一种山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒，它是以丙酮、聚乳酸羟基乙酸、山药多糖和泊洛沙姆188为原料，以复乳法制备得到的。本发明专利技术还公开了山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的制备方法和在制备免疫增强药物中的应用。与现有技术相比，本发明专利技术所得纳米粒悬液包封率较高，药物性质稳定，同时可使药物在动物机体内缓慢释放，有效地延长药效，具免疫增强作用，对防治动物疫病有重要意义。同时，本发明专利技术作为一种新型中兽药，没有副作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物领域，具体涉及一种山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒及其制备方法与应用。
技术介绍
山药是药食兼用植物之一，传统中医认为山药具有补益强壮，补脾养胃，生津益肺，补肾涩精，治疗消渴功效。现代的研究发现，山药不仅具有多种营养成分，而且具备性平，味甘，健脾止泻、补肺益肾等药用价值。山药中含有多糖、尿囊素、皂甙、糖蛋白等活性成分，而多糖作为植物和食用菌的活性成分已成为当前药学研究的热点，山药多糖是从山药块茎中分离提取的主要活性成分，主要由甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成，已成为近年来山药研究的热点。其具有增强免疫、抗肿瘤、抗衰老和抗氧化等作用。山药多糖不仅具有增强机体免疫功能的作用，可作为免疫增强剂，用于提高机体免疫力，主要表现在免疫增强或免疫刺激，诱导T淋巴细胞分化、B淋巴细胞分泌抗体等；同时山药便宜易得，对动物而言，其具有良好应用前景，然而另一方面，山药多糖属于大分子多糖，若直接用于临床，则存在着多糖在体内代谢较快，作用时间短，作用范围不集中，临床用量大以及由此带来的副作用增强等缺点。由此可知，如何合理利用山药多糖这种活性成分，提高山药多糖的生物利用率，突出其增强免疫的效果，是其在临床推广应用首要解决的问题。聚乳酸羟基乙酸共聚物又叫又叫聚乙丙交酯，是乳酸与羟基乙酸聚合而成，它有着良好的生物相容性和安全性，无毒、无刺激性，还有很好的稳定性，具有易于被吞噬细胞摄取，通过在颗粒表面吸附相应的配体可以定位到特定的组织或器官等优点，同时因其含有亲水性基团，所以在体内降解为二氧化碳和水，现已被美国食品药品管理局(FDA)批准为药用辅料。聚乳酸羟基乙酸包裹药物制成注射微球已成为制剂学热点之一，例如在药物，包括蛋白、多肽、基因等缓释领域已被广泛研究。聚乳酸羟基乙酸纳米粒缓控释系统适用于半衰期短或口服生物利用度低而又需要长期给药的药物，制成聚乳酸羟基乙酸纳米粒可保护被包裹药物不被破坏，可有效控制包裹在纳米粒内的药物在体内的降解，其优点是能在几周或几个月时间内以一定速率释放药物，维持有效血液浓度， 减少给药次数，且能够持续释放，提高治疗效果，减少用药的总剂量，所以被深入研究。目前已有多种药物采用聚乳酸羟基乙酸作为骨架材料制备生物可降解微球，实现了对药物的缓释和控释，因此已被广泛应用于人的临床医学。本专利技术首次利用复乳法制备山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒胶体悬液，对其工艺进行优化，并体外刺激小鼠淋巴细胞增殖，建立了山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的制备方法，优化了制备条件，发现山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒能显著提高山药多糖的免疫活性及免疫增强功能，提高其生物利用度。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒，以解决现有技术存在的生物利用率不高，效果不佳等问题。本专利技术还要解决的技术问题是提供上述山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的制备方法。本专利技术最后要解决的技术问题是提供上述山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的应用。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：一种制备山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的方法，它包括如下步骤：(1)取山药多糖溶于水中，经超声溶解得到内水相；将聚乳酸羟基乙酸和丙酮混合后搅拌，经超声溶解得到油相；将泊洛沙姆188溶于水中，得到外水相；(2)将步骤(1)中制备得到的内水相加入步骤(1)中制备得到的油相中，经超声得到稳定的油包水型初乳；将油包水型初乳加入步骤(1)中制备得到的外水相中，经超声得到水包油包水型复乳；水包油包水型复乳经减压蒸发除去有机溶剂和离心去除较大沉淀后，收集上清液，即得山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒。步骤(1)中，内水相中，山药多糖的浓度为2～20mg/mL，优选10mg/mL。步骤(1)中，油相中，聚乳酸羟基乙酸的浓度为10～40mg/mL，优选20mg/mL。步骤(1)中，外水相中，泊洛沙姆188的质量百分比为0.1～0.7％，优选0.7％。步骤(2)中，内水相和油项的体积比为1：3～9，优选1：9。步骤(2)中，油包水型初乳和外水相的体积比为1：4～10，优选1：10。步骤(2)中，得到稳定的油包水型初乳的超声方法为：在120W的功率下超声2s间歇3s，总时长2min。