一种那西肽的提取方法技术

本发明专利技术涉及一种那西肽提取方法，其工艺步骤包括：将那西肽发酵液经喷雾干燥,复合溶媒浸提，离心，大孔树脂吸附，酸水解析，盐水沉淀，洗涤、减压干燥得到那西肽成品。本发明专利技术利用复合溶媒浸提，大孔树脂脱色纯化提取那西肽工艺，该方法可提高提取收率6.5%以上，产品纯度达到96%以上，有利于经济效益提高。本方法减少废水排放量，有利于环保处理。本方法采用溶媒腐蚀性小、毒性小，有利于设备维护，有利于职业健康。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于抗生素提取
，特别是涉及一种那西肽粗品的制备方法。
技术介绍
那西肽（Nosiheptide）是由活跃链霉菌（Streptomy⁃ces actuosus）产生的一种含硫多肽类抗生素，是次级代谢产物，属硫链丝菌素（Thiostrepton）类。因它能明显的促进畜禽生长、改善饲料的利用率，同时用量低，在机体内无残留, 对环境影响小,无交叉耐药性，而被称为环保型饲料添加剂。那西肽是一种酯溶性抗生素，主要存在菌体细胞内，仅有少量分泌到细胞外。那西肽常温下呈结晶性粉状末，颜色为淡黄色至淡褐色，可溶于氯仿、吡啶、二甲基甲酰胺，微溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯和苯，对水和石油醚表现为不溶，其熔点为310～320 ℃，溶解时伴随分解。对于那西肽粗品的制备，现有技术中公开的报道有：1、乙醇浸提法，该方法采用首先将那西肽发酵液离心分离菌丝体，然后用乙醇浸提，正丁醇反萃，正丁醇萃取液浓缩得到那西肽粗品。该工艺中，正丁醇萃取液进行浓缩过程，需较高温度，易造成那西肽高温分解，影响那西肽提取产量和质量。2、二氯甲烷浸提法，该方法采用首先将那西肽发酵液离心分离菌丝体，用二氯甲烷反复3次浸提，得到的浸提液进行减压浓缩得到那西肽粗品的工艺。该工艺中，浸提过程繁琐，二氯甲烷易腐蚀设备，高温下易分解，溶媒损耗较大。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高那西肽收率及产品质量，工艺简单，溶媒腐蚀小、损耗少，同时可降低环境污染的那西肽的提取方法。为实现上述目的所采取的技术方案为：一种那西肽的提取方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将那西肽菌丝粉用复合溶媒浸提，离心分离，所得浸提液经大孔树脂吸附，酸水解析，盐水沉淀后洗涤、减压干燥即可得到那西肽成品；所述复合溶媒组成为：二甲基甲酰胺：乙醇：水=2.5～3.5：4.5～5.5：1.5～2.5，以体积比计。所述那西肽菌丝粉是将那西肽发酵液经喷雾干燥后所得。所述复合溶媒的用量为那西肽菌丝粉质量的2～3倍，浸提时间4～6hr，浸提温度25～35℃。所述大孔树脂吸附时，控制进料温度20～25℃，进料速度2.0～6.0BV/h。所述酸水解析过程为：在大孔树脂吸附结束后，先用90～95%（w/w）乙醇顶洗至无色，再仅限使用乙酸（50～55%，w/w）进行洗脱，洗脱速度1.5～3.5BV/h，高效液相检查那西肽峰出现后，收集洗脱液，液相检测那西肽浓度小于30ug/ml时，停止洗脱，合并洗脱液。所述盐水沉淀过程为：将酸水解析所得的洗脱液，在搅拌状态下，仅限加入碳酸钠溶液（35～40%，w/w），搅拌2.0～2.5hr，静置6～8 hr。所述碳酸钠的用量为洗脱液体积的3～5倍。所述搅拌转速60～80转/min 。所述洗涤是指将那西肽沉淀液母液抽干后，得到那西肽湿品，按湿品体积，加入1～1.5倍体积丙酮，使丙酮浸透那西肽沉淀，将那西肽沉淀翻洗若干遍后，抽滤得到那西肽湿品，经减压干燥，得到那西肽成品。本专利技术的技术优势体现在：1 本专利技术提供了一种利用复合溶媒浸提，大孔树脂脱色纯化提取那西肽的工艺，该方法可提高提取收率6%以上，产品纯度达到96%以上。2本专利技术用盐水沉淀那西肽洗脱液，避免高温浓缩造成那西肽的降解，产品质量好、产量高。3本专利技术操作流程简捷，可操作性强。4 本专利技术废水量少，减轻环保处理强度。5 本专利技术采用溶媒腐蚀性小、毒性小，有利于设备维护，有利于职业健康。具体实施方法下面用实例予以说明本专利技术，应该理解的是，实例是用于说明本专利技术而不是对本专利技术的限制。本专利技术的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。下述实施例中的那西肽发酵液来源：依据以下工艺流程得到：冷冻管斜面孢子种子液发酵液。采用二级发酵模式生产那西肽，其生产菌种为活跃链霉菌，培养基中的碳源主要是淀粉和葡萄糖，氮源是豆饼粉、玉米浆、酵母膏，经240h的发酵培养，其效价一般在1500ug/ml左右。准备那西肽发酵液500L（效价1200u/ml、菌丝浓度38%，发酵十亿0.6×109u），进行喷雾干燥，进风温度140±5℃，出风温度55±2℃，得到那西肽菌丝粉207kg（水份8.2%）,均分成5份，每份41.4 kg（水份8.2%，总亿0.12×109u），备用。