多价肺炎球菌‑B型流感嗜血杆菌联合疫苗制造技术

本发明专利技术提供了一种多价肺炎球菌‑B型流感嗜血杆菌联合疫苗，其中每剂量含肺炎球菌荚膜糖50～500μg/ml，B型流感嗜血杆菌荚膜糖10～60μg/ml；肺炎球菌的血清型为以下血清型中的一种或多种：1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F或23F。与现有技术相比，本发明专利技术提供的联合疫苗安全可靠，稳定性好，其应用前景十分广阔。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疫苗，具体说，是涉及一种联合疫苗，尤其是一种多价肺炎球菌-B型流感嗜血杆菌联合疫苗。
技术介绍
一、细菌性肺炎细菌性肺炎(BP)是最常见的肺炎，也是最常见的感染性疾病之一。引起BP的病原菌种类较多，常见的有肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯杆菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌等，对儿童及老年人的健康威胁极大。这类疾病的诊断主要依赖于病史及影像学检查，病原分离培养有助于知道选择抗生素但不够及时。总体上来说，BP患者通常出现咳嗽、咳痰、发热、寒战、胸痛等症状。肺炎大部分在影像学检查(X线片、CT等)都能发现如斑片状浸润的特征性改变，绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌及马洪球菌(常表现为单侧肺叶受累)常可引起结核样的空洞样改变。值得一提的是，流感嗜血杆菌感染时透视检查常发现类似PCP的表现(双肺弥漫性浸润)，需要通过其他检查加以鉴别。目前尚无特异性的血清学指标来诊断相关性BP，更多的仍是依赖于临床病史、查体、影像及纤维支气管灌洗活检等方法。其中纤维支气管灌洗可以直接获取深部痰液进行细菌培养及药敏试验，从而指导临床用药，但由于培养时间过长(患者常已开始经验治疗)，其应用并不广泛。其他如分子生物学检测技术检测感染病原灵敏度较高，而且这类检验花费较高，在经济落后地区难以推广。故在患者被感染前进行预防，不失为一种好的应对措施。二、现有技术的局限性疫苗是人类目前可以彻底消灭某一疾病的唯一武器，接种疫苗被认为是最有效、最经济的疾病预防手段。疫苗是指用各类病原微生物制作的用于预防接种的生物制品。其中用细菌或螺旋体制作的疫苗亦称为菌苗。疫苗分为活疫苗和死疫苗两种。常用的活疫苗有卡介苗，脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、鼠疫菌苗等。常用的死疫苗有百日咳菌苗、伤寒菌苗、流脑菌苗、霍乱菌苗等。接种疫苗是预防和控制传染病最经济、有效的公共卫生干预措施，对于家庭来说也是减少成员疾病发生、减少医疗费用的有效手段。据估计，免疫接种每年能避免200万至300万例因白喉、破伤风、百日咳和麻疹导致的死亡。随着疫苗的种类不断增加，为减少接种次数以及减轻痛苦，人类又开发出了联合疫苗。联合疫苗是指由两种或两种以上独立的抗原通过物理方法混合后制成的单一疫苗制剂，包括多联疫苗和多价疫苗两种，这是通过1次接种预防多种传染病或同种但不同血清型传染病的免疫策略，其中多联疫苗可预防不同的疾病，而多价疫苗可预防不同亚型或血清型的同种疾病。联合疫苗的制备并不是各种不同抗原成分的简单混合，联合疫苗中各种成分之间所发生的化学或物理相互作用会导致各类抗原免疫原性发生变化，因此在制备过程中需要解决以下问题：(1)是否会影响各种抗原的免疫原应答效果；(2)不同抗原间是否存在不相容性或相互干扰；(3)不同抗原成分之间是否会发生拮抗效应；(4)疫苗其他成分(如佐剂等)与各种抗原的混合比例是否恰当。将多种抗原联合于同一剂疫苗中，需要在临床试验中证实各种组成成分疫苗的安全性和免疫原性不会明显降低，而且在一些情况下，必须维持其效力。旁观者干扰效应是指多种多糖结合疫苗同时免疫，会影响未结合的抗原或结合其他载体蛋白的结合疫苗的免疫作用。可能的机理包括对淋巴结中有限资源(例如抗原的获得途径、趋化因子、活化信号、滤泡树突细胞和滤泡T辅助细胞等)的竞争，Th1/Th2/Th0平衡的改变和/或T细胞调控机制的诱导。不同的疫苗所受到旁观者干扰效应的影响不一样，乙肝病毒和Hib的免疫反应对此作用最敏感。最可能的假设就是对T细胞平衡的要求更严格。英国自1992年引入Hib结合疫苗以来，几乎消灭了Hib感染所引起的疾病。但从1999年起，Hib结合疫苗在1岁以上儿童中免疫失败的案例逐年增多。在2000年至2002年间，英国以DTaP-Hib代替DTwPHib，同时增加MenC-CRM197，这种干扰效应越来越显著。但在免疫程序中增加IPV，能够增强Hib和HBV的免疫原性。临床研究结果显示，DTaPIPV-HBV/Hib-TT免疫接种后，Hib和HBV的血清阳转率比DTaP-IPV/Hib-TT+HBV低。DTaP-HBV-IPV/Hib-TT与PCV7-CRM197同时接种，比DTaP-HBV-IPV/Hib-TT单独接种的HBV和Hib-TT的血清阳转率和GMC均略有降低，这是因为受到了同时免疫的CRM197结合物的影响。对13价肺炎球菌多糖结合疫苗的临床研究结果显示，与DTaP-IPV/Hib(2、3和4个月)+MenC(2和4个月)一起免疫，PCV13-CRM197组的Hib血清阳转率比PCV7-CRM197组低。对10价肺炎球菌多糖结合疫苗(PHiD-CV)的临床研究结果显示，DTaP-HBV-IPV/Hib-TT+PCV7-CRM197接种的婴儿中，HBV的血清阳转率和GMC普遍高于DTaP-HBV-IPV/Hib-TT+PHiD-CV。传统疫苗多数采用油乳制剂，一般需要加入佐剂以发挥其免疫效果。但是这些疫苗在体内活性浓度维持的时间比较短，不能够实现可控缓释的目的，一般需要重复注射。现代疫苗是一种利用现代分子生物学技术，使用抗原通过诱发机体产生特异性免疫反应以预防和治疗疾病或达到某种特定的医学目的生物制剂。现代疫苗比传统疫苗更安全，但是其缺少免疫原性。因此，急需发展有效和安全的免疫佐剂及疫苗黏膜递送系统，并将其应用于新一代疫苗中。利用灭活或减毒病原体、细胞组分(如荚膜多糖)或非活性细菌毒素组成的传统疫苗通常可以诱导机体产生中和抗体来预防感染，免疫佐剂在此过程中发挥着重要的作用。佐剂是指能增强机体抗原免疫应答或改变免疫应答类型的物质。它主要通过免疫调节(细胞因子网络的修饰)、抗原递呈(抗原构象的维持)、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)诱导、抗原靶向和储存等方式诱发机体产生长期、高效的免疫反应，提高机体保护能力，同时又减少免疫物质的用量，降低疫苗生产成本。传统疫苗多为病原体或其裂解物，免疫原性强。但随着现代生物技术的发展，基因工程亚单位疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗等新型疫苗抗原的纯度越来越高，免疫原性却通常较弱，需要使用佐剂来提高对抗原的保护作用。然而目前获准用于人体试验的疫苗佐剂并不多，经典的铝盐佐剂就是其中之一。铝盐佐剂在提高抗体水平和安全方面已获得长期的实践证实，但其与许多重组或合成的多肽疫苗抗原共同免疫时未能激发有效的免疫应答，使之很难满足新型疫苗发展的需要。因此，对适用于临床应用的新佐剂的研究与开发势在必行。现有的佐剂主要有两种类型，即疫苗递送系统(免疫剌激复合物、脂质体、可生物降解的聚酯类微球/纳米粒)和免疫剌激佐剂(脂多糖、单磷酰质体、胞壁酰肽)。目前，抗原载体递送系统中研究最多、最成功的是可生物降解的聚酯类纳米粒。缓释微球包裹技术开始于20世纪50年代，首先应用于药物释放系统的研究。直到1979年，Morris等才首次将这项技术应用在免疫学研究，在制备微球疫苗免疫小鼠时发现，该系统可以持续释放抗原，刺激抗体产生，而不会诱发免疫耐受，微球佐剂也才开始引起人们极大的关注。由于制备的纳米粒和病原体大小相当，能穿过组织间隙，可通过机体最小的毛细血管，且纳米粒具有生物相容性、可生物降解性、低毒性、靶向性、药物定位传递以及能使药物或疫苗抗原长效释放和表达等特点，本文档来自技高网...