步骤(2)中，得到水包油包水型复乳的超声方法为：在150W的功率下超声2s间歇3s，总时长2min。步骤(2)中，减压蒸发的方法为：在旋转蒸发仪上以55℃和100rpm的条件减压蒸发20min左右。步骤(2)中，离心的方法为2500rpm离心8min。上述制备方法中任意一项制备得到的山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒也在本专利技术的保护范围之内。上述山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒在制备免疫增强药物中的应用也在本专利技术的保护范围之内。按此方法制备的山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒，包封率高达66.82％。得到山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒后，利用马尔文粒度分析仪对山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的粒径、多分散系数(PDI)及表面电势进行了分析，并通过透射电镜对山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的表面形态进行了研究，发现山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒呈现均一的纳米分散体系。体外将山药多糖以及山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒以一定浓度重悬，用透析袋模拟体内半透膜，探究两者的释放规律。发现山药多糖被聚乳酸羟基乙酸包裹后，明显减缓了药物的释放。说明聚乳酸羟基乙酸有缓释效果。体外探究山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒对小鼠淋巴细胞的最大安全浓度，在安全浓度下刺激淋巴细胞增殖。发现与其他空白组相比，载药纳米粒组在不同浓度下均能显著刺激淋巴细胞增值。表明了其具有较好的免疫增强功能，对提高动物机体的免疫功能，防治疾病具有重要应用价值。有益效果动物疫病主要靠疫苗来预防，但是很多疫苗存在免疫原性较弱、诱导产生的免疫反应持续时间较短，需多次接种等缺点，需要免疫增强剂辅助才能产生强大的免疫应答。现有的常用免疫增强剂如油佐剂、铝胶佐剂等，这些佐剂通常存在刺激性较强、有残留等缺点。由于中药具有绿色安全的特点，从中药中开发免疫增强剂已成为热点。山药多糖是山药中所含的主要有效成分之一，其具有增强免疫、抗肿瘤、抗衰老和抗氧化等作用。山药多糖不仅具有增强机体免疫功能的作用，可作为免疫增强剂，用于提高机体免疫力，主要表现在免疫增强或免疫刺激，诱导T淋巴细胞分化、B淋巴细胞 分泌抗体等；同时山药便宜易得，对动物而言，其具有良好应用前景，然而，山药多糖作为一种免疫增强剂直接用于兽医临床，存在着分子量较大、药物释放太快、药量过大、副作用增强、生物利用度低导致免疫增强作用相对较弱等问题，从而限制了其临床应用。利用聚乳酸羟基乙酸包被山药多糖，不仅可以减缓山药多糖在体内被排除，解决用药量大等问题，而且可以有效维持山药多糖在机体内的有效浓度，提高其生物利用度。本专利技术采用复乳法将山药多糖制备成山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒，所得纳米粒悬液包封率较高，药物性质稳定，同时可使药物在动物机体内缓慢释放，有效地延长药效，具免疫增强作用，对防治动物疫病有重要意义。本专利技术作为一种新型中兽药，没有副作用。与现有技术相比，本专利技术优点如下：1.山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的制备国内外未见报道，本专利技术提供了一种山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的制备方法及其优化的条件，填补了国内外研究的空白。2.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的方法，其特征在于，它包括如下步骤：(1)取山药多糖溶于水中，得到内水相；将聚乳酸羟基乙酸和丙酮混合后搅拌，得到油相；将泊洛沙姆188溶于水中，得到外水相；(2)将步骤(1)中制备得到的内水相加入步骤(1)中制备得到的油相中，经超声得到稳定的油包水型初乳；将油包水型初乳加入外水相中，经超声得到水包油包水型复乳；水包油包水型复乳经减压蒸发和离心后收集上清液，即得山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒。

【技术特征摘要】
1.一种制备山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒的方法，其特征在于，它包括如下步骤：(1)取山药多糖溶于水中，得到内水相；将聚乳酸羟基乙酸和丙酮混合后搅拌，得到油相；将泊洛沙姆188溶于水中，得到外水相；(2)将步骤(1)中制备得到的内水相加入步骤(1)中制备得到的油相中，经超声得到稳定的油包水型初乳；将油包水型初乳加入外水相中，经超声得到水包油包水型复乳；水包油包水型复乳经减压蒸发和离心后收集上清液，即得山药多糖聚乳酸羟基乙酸纳米粒。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，内水相中，山药多糖的浓度为2～20mg/mL。3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：王德云，罗莉，郑思思，胡元亮，刘家国，武毅，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32