具有脂肪酶活性的多肽和编码它们的多核苷酸制造技术

提供了具有脂肪酶活性的分离多肽以及编码这些多肽的多核苷酸。还提供了包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、和宿主细胞，以及使用这些多肽的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】对序列表的引用本申请包括计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。专利技术背景专利
本专利技术涉及具有脂肪酶活性的多肽、编码这些多肽的多核苷酸、产生这些多肽的方法、以及使用这些多肽的方法。相关技术说明脂肪酶是重要的生物催化剂，其已显示可用于各种应用并且大量的不同脂肪酶已经被鉴定并且许多已被商品化。然而，适合于在适应于当前使用的条件的不同组合物中使用的新脂肪酶是令人希望的。脂肪酶已经被用于组合物中，从而用于通过水解甘油三酯以产生脂肪酸来去除脂质污渍。当前清洁和/或织物护理组合物包括许多活性成分，这些成分干扰脂肪酶去除脂质污渍的能力。因此，需要可以在用于清洁的组合物的严苛环境中起作用的脂肪酶。本申请的目的是提供具有有利特征的脂肪酶，如当应用在清洁剂组合物中时具有改进的性能的脂肪酶。已知来自古巴专化型尖孢镰刀菌(UNIPROT:N4UBQ9)的脂肪酶是与本申请SEQ ID NO:2的成熟多肽59.6％一致的。已知来自异孢镰孢(生物化学杂志1994 116:536-540和UNIPROT:Q02351)的脂肪酶是与本申请SEQ ID NO:7的成熟多肽78％一致的。专利技术概述本专利技术涉及具有脂肪酶活性的分离的多肽，这些分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％序列一致性的多肽；(b)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在低严格条件下、中严格条件下、中-高严格条件下、高严格条件下或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3或(i)的全长互补体杂交；(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1或与SEQ ID NO:3具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(d)多肽，该多肽是在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2的变体；以及(e)多肽，该多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一项的片段。本专利技术还涉及编码这些多肽的分离的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体、以及宿主细胞；以及生产该多肽的方法和该多肽的用途。本专利技术还涉及包括该多肽的组合物和使用该多肽进行清洁的方法。定义等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种可替代形式中的任一种。等位基因变异由突变天然产生，并且可以导致群体内的多态性。基因突变可以是沉默的(在所编码的多肽中没有改变)或可编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。cDNA：术语“cDNA”意指可以通过从得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mRNA分子进行反转录而制备的DNA分子。cDNA缺乏可以存在于对应基因组DNA中的内含子序列。早先的初始RNA转录本是mRNA的前体，其在呈现为成熟的剪接的mRNA之前要经一系列的步骤进行加工，包括剪接。编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界一般由开放阅读框架决定，该开放阅读框架从起始密码子(如ATG、GTG或TTG)开始并且以终止密码子(如TAA、TAG或TGA)结束。编码序列可以是基因组DNA、cDNA、合成DNA或其组合。控制序列：术语“控制序列”意指对于表达编码本专利技术的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。各个控制序列可以相对于编码多肽的多核苷酸是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导子、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列、以及转录终止子。至少，控制序列包括启动子以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将这些控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制酶切位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于，转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。表达载体：术语“表达载体”意指线性或环状DNA分子，该分子包含编码多肽的多核苷酸并且该多核苷酸可操作地与提供用于其表达的控制序列相连接。片段：术语“片段”意指在该成熟多肽的氨基(N-)和/或羧基(C-)末端缺失一个或多个(例如，若干个)氨基酸的多肽；其中该片段具有脂肪酶活性。在一方面，该片段包含SEQ ID NO:2的氨基酸1至327的数目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％。在一方面，该片段包含SEQ ID NO:7的氨基酸1至316的数目的至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、或至少95％。宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本专利技术的多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间发生的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。分离的：术语“分离的”意指处于自然界中不存在的形式或环境中的物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、多肽、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其本质上相关的一种或多种(例如，若干)或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于天然发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关联的其他组分增加该物质的量而修饰的任何物质(例如，编码该物质的基因的多个拷贝；比与编码该物质的基因天然相关联的启动子更强的启动子的使用)。分离的物质可以存在于发酵液样品中。脂肪酶：术语“脂肪酶(lipase)”、“脂肪酶(lipase enzyme)”、“脂解酶”、“脂质酯酶”、“脂解多肽”以及“脂解蛋白”是指如酶命名法所定义的EC 3.1.1类中的酶。它可以具有脂肪酶活性(三酰基甘油脂肪酶，EC 3.1.1.3)、角质酶活性(EC 3.1.1.74)、固醇酯酶活性(EC 3.1.1.13)和/或蜡酯水解酶活性(EC 3.1.1.50)。出于本专利技术的目的，根据实例中所述的程序确定脂肪酶活性。在一方面，本专利技术的变体具有SEQ ID NO:2的多肽的至少20％，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％的脂肪酶活性。在一方面，本专利技术的变体具有SEQ ID NO:7的多肽的至少20％，例如至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％的脂肪酶活性。低温：“低温”是5℃-35℃，如5℃-30℃、5℃-25℃、5℃-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有脂肪酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性；(b)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在低严格条件下、中严格条件下、中‑高严格条件下、高严格条件下或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3或(i)的全长互补体杂交；(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(d)多肽，该多肽是在一个或多个(例如若干个)位置处包括取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2的变体；以及(e)多肽，该多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一个的片段。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.03.12 CN PCT/CN2014/073319;2014.03.12 CN PCT/1.一种具有脂肪酶活性的分离的多肽，该分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：(a)多肽，该多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列一致性；(b)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在低严格条件下、中严格条件下、中-高严格条件下、高严格条件下或非常高严格条件下与(i)SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3或(i)的全长互补体杂交；(c)由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3具有至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％序列一致性；(d)多肽，该多肽是在一个或多个(例如若干个)位置处包括取代、缺失、和/或插入的SEQ ID NO:2的变体；以及(e)多肽，该多肽是(a)、(b)、(c)或(d)的多肽中任一个的片段。2.如权利要求1所述的多肽，该多肽是没有变化的或包括在SEQ ID NO:2的一个或多个(例如，若干个)位置处的取代。3.如权利要求1-2中任一项所述的多肽，其中取代的数目是1-50、1-40、1-30、1-20、1-10、1-5，如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明，孙天齐，蒋先芝，L鲍恩斯加德，CH汉森，K博尔奇，韩步聪，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK