髓间充质干细胞的检测形态学观察：在倒置相差显微镜下观察体外培养的原代人骨髓间充质干细胞的形态学特征，如图1及图2所示。根据图1和图2可知：原代接种3d即可见较多细胞贴壁，外观呈纺锤形、长梭形和多角形等，见图1；4d细胞数量开始增多，以克隆集落方式增殖，细胞形态呈长梭形，细胞排列成漩涡状，细胞间界限不清，10～14d铺满瓶底，见图2。细胞传代后仍保持长梭形，生长周期较原代细胞缩短，六七天即再次融合。细胞表面分子流式细胞仪检测：取第3代人骨髓间充质干细胞，2.5g/L胰酶消化，PBS洗涤2次，制成1×109L-1细胞悬液。取3支洁净的普通塑料试管，分别加入荧光标记小鼠抗人单克隆抗体CD29-PE/CD34-FITC，CD44-PE/CD45-FITC和同型阴性对照小鼠抗小鼠IgG1-PE/IgG1-FITC单克隆抗体20μL，每管加入细胞悬液50μL，混匀，室温下孵育15min，PBS洗涤2次，1000r/min离心10min，弃上清，PBS缓冲液0.5mL重悬，流式细胞仪检测细胞表面分子；检测结果如图3及图4所示。根据图3和图4可知：人骨髓间质干细胞不表达造血细胞标志CD34(4.7％)，CD45(5.6％)，强表达β1-整合素CD29(99.4％)和基质受体CD44(97.2％)，表明人骨髓间质干细胞是区别于人骨髓中造血细胞的另一类细胞，见图3和图4。因此，经检测，本实施例制备的细胞具备人骨髓间充质干细胞的形态特征，且表达CD29、CD44，不表达CD34、CD45，进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗肝硬化的干细胞制剂，其特征在于，包括：间充质干细胞、IL‑18结合蛋白、氧化苦参碱以及溶剂，其中，所述间充质干细胞的浓度为(5～10)×106个/ml；所述IL‑18结合蛋白的浓度为0.1～1mg/L；所述氧化苦参碱的浓度为10～100mg/L。

【技术特征摘要】
1.一种治疗肝硬化的干细胞制剂，其特征在于，包括：间充质干细胞、IL-18结合蛋白、氧化苦参碱以及溶剂，其中，所述间充质干细胞的浓度为(5～10)×106个/ml；所述IL-18结合蛋白的浓度为0.1～1mg/L；所述氧化苦参碱的浓度为10～100mg/L。2.如权利要求1所述的治疗肝硬化的干细胞制剂，其特征在于，所述间充质干细胞的浓度为7.5×106个/ml...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾宪卓，鲁菲，
申请(专利权)人：深圳爱生再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44