一种注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法及其降解途径的分析方法技术

本发明专利技术公开了一种注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，包括：对注射用丹参多酚酸分别进行高温降解试验、氧化降解试验、金属离子降解试验及光照降解试验，得到降解产物；对降解试验的降解产物通过超高效液相‑质谱检测方法得到质谱图，对质谱图中的碎片离子进行分析，确定降解产物；对降解产物富集后，采用超高效液相色谱检测方法对注射用丹参多酚酸原料及降解产物同时检测，得到超高效液相色谱图；根据质谱图及色谱图，能够对随机待检验样品进行指示性分析，确定其降解产物。本发明专利技术还公开了一种注射用丹参多酚酸降解途径的分析方法。本发明专利技术能够同时测定注射用丹参多酚酸中的活性成分及其降解产物，具有灵敏度高、受外界干扰小、测试快速等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药制剂稳定性研究，具体涉及一种注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法及其降解途径的分析方法。
技术介绍
中药注射剂是在中医理论指导下，采用现代科学技术与方法，将中药饮片提取、纯化后制成的供注入体内的溶液、乳状液及供临用前配制成溶液的粉末或浓溶液的无菌制剂。与丸、散、膏、丹等传统中药剂型相比较，中药注射液具有药效迅速、作用力强、生物利用度高等优势，尤其在治疗心脑血管疾病、急性感染性疾病、恶性肿瘤等疾病中发挥着不可替代的重要作用。心脑血管疾病是威胁人体健康的常见病，它的致死、致残的几率已经远远超过了癌症和艾滋病。中药在治疗心脑血管疾病已有两千多年的历史，积累了丰富的经验，并且疗效确切，在减少发病率、死亡率、致残率方面越来越显示出其独有的优势。中药由于作用多靶点，个体针对性强，副作用少，整体调整人体阴阳、气血、脏腑功能，可使患者症状明显改善。常用中药如速效救心丸、步长脑心通、五福心脑清软胶囊、通心络胶囊、复方丹参滴丸、注射用血栓通、注射用丹参多酚酸盐和注射用丹参多酚酸等，在防治心脑血管疾病中有较好的疗效且毒副作用小。中药注射剂不良反应屡见报道，部分可能与活性成分的稳定性有关。稳定性是药物质量的重要影响因素。而丹参中成分结构、极性、活性差别较大，在一种物理化学环境下难以保障其所有成分的含量稳定。特别是丹参多以中药复方配伍形式用药，其中化学成分在复杂的体内、外环境中所受到的影响较难控制。即使是同一制剂也会因生产工艺条件、储藏环境的差别带来稳定性的影响，进而影响有效成分含量，引起不良反应的产生。安全、有效、质量可控是药物使用的三个基本前提。含丹参的中药成品数量众多，厂家不一， 产品质量难以保障。在国家质检部门抽验的不合格药品中丹参及丹参制剂次次榜上有名，这极有可能是其引起临床不良反应的原因。由于中药成分复杂、结构多样，加上中药制剂客观存在着物理化学、生物等诸多因素的干扰，不容易控制，其稳定性是多因素综合作用的结果，故稳定性的研究不能单纯的以某一个或几个活性成分为指标进行测定。现阶段对中药制剂的稳定性研究缺乏系统的降解机理研究，更没有基于稳定性的质量控制方法，稳定性研究水平较低。丹参作为心脑血管疾病应用最多的药物，因其含有易降解结构，稳定性较差，不仅降低临床疗效，对临床应用也带来安全隐患。注射用丹参多酚酸为传统中药提取所得用于血管类疾病的药物，主要成分为原儿茶醛、丹参素、咖啡酸、丹酚酸H、丹酚酸D、丹酚酸E、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸B/E异构体、丹酚酸L、9”’-紫草酸B单甲酯异构体；其中丹酚酸B、紫草酸、迷迭香酸这三种成分的含量约占注射用丹参多酚酸总含量的60％，注射用丹参多酚酸具有纯度高、毒性小、安全性好、临床应用范围广、疗效显著等优点；其中，注射用丹参多酚酸由丹参水溶性提取物中分离出的多种酚酸类成分经过冷冻干燥加工而成的冻干粉针，为现行标准中药5类新药，为传统丹参类中药注射剂的升级换代品种，临床前研究表明，该药疗效确切，2011年已开始生产并销售。