一种用于保藏蜜环菌母种的培养基及其制备方法技术

本发明专利技术属于密环菌母种保藏技术领域，具体涉及一种用于保藏蜜环菌母种的培养基及其制备方法。该培养基由以下重量份数的原料制成：木屑55‑65份；麸皮36‑44份；玉米粉38‑42份；磷酸二氢钾1.5‑2.5份；硫酸镁0.5‑1.5份；蛋白胨1.5‑2.5份；维生素B1 0.01‑0.02份；水800‑1000份。其制备方法包括S1.配液、S2.分装和S3.灭菌三个步骤，制备方法中使用硅胶塞代替传统的棉塞，同时制备方法中对分装高度、灭菌温度、灭菌时间等均有明确要求。与现有技术相比，使用本发明专利技术提供的培养基进行蜜环菌母种的保藏可延长有效保藏时间至两年，同时蜜环菌母种的种性不易退化。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于密环菌母种保藏
，具体涉及一种用于保藏蜜环菌母种的培养基及其制备方法。
技术介绍
蜜环菌是人工种植天麻的伴生菌，人工培养与保藏蜜环菌菌种是种植天麻中重要内容，关系到种植天麻的产量与质量，随着天麻市场日益扩大，人工保藏蜜环菌的菌种愈显重要。保藏蜜环菌的菌种大多数人采用传统的斜面低温保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等，缺点是容易变异，因培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的特性改变，而影响微生物的性状，污染杂菌的机会亦较多。菌种的保藏时间与培养基配方及制作方法有关，PDA配方制作的斜面菌种采用低温保藏法的保藏时间是3-4个月，低温保藏蜜环菌在加了琼脂的培养基上，菌种易褐化及角质化，这是退化的标志，故此法保藏蜜环菌已被多数人所淘汰。改良后的玉米粉100g、黄豆粉10g、麦麸80g、白糖20g、水1000ml作配方制作的菌种保藏时间半年至一年，对防止菌种退化也有一定的作用。上述二法是蜜环菌菌种传统的保藏方法，保藏时间短、且可能出现退化，故在天麻种植中要频繁的、定期的从事菌种保藏，费事费力；如遇菌种退化，还会造成种植天麻的产量与质量下降。改良后的玉米粉100g、黄豆粉10g、麦麸80g、白糖20g、水1000ml作配方制作的菌种能延长保藏时间能让我们看到了希望，受到了启发，配方与制作方法的改进，就可能进一步提高菌种的保藏时间，这就是本次研究的出发点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种用于保藏蜜环菌种的培养基及其制备方法，其可有效提高菌种的保藏时间且能保证菌种的种性不易退化。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，由以下重量份数的原料制成：木屑55-65份；麸皮36-44份；玉米粉38-42份；磷酸二氢钾1.5-2.5份；硫酸镁0.5-1.5份；蛋白胨1.5-2.5份；维生素B1 0.01-0.02份；水800-1000份。在上述技术方案的基础上，为了使所述培养基在保藏蜜环菌母种时有更好的表现，本专利技术还可以做如下进一步优化。进一步，所述培养基由以重量份数的原料制成：木屑60份；麸皮40份；玉米粉40份；磷酸二氢钾2份；硫酸镁1份；蛋白胨2份；维生素B10.01份；水1000份。进一步，所述木屑由栗木粉碎而成，所述木屑的粒径为3-5mm。进一步，所述麸皮为大片麸皮，所述麸皮的粒径为1-1.7mm。进一步，所述磷酸二氢钾及硫酸镁为分析纯，所述蛋白胨为生物试剂。本专利技术还提供上述用于保藏蜜环菌母种的培养基的制备方法，包括如下步骤：S1.配液：按照各原料的重量份数将所述木屑、麸皮和玉米粉加入水中并煮沸，再按各原料的重量份数加入磷酸二氢钾、硫酸镁、蛋白胨及维生素B1，搅拌溶解得培养液；S2.分装：将S1制备的培养液通过漏斗分装至规格为18mm×180mm或20mm×200mm试管中，向试管内倒入培养液的时用玻璃棒将其按至试管底部，试管竖直放置，分装入试管内的培养液的高度为试管高度的50-65％，分装完成后擦净试管内壁及管口，并用塞子密封；S3.灭菌：将S2中分装完成并密封的试管置于121-128℃的温度下灭菌35-45min，自然冷却至室温，即得用于保藏蜜环菌母种的培养基。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以有如下进一步优化。优选的，S2中使用的塞子为硅胶塞，S3中的灭菌温度为126℃，S3中的灭菌时间为40min。使用硅胶塞的好处为，一是减少制作棉塞过程，二是硅胶塞在保藏中的保水性能好、不易受潮发霉，三是用硅胶塞替换棉塞可减少石蜡封棉塞程序。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)采用本专利技术提供的培养基配方及方法制作的培养基更适宜蜜环菌生长和保藏，该培养基为柱状，使用本专利技术提供的培养基进行蜜环菌保藏，保藏时间可达730天，也即可达到两年的有效保藏期，而现有技术中的蜜环菌的保藏期只有三到四个月或半年到一年，即本专利技术大大地延长了蜜环菌母种的保藏时间。(2)采用本专利技术的培养基配方及方法制作的培养基进行蜜环菌保藏，蜜环菌母种的种性不易退化：在两年的保藏期内，菌种试管底部仍呈白色、索状、分枝多、无褐变、无角质化，表明此法保藏的菌种基本没有退化，品种性能在保藏中没有受到较大地影响。