一种高效价噬菌体的生产方法技术

本发明专利技术提供了一种高效价噬菌体的生产方法，在生产过程中，定时检测噬菌体培养液的OD值，当噬菌体的宿主菌液培养到增殖活性最强的对数生长期时，静置后进行扩大培养，离心裂解后滤过除菌得到大规模的高效价噬菌体液。本发明专利技术所述的高效价噬菌体的生产方法，方法合理，应用方便，生产效率高，生产的噬菌体效价高，热稳定性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术和微生物制品领域，具体地，涉及一种高效价噬菌体的生产方法。
技术介绍
噬菌体是一类能感染细菌、放线菌、螺旋体等微生物的病毒的总称，对一些细菌具有高度的专一性，当噬菌体侵染这些细菌时，可在细菌中繁殖并杀死细菌，而它对动植物没有毒性。随着分子生物学技术的发展，噬菌体已经广泛用于疾病诊断、水处理等多个领域。由于噬菌体可以将基因插入宿主DNA内的特性，使得它还成为了重要的分子和遗传学研究工具。利用噬菌体，可以设计很多精巧的实验。然而在上述过程中，都需要对噬菌体进行扩大生产，现有技术的噬菌体生产方式条件复杂，并且往往效率不高，生产效果不好，严重制约了对噬菌体应用的发展。
技术实现思路
专利技术目的：为了克服以上不足，本专利技术提供了一种高效价噬菌体的生产方法。技术方案：本专利技术提供了一种高效价噬菌体的生产方法，包括以下步骤：1)冻存的噬菌体母液按照体积比1:1-2加入到菌液中，混合均匀；2)将上述混合液于32-40℃温度下，以80-120r/min的速度振荡培养10-20min；3)将步骤2)的混合液均匀涂布在固体培养基上，于32-40℃条件下倒置培养8-16h；4)将固体培养基上的单一菌落溶解于噬菌体缓冲液中，置于3-6℃条件下3-4h，并每间隔20-30min摇晃2-3次，得噬菌体母液；5)噬菌体母液加入母液体积200-1000倍的噬菌体培养基中，于32-40℃条件下振荡培养0.5-4h，每间隔20-30min取样检测OD值，培养至OD550-600值为0.2-0.5；6)静置噬菌体液0.5-2h；7)将步骤6)中的噬菌体液转接到体积20-200倍的新鲜噬菌体培养基中，于32-40℃条件下振荡培养8-16h，得到大规模高效价噬菌体液；8)所述大规模高效价噬菌体液于8000-12000g离心10-20min；9)上清液经过0.22-0.45μm滤膜，得大规模高效价噬菌体悬液；上述的噬菌体培养基以重量组分计，包括以下组分：牛肉膏4-8份、蛋白胨5-12份、酵母膏粉0.8-1.2份、葡萄糖0.6-1份、乳糖1-1.6份、柠檬酸钠0.2-0.5份、柠檬酸铁0.1-0.3份、硫代硫酸钠0.2-0.8份、氯化钙0.6-1.2份、氯化镁0.05-0.2份、硫酸钠0.6-0.8份、硫酸锰0.1-0.3份、甘露醇0.8-1.2份、磷酸二氢钾0.03-0.3份、磷酸氢二钠0.05-0.2份、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.6-2份和水100份。本专利技术所述的高效价噬菌体的生产方法，方法合理，应用方便，在生产过程中，定时检测噬菌体培养液的OD值，当噬菌体的宿主菌液培养到增殖活性最强的对数生长期时，静置使其稳定于对数生长期后进行扩大培养，离心裂解后滤过除菌得到大规模的噬菌体液。生产后的噬菌体效价高，热稳定性好。此外，噬菌体培养基组分合理，营养丰富，生产效率高。进一步的，上述的高效价噬菌体的生产方法，所述固体培养基以重量组分计，包括以下组分：蛋白胨0.8-1.2份、酵母膏粉0.8-1.5份、琼脂糖1-2份、乳糖0.3-0.6份、氯化钠0.3-0.8份、氯化钾0.1-0.5份、硫酸镁0.5-2份、磷酸氢二钠0.1-0.3份和水100份。固体培养基的营养丰富，培养效果好。进一步的，上述的高效价噬菌体的生产方法，所述噬菌体母液中噬菌体的滴度为106-1012PFU/mL。高滴度的噬菌体母液可以使整个噬菌体的大规模生产效率更高。