本发明专利技术公开了帕莫酸在制备BLyS拮抗剂的用途。实验表明：帕莫酸能够抑制BLyS与TACI‑Fc的结合。抑制作用与帕莫酸浓度的浓度呈正相关。并证明帕莫酸的抑制作用是特异和有效的。实验表明：帕莫酸能够抑制BLyS与BCMA‑Fc的结合。抑制作用与帕莫酸浓度的浓度呈正相关。并证明帕莫酸的抑制作用是特异和有效的。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及帕莫酸在制备BLyS拮抗剂的用途。
技术介绍
B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)，又称为B细胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)，是TNF家族中的一员。由单核细胞和巨噬细胞持续合成、分泌。BLyS能够结合B细胞表面的三种受体，B细胞成熟抗原(B cell mature antigen,BCMA)，跨膜激活物和CAML结合物(Transmembrane activator and CAML-interactor,TACI)以及BAFF受体3(BR3)。受体结合BAFF后，减少成熟B细胞的凋亡。如果敲除BAFF，小鼠体内的成熟B细胞完全缺失。由于BLyS在B淋巴细胞活化、增殖中发挥重要作用，而B淋巴细胞产生的抗体所介导的体液免疫在众多已发现的自身免疫性疾病当中处于中心地位。目前认为BLyS在体内的过量表达与某些自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)等病程的发生、发展密切相关。因此，以阻断BLyS生物学功能为策略，探讨BLyS抑制拮抗剂治疗系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎等自身免疫性疾病和B细胞肿瘤疾病的研究正在国外如火如荼的进行中。目前，针对BLyS的抑制剂的研究主要集中在研制具有中和BLyS作用的BLyS诱饵受体(decoy receptor)、抗BLyS抗体和拮抗肽[1-3]。2011年3月美国FDA批准由人类基因科学公司(Human Genome Sciences)和葛兰士-史克(GlaxoSmithKline)公司联合研发的抗BLyS抗体BENLYSTA(Belimumab)治疗系统性红斑狼疮。这是50年来，FDA首次批准治疗该类疾病的药物。但是蛋白抑制剂作为治疗药物具有一定的局限性，例如来源较少和分离纯化难度大以及药物稳定性较差，另外还存在口服的生物利用度较低，主要是因为体内各种酶对多肽类药物的降解性高，从而会导致这一类药物的作用半衰期大大缩短。因此，开发小分子化合物作为BLyS抑制剂的研究具有重要的现实意义。目前，尚未有帕莫酸在制备BLyS拮抗剂的用途的报道。1.Jian Sun*(孙剑),Zhou Lin,Jiannan Feng,Yan Li,Beifen Shen.(2008)BAFF-targeting therapy,a promising strategy for treating autoimmune diseases.Eur J Pharmacol 597:1–5.2.Yacong Zhao,Xiafei Hao,Jiannan Feng,Beifen Shen,Jing Wei*(魏静),Jian Sun*(孙剑)(2015),The comparison of BLyS-binding peptides from phage display library andcomputer-aided design on BLyS–TACI interaction.Int Immunopharmacol,24:219–223.3.Xiafei Hao,Yanfeng Zhu,Chang Zheng,Xuegang Fu,Jiannan Feng,Beifen Shen,Jing Wei*(魏静),Jian Sun*(孙剑).A comparison of biological activity of B lymphocyte stimulator(BLyS)antagonist peptibodies and the elucidation of possible BLyS binding sites.Protein&Peptide Letters,2016,23,17-234.Xuegang Fu,Liyan Xuan,Yuzhe Wang,Jing Wei*(魏静),Jian Sun*(孙剑).Molecular mechanism of the affinity interactions between BAFF and its peptides by molecular simulations.Protein&Peptide Letters,2015,22,992-999.
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供帕莫酸在制备BLyS拮抗剂药物的用途。本专利技术的技术方案概述如下：帕莫酸在制备BLyS拮抗剂的用途。本专利技术的优点：1.对于BLyS结合TACI具有显著抑制作用竞争ELISA实验结果表明：帕莫酸浓度在1mg/mL时能够抑制2.71±2.51％BLyS与TACI-Fc的结合；在3mg/mL时能够抑制12.36±6.38％BLyS与TACI-Fc的结合；在5mg/mL时能够抑制79.68±2.68％BLyS与TACI-Fc的结合。抑制作用与帕莫酸浓度的浓度呈正相关。非结合BAFF的小分子化合物(苯甲酸)，即阴性对照，对BLyS与TACI的相互作用没有明显抑制作用、且没有剂量依赖关系。证明帕莫酸的抑制作用是特异和有效的。2.对于BLyS结合BCMA具有显著抑制作用竞争ELISA实验结果表明：帕莫酸浓度在1mg/mL时能够抑制5.59±2.01％BLyS与BCMA-Fc的结合；在3mg/mL时能够抑制8.91±4.36％BLyS与BCMA-Fc的结合；在5mg/mL时能够抑制83.72±0.89％BLyS与BCMA-Fc的结合。抑制作用与帕莫酸浓度的浓度呈正相关。阴性对照化合物苯甲酸对BLyS与BCMA的相互作用没有明显抑制作用、且没有剂量依赖关系。证明帕莫酸的抑制作用是特异和有效的。附图说明图1为BLyS结合受体的关键残基，其中+表示关键残基。图2为BLyS结合口袋的分子表面和关键残基，D1表示保守性结合区域，D2表示特异性结合区域。图3为虚拟筛选流程图。图4为帕莫酸结构式。图5为帕莫酸与BLyS的相互作用的模式。图6为帕莫酸抑制TACI对BLyS的结合作用。**代表p<0.01。图7为帕莫酸抑制BCMA对BLyS的结合作用。**代表p<0.01。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。众多研究已经详细阐述BLyS与受体相互作用的可能模式及关键氨基酸。我们在前期工作中通过分子动力学模拟，基于BLyS和其 受体BCMA的晶体结构，通过计算机模拟BLyS与其三个天然受体的相互作用模式，探究其参与保守性结合作用和亲和力选择性的关键残基。在此基础上，利用“锁钥原理”，针对关键结合区域进行商业化化学小分子数据库进行分子虚拟筛选，预测得到一系列具有潜在抑制作用的小分子化合物，获得其实体并进行体外活性测定发现，二元酸类化合物帕莫酸具有一定的抑制BLyS结合TACI和BCMA的作用。为开发有临床应用前景的新药先导药物奠定了实验研究基础。下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。本专利技术的实施例是为了使本领域的技术人员能够实施，但并不对本专利技术作任何限制。其中的常用试剂的公开了是为了使本领域的技术人员更好的实施本专利技术，但并不对本专利技术作任本文档来自技高网...
【技术保护点】
帕莫酸在制备BLyS拮抗剂的用途。
【技术特征摘要】
1.帕莫酸在制备B...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙剑，魏静，傅学钢，郝霞飞，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12
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