具体实施方式以下结合具体实施例及对比例对本专利技术的进行进一步的详细描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。本专利技术采用的方法未作特殊说明均为常规方法，本专利技术使用的试剂均为市售产品。实施例1一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其制备方法包括如下步骤：S1配液：将60g木屑、40g麸皮和40g玉米粉加入1000mL水中,加热煮沸，再加入2g磷酸二氢钾、1g硫酸镁、2g蛋白胨及10mg维生素B1，搅拌溶解得培养液，所述木屑由栗木粉碎而成，所述木屑的粒径为3-5mm，所述麸皮为大片麸皮，所述麸皮的粒径为1-1.7mm；S2.分装：将S1制备的培养液通过漏斗分装至规格为18mm×180mm(18是试管口径，180为试管长度)试管中，向试管内倒入培养液的同时用玻璃棒将其按至试管底部，试管竖直放置，分装高度为117mm(为试管高度的65％)，分装完成后擦净试管内壁及管口，并用硅胶塞密封；S3.灭菌：将S2中分装完成并密封的试管置于126℃的温度下灭菌40min，自然冷却至室温，即得用于保藏蜜环菌母种的培养基。实施例2一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其制备方法包括如下步骤：S1.混合：将55g木屑、36g麸皮和38g玉米粉加入800mL水中,加热煮沸，再加入1.5g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁、1.5g蛋白胨及10mg维生素B1，搅拌溶解得培养液，所述木屑由栗木粉碎而成，所述木屑的粒径为3-5mm，所述麸皮为大片麸皮，所述麸皮的粒径为1-1.7mm；S2.分装：将S1制备的培养液通过漏斗分装至规格为18mm×180mm试管中，向试管内倒入培养液的同时用玻璃棒将其按至试管底部，试管竖直放置，分装高度为90mm(为试管高度的50％)，分装完成后擦净试管内壁及管口，并用硅胶塞密封；S3.灭菌：将S2中分装完成并密封的试管置于121℃的温度下灭菌45min，自然冷却至室温，即得用于保藏蜜环菌母种的培养基。实施例3一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其制备方法包括如下步骤：S1.混合：将65g木屑、44g麸皮和42g玉米粉加入1000mL水中,加热煮沸，再加入2.5g磷酸二氢钾、1.5g硫酸镁、2.5g蛋白胨及20mg维生素B1，搅拌溶解得培养液，所述木屑由栗木粉碎而成，所述木屑的粒径为3-5mm，所述麸皮为大片麸皮，所述麸皮的粒径为1-1.7mm；S2.分装：将S1制备的培养液通过漏斗分装至规格为18mm×180mm试管中，向试管内倒入培养液的同时用玻璃棒将其按至试管底部，试管竖直放置，分装高度为99mm(为试管高度的55％)，分装完成后擦净试管内壁及管口，并用硅胶塞密封；S3.灭菌：将S2中分装完成并密封的试管置于128℃的温度下灭菌35min，自然冷却至室温，即得用于保藏蜜环菌母种的培养基。实施例4一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其制备方法包括如下步骤：S1.混合：将60g木屑、40g麸皮和40g玉米粉加入900mL水本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其特征在于，由以下重量份数的原料制成：木屑55‑65份；麸皮36‑44份；玉米粉38‑42份；磷酸二氢钾1.5‑2.5份；硫酸镁0.5‑1.5份；蛋白胨1.5‑2.5份；维生素B1 0.01‑0.02份；水800‑1000份。

【技术特征摘要】
1.一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其特征在于，由以下重量份数的原料制成：木屑55-65份；麸皮36-44份；玉米粉38-42份；磷酸二氢钾1.5-2.5份；硫酸镁0.5-1.5份；蛋白胨1.5-2.5份；维生素B1 0.01-0.02份；水800-1000份。2.根据权利要求1所述的一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其特征在于，由以重量份数的原料制成：木屑60份；麸皮40份；玉米粉40份；磷酸二氢钾2份；硫酸镁1份；蛋白胨2份；维生素B1 0.01份；水1000份。3.根据权利要求1或2所述的一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其特征在于，所述木屑由栗木粉碎而成，所述木屑的粒径为3-5mm。4.根据权利要求1或2所述的一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其特征在于，所述麸皮为大片麸皮，所述麸皮的粒径为1-1.7mm。5.根据权利要求1或2所述的一种用于保藏蜜环菌母种的培养基，其特征在于，所述磷酸二氢钾及硫酸镁为分析纯试剂，所述蛋白胨为生物试剂。6.一种如权利要求1至...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨辉德，姜莉莉，周桃英，
申请(专利权)人：黄冈职业技术学院，
类型：发明
国别省市：湖北;42