进一步的，上述的高效价噬菌体的生产方法，所述振荡速度为150-260r/min。条件温和，易于实现。进一步的，上述的高效价噬菌体的生产方法，所述噬菌体缓冲液以重量组分计，包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐8-15份、氯化钠0.05-0.2份、氯化钾1-5份、硫酸镁5-20份、磷酸氢二钾1-3份、磷酸二氢钠8-12份、明胶0.05-0.1份和水100份，并且调节pH到7-7.5。噬菌体缓冲液组分合理，使用方便，可以用于噬菌体的溶解和重悬，并且不影响噬菌体的活性。进一步的，上述的高效价噬菌体的生产方法，所述蛋白胨为胰蛋白胨。胰蛋白胨作为一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末，具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状，应用方便。进一步的，上述的高效价噬菌体的生产方法，所述的水为去离子水或纯化水。去离子水或纯化水可以保证噬菌体大规模生产过程质量稳定、可控。进一步的，上述的高效价噬菌体的生产方法的制备方法，使用稀盐酸和/或氢氧化钠调节溶液pH。原料来源广，调节十分方便，并且应用成本低。进一步的，上述的高效价噬菌体的生产方法，所述步骤在4-6％的湿度条件下完成。4-6％的湿度条件下溶菌活性最佳，生产效果最好。有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术所述的高效价噬菌体的生产方法，方法合理，应用方便，生产效率高，生产的噬菌体效价高，热稳定性好。附图说明图1为本专利技术所述使用实施例1-4生产方法制备的噬菌体温度稳定性检测图。具体实施方式下面将通过几个具体实施例，进一步阐明本专利技术，这些实施例只是为了说明问题，并不是一种限制。实施例1一种高效价乳杆菌噬菌体的生产方法，步骤在4％的湿度条件下完成，包括以下步骤：1)冻存的乳杆菌噬菌体母液按照体积比1:1加入到乳杆菌菌液中，混合均匀；所述噬菌体母液中噬菌体的滴度为106PFU/mL；2)将上述混合液于32℃温度下，以80r/min的速度振荡培养10min；3)将步骤2)的混合液均匀涂布在固体培养基上，于32℃条件下倒置培养8h；所述固体培养基以重量组分计，包括以下组分：胰蛋白胨0.8份、酵母膏粉0.8份、琼脂糖1份、乳糖0.3份、氯化钠0.3份、氯化钾0.1份、硫酸镁0.5份、磷酸氢二钠0.1份和去离子水100份；4)将固体培养基上的单一菌落溶解于1mL的噬菌体缓冲液中，置于3℃条件下3h，并每间隔20min摇晃2次，得噬菌体母液；所述噬菌体缓冲液以重量组分计，包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐8份、氯化钠0.05份、氯化钾1份、硫酸镁5份、磷酸氢二钾1份、磷酸二氢钠8份、明胶0.05份和去离子水100份，并且使用稀盐酸和/或氢氧化钠调节pH到7；5)噬菌体母液加入母液体积200倍的噬菌体培养基中，于32℃条件下振荡培养0.5h，振荡速度为150r/min，每间隔20min取样检测OD值，培养至OD550值为0.2；上述的噬菌体培养基以重量组分计，包括以下组分：牛肉膏4份、蛋白胨5份、酵母膏粉0.8份、葡萄糖0.6份、乳糖1份、柠檬酸钠0.2份、柠檬酸铁0.1份、硫代硫酸钠0.2份、氯化钙0.6份、氯化镁0.05份、硫酸钠0.6份、硫酸锰0.1份、甘露醇0.8份、磷酸二氢钾0.03份、磷酸氢二钠0.05份、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐0.6份和去离子水100份；6)静置噬菌体液0.5h；7)将步骤6)中的噬菌体液转接到体积20倍的新鲜噬菌体培养基中，于32℃条件下振荡培养8h，得到大规模高效价噬菌体液；8)所述大规模高效价噬菌体液于8000g离心20min；9)上清液经过0.22μm滤膜，得大规模高效价噬菌体悬液。