【技术保护点】
多价肺炎球菌‑B型流感嗜血杆菌联合疫苗，其特征在于：含有肺炎球菌荚膜糖、B型流感嗜血杆菌荚膜糖和载体蛋白，载体蛋白用于与荚膜糖共价结合。

【技术特征摘要】
1.多价肺炎球菌-B型流感嗜血杆菌联合疫苗，其特征在于：含有肺炎球菌荚膜糖、B型流感嗜血杆菌荚膜糖和载体蛋白，载体蛋白用于与荚膜糖共价结合。2.权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于：肺炎球菌荚膜糖、B型流感嗜血杆菌荚膜糖和载体蛋白的质量比为(5～25)：(1～5)：1。3.权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于：肺炎球菌的血清型为以下血清型中的一种或多种：1、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、12F、14、15B、18C、19A、19F、22F或23F。4.权利要求1所述的联合疫苗，其特征在于：所述疫苗中与荚膜糖共价结合的载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、白喉毒素突变体交叉反应物质197、肺炎球菌表面蛋白A、B群脑膜炎球菌外膜蛋白、流感嗜血杆菌D蛋白、绿脓杆菌外毒素A、革兰氏阴性细菌外膜蛋白、大肠杆菌热敏感肠毒素、肺炎球菌溶血素、百日咳毒素、绿脓杆菌菌毛、淋球菌P-3-2菌毛或乙型肝炎病毒表面抗原。5.权利要求4所述的联合疫苗，其特征在于：疫苗的载体为肺炎球菌表面蛋白A。6.一种制备权利要求1～5任一所述的联合疫苗的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴克，艾智武，刘昊智，袁军，
申请(专利权)人：武汉博沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42