针对PD‑L1的人抗体制造技术

本发明专利技术提供了与T细胞共抑制剂配体程序性死亡配体1(PD‑L1)蛋白结合的抗体及使用方法。在本发明专利技术的多个实施方案中，所述抗体是与PD‑L1结合的全人抗体。在某些实施方案中，本发明专利技术提供了多特异性抗原结合分子，其包含与PD‑L1结合的第一结合特异性和与肿瘤细胞抗原、感染细胞特异性抗原或T细胞共抑制剂结合的第二结合特异性。在一些实施方案中，本发明专利技术的抗体可用于抑制或中和PD‑L1活性，从而提供治疗疾病或病症例如癌症或病毒感染的手段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及与免疫调节受体配体(immunomodulatory receptor ligand)程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1，PD-L1)特异性结合的人抗体和人抗体的抗原结合片段，以及使用这些抗体的治疗和诊断方法。相关技术声明程序性死亡配体1(PD-L1)(也称为B7-H1或CD274)是在淋巴和非淋巴组织二者(例如CD4和CD8T细胞、巨噬细胞谱系细胞、外周组织)以及在肿瘤细胞和病毒感染的细胞上广泛表达的290个氨基酸的蛋白受体配体(Dong等，1999，Nature Med.)。PD-L1与属于T细胞共抑制受体的CD28/CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞抗原)/ICOS(可诱导的共刺激物)家族的受体PD-1和B7-1结合(Chen等2013，Nature Rev.Immunol.13：227-242)，并通过抑制T细胞活化减弱免疫应答。PD-L1与PD-1或B7-1的结合导致T细胞增殖和细胞因子分泌降低，损害在疾病(例如癌症和病毒感染)中的体液和细胞免疫应答。肿瘤和慢性病毒感染利用肿瘤细胞和病毒感染的细胞上PD-L1的表达来逃避免疫应答。PD-L1在多种肿瘤上表达，并且对动物模型的研究已经表明肿瘤上的PD-L1抑制T细胞活化和肿瘤细胞的裂解，并可能导致肿瘤特异性T细胞的死亡增加。在慢性病毒感染中，在病毒感染的细胞上表达的PD-L1与病毒特异性T细胞上的PD-1结合，这些T细胞随着效应物功能和增殖能力丧失而变得“衰竭(exhausted)”(Freeman 2008，PNAS 105：10275-10276)。PD-1：PD-L1系统还在诱导性T调节(Treg)细胞发育和维持Treg功能方面起重要作用(Francisco等2010，Immunol.Rev.236：219-242)。因为PD-L1在肿瘤免疫和感染性免疫中起重要作用，所以它是免疫疗法的理想靶标。已经在癌症和慢性病毒感染的治疗中研究了用拮抗剂(包括单克隆抗体)阻断PD-L1(Ribas 2012，NEJM 366：2517-2519；Freeman 2008，PNAS 105：10275-10276；Sheridan 2012，Nature Biotechnology 30：729-730)。针对PD-L1的单克隆抗体在本领域中是已知的并且已经在例如美国专利/公开No.7943742、8383796、8217149、20090055944、20120003056、20130034559、20130045200、20130045201、20130045202和在WO2007005874、WO2011066389、WO2010077634、EP1907424和EP1899379中进行了描述。专利技术简述本专利技术提供了与PD-L1结合的抗体和其抗原结合片段。本专利技术的抗体尤其可用于靶向表达PD-L1的细胞(例如癌细胞或病毒感染的细胞)，以及用于调节PD-L1活性。在某些实施方案中，本专利技术的抗体可用于抑制或中和PD-L1活性和用于刺激T细胞活化，例如，在T细胞介导的杀伤是有益的或期望的情况下。本专利技术的抗PD-L1抗体或其抗原结合部分可作为多特异性抗原结合分子的一部分包括在内，例如，以调节免疫应答和/或使抗体靶向特定的细胞类型，例如肿瘤细胞或病毒感染的细胞。所述抗体可用于治疗疾病或病症，例如癌症和病毒感染。本专利技术的抗体可以是全长的(例如，IgG1或IgG4抗体)或可以仅包含抗原结合部分(例如，Fab、F(ab’)2或scFv片段)以及可被修饰以影响功能，例如，以消除剩余的效应物功能(Reddy等，2000，J.Immunol.164：1925-1933)。在某些实施方案中，抗体可以是双特异性的。在第一方面中，本专利技术提供了与PD-L1特异性结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合片段。本专利技术的示例性抗PD-L1抗体在本文的表1和2中列出。表1列出了示例性抗PD-L1抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识符。表2列出了示例性抗PD-L1抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列标识符。本专利技术提供了抗体或其抗原结合片段，其包含HCVR，所述HCVR包含选自表1中所列任意HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，或者与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似序列。本专利技术还提供了抗体或其抗原结合片段，其包含LCVR，所述LCVR包含选自表1中所列任意LCVR氨基酸序列的氨基酸序列，或者与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似序列。本专利技术还提供了抗体或其抗原结合片段，其包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)，所述HCVR和LCVR氨基酸序列对包含与表1中所列的任意LCVR氨基酸片列配对的表1中所列的任意HCVR氨基酸序列。根据某些实施方案，本专利技术提供了抗体或其抗原结合片段，其包含在表1中所列任意示例性抗PD-L1抗体中含有的HCVR/LCVR氨基酸序列对。在某些实施方案中，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/170、186/194、202/210、218/226、234/242、250/258、266/274、282/274、290/274、298/274、306/274、314/274、322/274、330/274和338/274。在某些实施方案中，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自以下之一：SEQ ID NO：82/90(例如，H2M8314N)、162/170(例如，H2M8718N)、306/274(例如，H1H9364P2)和314/274(例如，H1H9373P2)。在某些实施方案中，HCVR/LCVR氨基酸序列对选自以下之一：SEQ ID NO：98/106(例如，H2M8316N)、146/154(例如，H2M8323N)、290/274(例如，H1H9351P2)和330/274(例如，H1H9387P2)。本专利技术还提供了抗体或其抗原结合片段，其包含重链CDR1(HCDR1)，所述重链CDR1包含选自表1中所列的任意HCDR1氨基酸序列的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似序列。本专利技术还提供了抗体或其抗原结合片段，其包含重链CDR2(HCDR2)，所述重链CDR2包含选自表1中所列的任意HCDR2氨基酸序列的氨基酸序列，或具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其基本上相似序列。