实施例2一种高效价溶藻弧菌噬菌体的生产方法，步骤在6％的湿度条件下完成，包括以下步骤：1)冻存的溶藻弧菌噬菌体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效价噬菌体的生产方法，其特征在于：包括以下步骤：1）冻存的噬菌体母液按照体积比1:1‑2加入到菌液中，混合均匀；2）将上述混合液于32‑40℃温度下，以80‑120r/min的速度振荡培养10‑20min；3）将步骤2）的混合液均匀涂布在固体培养基上，于32‑40℃条件下倒置培养8‑16h；4）将固体培养基上的单一菌落溶解于噬菌体缓冲液中，置于3‑6℃条件下3‑4h，并每间隔20‑30min摇晃2‑3次，得噬菌体母液；5）噬菌体母液加入母液体积200‑1000倍的噬菌体培养基中，于32‑40℃条件下振荡培养0.5‑4h，每间隔20‑30min取样检测OD值，培养至OD550‑600值为0.2‑0.5；6）静置噬菌体液0.5‑2h；7）将步骤6）中的噬菌体液转接到体积20‑200倍的新鲜噬菌体培养基中，于32‑40℃条件下振荡培养8‑16h，得到大规模高效价噬菌体液；8）所述大规模高效价噬菌体液于8000‑12000g离心10‑20min；9）上清液经过0.22‑0.45μm滤膜，得大规模高效价噬菌体悬液；上述的噬菌体培养基以重量组分计，包括以下组分：牛肉膏 4‑8份、蛋白胨 5‑12份、酵母膏粉 0.8‑1.2份、葡萄糖 0.6‑1份、乳糖 1‑1.6份、柠檬酸钠 0.2‑0.5份、柠檬酸铁 0.1‑0.3份、硫代硫酸钠 0.2‑0.8份、氯化钙 0.6‑1.2份、氯化镁 0.05‑0.2份、硫酸钠 0.6‑0.8份、硫酸锰 0.1‑0.3份、甘露醇 0.8‑1.2份、磷酸二氢钾0.03‑0.3份、磷酸氢二钠 0.05‑0.2份、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐 0.6‑2份和水 100份。...

【技术特征摘要】
1.一种高效价噬菌体的生产方法，其特征在于：包括以下步骤：1）冻存的噬菌体母液按照体积比1:1-2加入到菌液中，混合均匀；2）将上述混合液于32-40℃温度下，以80-120r/min的速度振荡培养10-20min；3）将步骤2）的混合液均匀涂布在固体培养基上，于32-40℃条件下倒置培养8-16h；4）将固体培养基上的单一菌落溶解于噬菌体缓冲液中，置于3-6℃条件下3-4h，并每间隔20-30min摇晃2-3次，得噬菌体母液；5）噬菌体母液加入母液体积200-1000倍的噬菌体培养基中，于32-40℃条件下振荡培养0.5-4h，每间隔20-30min取样检测OD值，培养至OD550-600值为0.2-0.5；6）静置噬菌体液0.5-2h；7）将步骤6）中的噬菌体液转接到体积20-200倍的新鲜噬菌体培养基中，于32-40℃条件下振荡培养8-16h，得到大规模高效价噬菌体液；8）所述大规模高效价噬菌体液于8000-12000g离心10-20min；9）上清液经过0.22-0.45μm滤膜，得大规模高效价噬菌体悬液；上述的噬菌体培养基以重量组分计，包括以下组分：牛肉膏 4-8份、蛋白胨 5-12份、酵母膏粉 0.8-1.2份、葡萄糖 0.6-1份、乳糖 1-1.6份、柠檬酸钠 0.2-0.5份、柠檬酸铁 0.1-0.3份、硫代硫酸钠 0.2-0.8份、氯化钙 0.6-1.2份、氯化镁 0.05-0.2份、硫酸钠 0.6-0.8份、硫酸锰 0.1-0.3份、甘露醇 0.8-1.2份、磷酸二氢钾0.03-0.3份...

【专利技术属性】
技术研发人员：许维素，宋增福，陈彪，
申请(专利权)人：苏州埃瑞特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32