本发明专利技术属于家畜分子标记技术领域，具体涉及LAP3基因作为绵羊生长性状的分子标记及其应用。本发明专利技术分子标记由LAP3基因克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2所述。在序列表SEQ ID NO：2的第260bp处有1个C260‑G260的碱基替换，该突变导致AcuI‑RFLP酶切多态性。本发明专利技术还公开了扩增LAP3基因部分CDS序列和DNA序列所用的引物以及用于多态性检测的方法，为绵羊生长性状的标记辅助选择提供了一个新的分子标记。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于绵羊分子标记制备
，具体涉及LAP3基因片段作为绵羊生长性状的分子标记及其应用。
技术介绍
家畜的遗传改良应重点关注对经济性状的遗传改良，生长性状是肉用绵羊的重要经济性状之一，是主选性状。我国绵羊饲养量由1993年的10,756.21万只到2013年增长为19,134.92万只，增长了77.89％，而绵羊肉产量由1993年的71.53万吨增长到2013年207.99万吨，增长了190.79％(http://www.fao.org/statistics/zh/)。以表型选择和后裔测定为主的传统育种方法和杂交改良在绵羊生长性状的遗传改良中起到了重要作用。绵羊生长性状是受微效多基因控制的复杂数量性状，包括绵羊的体重、体尺、胴体重、日增重和断奶重等。绵羊生长性状主要受到环境、饲养条件和遗传等因素的影响。在肉羊生产实践，通过改良遗传是提高生产效益有效途径。因此，探寻与生长性状相关的候选基因或有效QTL是提高绵羊生长性状和生产性能的根本途径。目前对绵羊生长性状候选基因方面的研究已经取得显著的进展，其中GH基因和Callipyge基因等已被确定对绵羊生长性状具有显著的影响。(1)生长激素(Growth hormone，GH)是由动物垂体合成和分泌的一种具有种属特异性的单链蛋白质类激素，由186-191个氨基酸组成，分子量21000-22000Da，它与催乳素(prolactin，PRL)和胎盘催乳素(placental lactogen，PL)属同一个基因家族，广泛存在于各种脊椎动物中(单秋枝,仲崇刚.生长激素(GH)基因研究进展.中国畜禽种业.2008,4(4):64-66)。GH具有广泛的生理作用，作用机理复杂，能够影响动物机体蛋白质、糖和脂肪的代谢，与动物的生长发育、繁殖等密切相关。GH基因具有调控肌肉、骨骼和软骨等组织生长和发育的生物学功能。GH能直接作用于全身的组织细胞，增加细胞的体积和数量，还可以通过生长素介质的间接作用，促进钙、磷等在软骨中的沉积，加速软骨基质的合成和软骨细胞的分裂，从而促进骨的生长。GH基因能促进氨基酸进入细胞和DNA合成，刺激RNA的形成，提高氨基酸合成蛋白质的速率，减少氨基酸氧化分解。GH基因主要通过抑制肌肉及脂肪组织利用葡萄糖，同时促进肝脏中的糖异生作用及对糖元进行分解，从而使血糖升高。另外，生长激素还可促进脂肪分解，使血浆游离脂肪酸升高(王鹏.湖羊GH、MSTN基因遗传多态、表达及其与肌肉生长性状关联分析.扬州大学.2010)。研究发现GH基因不仅可以促进绵羊生长、提高体重，还可以影响生长速度和体尺指标(Gootwine E,Sise JA,Penty JM,et al.The duplicated gene copy of the ovine growth hormone gene contains a PvuII polymorphism in the second intron.Animal genetics.1993,24(4):319-321)。(2)Callipyge基因是1983年在美国的一只陶赛特公羊上发现，并取名为SoildGold。由于该羊肌肉发达，尤其是腿内侧上部，故而命名为Callipyge表型。研究表明Callipyge表型是由于在绵羊一个基因上野生型的等位基因N突变为C从而导致绵羊特定的骨骼肌增加了35％(Koohmaraie M,Shackelford SD,Wheeler TL,et al.A muscle hypertrophy condition in lamb(callipyge):characterization of effects on muscle growth and meat quality traits.Journal of animal science.1995,73(12):3596-3607)。Callipyge基因的遗传机制比较特别，被称作极性超显性，是指在杂合子中只有从父本得到C等位基因，该绵羊才会出现Callipyge表型，反之若是该杂合子是从母本得到C等位基因或者形成CC纯合子，该绵羊表型正常，不会出现Callipyge表型(Charlier C.Towards the molecular understanding of the polar overdominance phenomenon associated with the callipyge phenotype in sheep.Bulletin et memoires de Academie royale de medecine de Belgique.2004,159(10-12):490-496)。Callipyge突变导致出生后骨骼肌肥大以及非肌肉性器官所占比例的减小，也会提高动物的饲料转化率(White J,Vuocolo T,Grounds M,et al.Analysis of the callipyge phenotype through skeletal muscle development；association of Dlk1with muscle precursor cells.Differentiation；research in biological diversity.2008,76(3):283–298)，研究发现Callipyge基因与绵羊的屠宰率和胴体重显著相关(Bidwell CA,Shay TL,Georges M,et al.Differential expression of the GTL2gene within the callipyge region of ovine chromosome 18.Animal genetics.2001,32(5):248-256)。LAP3亮氨酸氨基肽酶是一种外肽酶，是从肽链氨基端对亮氨酸残基进行催化水解的酶(Tsujimoto M,Goto Y,Maruyama M,et al.Biochemical and enzymatic properties of the M1family of aminopeptidases involved in the regulation of blood pressure[J].Heart failure reviews.2008,13(3):285-291)。这种酶有底物特异性，在最适pH和最适温度下可以促进和延长亮氨酸的水解。LAP3分布广泛，主要在肝脏、胰腺、肾脏和小肠中表达，主要参与组织蛋白和肽类的降解更新，可以反映肝脏和胰腺等组织的病变(Murai T.Leucine aminopeptidase(LAP)[J].Rinsho byori The Japanese journal of clinical pathology.2001,116:110-116)。绵羊LAP3基因位于6号染色体上。Allan等研究发现LAP3基因与牛体重显著相关(Allan MF,Thallman RM,Cushman RA,et al.Association of a single nucleo本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种克隆的与绵羊生长性状相关的分子标记，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示，该序列第260bp处的S是C或G，该突变导致PCR‑AcuI‑RFLP多态性。
【技术特征摘要】
1.一种克隆的与绵羊生长性状相关的分子标记，其核苷酸序列如序列表SEQ ID No.2所示，该序列第260bp处的S是C或G，该突变导致PCR-AcuI-RFLP多态性。2.一种针对权利要求1所述分子标记的PCR引物对，该引物对至少特异性扩增包含所述分子标记SNP位点的DNA片段。3.根据权利要求2所述的PCR引物对，其特征在于，该引物对的DNA序列如下所示：正向引物：GGCACTGCTTTCTATCATTG，反向引物：ATAGGTGTTCACTGAGGGTT。4.一种用于绵羊生长性状检测的分子标记方法，该方法用权利要求2或3所述的引物特异性扩增绵羊...
【专利技术属性】
技术研发人员：王维民，喇永富，李发弟，张小雪，席锐，潘香羽，
申请(专利权)人：甘肃农业大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
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