实施例1取那西肽菌丝粉41.4 kg（堆密度0.6t/m3,总亿0.12×109u），用138L复合溶媒（二甲基甲酰胺（V）：乙醇（V）：水（V）=2.5：4.5：1.5）浸提，浸提时间4hr，浸提温度25℃，离心分离，得到浸提液137.6L（效价865 u/ml，0.119×109u），收率99.21%。将以上浸提液，进大孔树脂LSA-700吸附脱色，进料温度20℃，进料速度2.0BV/h，至料液进完。料液进完后，先用90%（w/w）乙醇顶洗至无色，再用50%（w/w）乙酸进行洗脱，洗脱速度以1.5BV/h进行，高效液相检查那西肽峰出现后，收集洗脱液，液相检测那西肽浓度小于30ug/ml时，停止洗脱，得到洗脱液206L（效价560 u/ml，0.115×109u），收率96.64%。洗脱液在搅拌下加入35%（w/w）碳酸钠溶液，加量618L，搅拌2.0hr，搅拌转速60转/min，静置6 hr，析出那西肽沉淀，抽滤，加入0.6L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，将那西肽沉淀翻洗若干遍后，抽滤得到那西肽湿品，经减压干燥，得到那西肽成品162g，产品纯度96.61%，收率96.59%。提炼收率92.59%。实施例2取那西肽菌丝粉41.4 kg（堆密度0.6t/m3,总亿0.12×109u），用172.5L复合溶媒（二甲基甲酰胺（V）：乙醇（V）：水（V）=3：5：2）浸提，浸提时间4.5hr，浸提温度30℃，离心分离，得到浸提液170.8L（效价690 u/ml，0.119×109u），收率98.20%。将以上浸提液，进大孔树脂LSA-700吸附脱色，进料温度21℃，进料速度3.0BV/h，至料液进完。料液进完后，先用92%（w/w）乙醇顶洗至无色，再用52%（w/w）乙酸进行洗脱，洗脱速度以2.0BV/h进行，高效液相检查那西肽峰出现后，收集洗脱液，液相检测那西肽浓度小于30ug/ml时，停止洗脱，得到洗脱液256L（效价450u/ml，0.115×109u），收率97.75%。洗脱液在搅拌下加入36%（w/w）碳酸钠溶液，加量896L，搅拌2.2hr，搅拌转速65转/min，静置6.5 hr，析出那西肽沉淀，抽滤，加入0.72L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，将那西肽沉淀翻洗若干遍后，抽滤得到那西肽湿品，经减压干燥，得到那西肽成品164g，产品纯度96.56%，收率96.56%。提炼收率92.68%。实施例3取那西肽菌丝粉41.4 kg（堆密度0.6t/m3,总亿0.12×109u），用207L复合溶媒（二甲基甲酰胺（V）：乙醇（V）：水（V）=3.5：5.5：2.5）浸提，浸提时间5hr，浸提温度35℃，离心分离，得到浸提液205L（效价580 u/ml，0.119×109u），收率99.29%。将以上浸提液，进大孔树脂LSA-700吸附脱色，进料温度22℃，进料速度4.0BV/h，至料液进完。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种那西肽的提取方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将那西肽菌丝粉用复合溶媒浸提，离心分离，所得浸提液经大孔树脂吸附，酸水解析，盐水沉淀后洗涤、减压干燥即可得到那西肽成品；所述复合溶媒组成为：二甲基甲酰胺：乙醇：水=2.5～3.5：4.5～5.5：1.5～2.5，以体积比计。

【技术特征摘要】
1.一种那西肽的提取方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将那西肽菌丝粉用复合溶媒浸提，离心分离，所得浸提液经大孔树脂吸附，酸水解析，盐水沉淀后洗涤、减压干燥即可得到那西肽成品；所述复合溶媒组成为：二甲基甲酰胺：乙醇：水=2.5～3.5：4.5～5.5：1.5～2.5，以体积比计。2.按照权利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述那西肽菌丝粉是将那西肽发酵液经喷雾干燥后所得。3.按照权利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述复合溶媒的用量为那西肽菌丝粉质量的2～3倍，浸提时间4～6hr，浸提温度25～35℃。4.按照权利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述大孔树脂吸附时，控制进料温度20～25℃，进料速度2.0～6.0BV/h。5.按照权利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述酸水解析过程为：在大孔树脂吸附结束后，先用90～95%乙醇顶洗至...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴立忠，王勇平，
申请(专利权)人：宁夏泰益欣生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：宁夏;64