注射用丹参多酚酸中的主要活性成分为丹参中水溶性酚酸类，大部分为咖啡酸缩合物，由于酯键的存在，多数缩合酚酸的稳定性较差，易受高温、光照、酸碱等因素的影响发生降解，引起丹参制剂质量发生变化，对于注射用丹参多酚酸的含量测定和降解产物的测定，需要建立并验证一个稳定性指示性的分析方法；系统稳定性和稳定性指示性分析方法(stability-indicating method,S-I)可反映出在稳定性试验条件下药物质量的变化，是了解中药成分降解变化规律、保证中药制剂质量稳定、安全有效的有力手段，被广泛应用于药物的质量控制和稳定性研究等领域。注射用丹参多酚酸是直接入血的注射剂，其主要成分酚酸类和皂苷类均含有易被破坏的官能团结构，而现阶段无关于其系统性的稳定性研究。
技术实现思路
本专利技术设计开发了一种注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，目的是根据不同的降解试验所产生的降解产物建立的指示性的质谱图及色谱图，能够对注射用丹参多酚酸制剂在生产、储存等条件下样品的随性检验，确定其降解产物。另外，本专利技术的另一个目的是在建立稳定性研究方法的过程中，考察在不同降解试验条件下的注射用丹参多酚酸稳定性，全面系统性的分析确定注射用丹参多酚酸在不同的降解条件下的降解产物。同时，本专利技术还设计开发了一种注射用丹参多酚酸降解途径的分析方法，目的是能够根据对注射用丹参多酚酸制剂中所含成分的检验分析，推测其在生产、储存等条件下样品可能发生的降解途径。本专利技术提供的技术方案为：一种注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，包括：对注射用丹参多酚酸分别进行高温降解试验、氧化降解试验、金属离子降解试验及光照降解试验，得到降解产物；对所述降解试验的降解产物通过超高效液相-质谱检测方法得到质谱图，对所述质谱图中的碎片离子峰进行分析，确定所述降解产物；对所述降解产物富集后，采用超高效液相色谱检测方法对注射用丹参多酚酸原料及所述降解产物同时检测，得到超高效液相色谱图；其中，根据所述质谱图及所述色谱图，能够对所述注射用丹参多酚酸样品进行指示性分析，确定其降解产物。优选的是，对注射用丹参多酚酸进行的高温降解试验的反应温度为80℃。优选的是，对注射用丹参多酚酸进行的氧化降解试验使用的氧化剂为3％双氧水。优选的是，对注射用丹参多酚酸进行金属离子降解试验使用一价金属离子溶液、二价金属离子溶液及三价金属离子溶液进行试验；其中，一价金属离子溶液为氯化钾溶液，所述二价金属离子溶液为氯化钙，所述三价金属离子溶液为氯化铝溶液，并且所述溶液浓度均为0.1mol/L。优选的是，对注射用丹参多酚酸进行的光照降解试验使用1023×10 lux200白炽灯或18 lux200紫外灯进行光照。优选的是，对注射用丹参多酚酸进行降解试验的过程中，当注射用丹参多酚酸中的有效成分丹酚酸B降解至初始浓度10％，终止试验。优选的是，对注射用丹参多酚酸进行降解试验的过程中，选用丹酚酸B，迷迭香酸，紫草酸，丹参素，原儿茶醛，咖啡酸为对照品。优选的是，所述质谱图包括一级质谱图和/或二级质谱图。一种注射用丹参多酚酸降解途径的分析方法，包括：对所述注射用丹参多酚酸进行超高效液相-质谱检测，得到其质谱图，通过所述质谱图中的碎片离子峰分析其降解产物；通过所述降解产物、碎片离子峰及其出峰时间对其降解途径进行分析：当所述降解产物中包括丹酚酸S、丹酚酸T、丹酚酸C和/或异丹酚酸C时，所述降解途径为高温降解；当所述降解产物中包括原儿茶酸、丹酚酸F和/或碎片离子峰为724时，所述降解途径为氧化降解；当所述降解产物中包括碎片离子峰为715，并且所述碎片离子峰的出峰时间在8.8分钟至9.2分钟之间和/或9.9分钟至10.15分钟之间时，所述降解途径为三价金属离子降解；当所述降解产物中包括碎片离子峰为178和/或736时，所述降解途径为光照降解。