本专利技术还提供了抗体或其抗原结合片段，其包含重链CDR3(HCDR3)，所述重链CDR3包含选自表1本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的抗体或其抗原结合片段，其与参照抗体竞争结合人程序性死亡配体1(PD‑L1)蛋白，所述参照抗体包含重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)和轻链可变区(LCVR)的CDR，其中所述HCVR具有选自表1中所列HCVR序列的氨基酸序列；其中所述LCVR具有选自表1中所列LCVR序列的氨基酸序列，并且其中所述抗体具有一种或更多种以下特性：(a)如在37℃下在表面等离子共振测定中所测量的，以小于约310pM的结合解离平衡常数(KD)结合单体PD‑L1；(b)在25℃下在表面等离子共振测定中，以小于约180pM的KD结合单体人PD‑L1；(c)如在37℃下在表面等离子共振测定中所测量的，以小于约15pM的KD结合二聚人PD‑L1；和(d)在25℃下在表面等离子共振测定中，以小于约8pM的KD结合二聚人PD‑L1。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.23 US 61/930,582;2014.12.09 US 62/089,5491.分离的抗体或其抗原结合片段，其与参照抗体竞争结合人程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白，所述参照抗体包含重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)和轻链可变区(LCVR)的CDR，其中所述HCVR具有选自表1中所列HCVR序列的氨基酸序列；其中所述LCVR具有选自表1中所列LCVR序列的氨基酸序列，并且其中所述抗体具有一种或更多种以下特性：(a)如在37℃下在表面等离子共振测定中所测量的，以小于约310pM的结合解离平衡常数(KD)结合单体PD-L1；(b)在25℃下在表面等离子共振测定中，以小于约180pM的KD结合单体人PD-L1；(c)如在37℃下在表面等离子共振测定中所测量的，以小于约15pM的KD结合二聚人PD-L1；和(d)在25℃下在表面等离子共振测定中，以小于约8pM的KD结合二聚人PD-L1。2.权利要求1所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述参照抗体或其抗原结合片段包含如表1中所示的HCVR/LCVR氨基酸序列对。3.权利要求2所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述参照抗体包含选自以下的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：82/90、98/106、146/154、162/170、290/274、306/274、314/274和330/274。4.与人PD-L1特异性结合的分离的人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含HCVR，所述HCVR具有选自表1中所列HCVR序列的氨基酸序列。5.与人PD-L1特异性结合的分离的人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含LCVR，所述LCVR具有选自表1中所列LCVR序列的氨基酸序列。6.与人PD-L1特异性结合的分离的人单克隆抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含(a)HCVR，其具有选自表1中所列HCVR序列的氨基酸序列；和(b)LCVR，其具有选自表1中所列LCVR序列的氨基酸序列。7.权利要求6所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含在表1中所列任一HCVR序列中含有的三个重链CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)；以及在表1中所列任一LCVR序列中含有的三个轻链CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)。8.权利要求7所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：(a)具有选自以下氨基酸序列的HCDR1结构域：SEQ ID NO：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、188、204、220、236、252、268、284、292、300、308、316、324、332和340；(b)具有选自以下氨基酸序列的HCDR2结构域：SEQ ID NO：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、190、206、222、238、254、270、286、294、302、310、318、326、334和342；(c)具有选自以下氨基酸序列的HCDR3结构域：SEQ ID NO：8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、192、208、224、240、256、272、288、296、304、312、320、328、336和344；(d)具有选自以下氨基酸序列的LCDR1结构域：SEQ ID NO：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、196、212、228、244、260和276；(e)具有选自以下氨基酸序列的LCDR2结构域：SEQ ID NO：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、198、214、230、246、262和278；以及(f)具有选自以下氨基酸序列的LCDR3结构域：SEQ ID NO：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、200、216、232、248、264和280。9.权利要求8所述的分离的抗体或抗原结合片段，其包含选自以下的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：82/90、98/106、146/154、162/170、290/274、306/274、314/274和330/274。10.阻断PD-L1与PD-1或B7-1之一结合的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR的CDR和LCVR的CDR，其中所述HCVR具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、34、50、82、98、146、162、178、186、234、250、266、290、306、314和330；其中所述LCVR具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、42、58、90、106、154、170、194、242、258和274。11.与PD-L1结合的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增强PD-L1与PD-1或B7-1之一的结合。12.权利要求11所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含HCVR的CDR和LCVR的CDR，其中所述HCVR具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：18、66、114、130、202、218、282、298、322和338；其中所述LCVR具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO：26、74、122、138、210、226和274。13.权利要求11或12所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含选自以下的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：18/26、66/74、114/122、130/138、202/210、218/226、282/274、298/274、322/274和338...

【专利技术属性】
技术研发人员：尼古拉斯·J·帕帕佐普洛斯，安德鲁·J·墨菲，加文·瑟斯顿，埃拉·约费，埃琳娜·布罗娃，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US