优选的是，通过所述降解产物、碎片离子峰及其出峰时间对其降解途径进行分析，还包括：当所述降解产物中包括紫草酸同分异构体时，所述降解途径包括高温降解或者三价金属离子降解；当所述降解产物中包括碎片离子峰为715，并且所述碎片离子峰的出峰时间在10.34分钟至10.45分钟之间时，所述降解途径包括高温降解、二价金属离子降解、三价金属离子降本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，其特征在于，包括：对注射用丹参多酚酸分别进行高温降解试验、氧化降解试验、金属离子降解试验及光照降解试验，得到降解产物；对所述降解试验的降解产物通过超高效液相‑质谱检测方法得到质谱图，对所述质谱图中的碎片离子峰进行分析，确定所述降解产物；对所述降解产物富集后，采用超高效液相色谱检测方法对注射用丹参多酚酸原料及所述降解产物同时检测，得到超高效液相色谱图；其中，根据所述质谱图及所述色谱图，能够对所述注射用丹参多酚酸样品进行指示性分析，确定其降解产物。

【技术特征摘要】
1.一种注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，其特征在于，包括：对注射用丹参多酚酸分别进行高温降解试验、氧化降解试验、金属离子降解试验及光照降解试验，得到降解产物；对所述降解试验的降解产物通过超高效液相-质谱检测方法得到质谱图，对所述质谱图中的碎片离子峰进行分析，确定所述降解产物；对所述降解产物富集后，采用超高效液相色谱检测方法对注射用丹参多酚酸原料及所述降解产物同时检测，得到超高效液相色谱图；其中，根据所述质谱图及所述色谱图，能够对所述注射用丹参多酚酸样品进行指示性分析，确定其降解产物。2.如权利要求1所述的注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，其特征在于，对注射用丹参多酚酸进行的高温降解试验的反应温度为80℃。3.如权利要求1所述的注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，其特征在于，对注射用丹参多酚酸进行的氧化降解试验使用的氧化剂为3％双氧水。4.如权利要求1所述的注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，其特征在于，对注射用丹参多酚酸进行金属离子降解试验使用一价金属离子溶液、二价金属离子溶液及三价金属离子溶液进行试验；其中，一价金属离子溶液为氯化钾溶液，所述二价金属离子溶液为氯化钙，所述三价金属离子溶液为氯化铝溶液，并且所述溶液浓度均为0.1mol/L。5.如权利要求4所述的注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，其特征在于，对注射用丹参多酚酸进行的光照降解试验使用1023×10lux200白炽灯或18lux200紫外灯进行光照。6.如权利要求1-5中任一项所述的注射用丹参多酚酸稳定性的研究方法，其特征在于，对注射用丹参多酚酸进行降解试验的过程中，当注射用丹参多酚酸中的有效成分丹酚酸B降解至初始浓度10％，终止试验。7.如权利要求6所述的注射用丹参多酚酸稳定性...

【专利技术属性】
技术研发人员：王萌，任晓亮，董鹏志，张慧杰，丁丽琴，姜苗苗，刘虹，高秀梅，樊官伟，孙立丽，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：天津;12