检测石蜡切片DNA质量的试剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种检测石蜡切片DNA质量的试剂、其制备方法与应用。所述试剂包含NEB热启动缓冲液、寡核苷酸、引物F、引物R以及Taq聚合酶等。所述试剂的制备方法包括：先将10×NEB热启动缓冲液、寡核苷酸、引物F、引物R和Taq聚合酶混合，之后用超纯水定容。本发明专利技术提供的一种检测石蜡切片DNA质量试剂的制备方法简单，难度低，无需专门技术培训及特殊仪器设备，且所述试剂对DNA的检测精度高，平均检出合格率达到90％以上，是经典方法合格率(约30％)的3倍以上，所需DNA的用量可降低至1ng，是经典方法用量的1/200左右，该试剂的稳定性高，在应用于检测DNA质量时，操作方便，检测准确度高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学
，更具体地，涉及一种用于DNA
的检测石蜡切片DNA质量的试剂、及其制备方法与应用。
技术介绍
DNA是人类遗传的物质基础，为了弄清DNA在人类遗传和发育过程中的功能和结构，DNA序列的检测成为了研究DNA最重要的手段。1977年Sanger专利技术了具有里程碑意义的末端终止测序法，同年A.M.Maxam和W.Gilbert专利技术了化学降解法。Sanger法因为既简便又快速，并经过后续的不断改良，成为了第一代DNA测序的主流。随着科学技术的不断革新，第一代DNA测序技术(Sanger)已无法满足测序的需求，1990年，美国正式启动跨世纪的\人类基因组计划\，计划历时15年，斥资30亿美元，破译人类自身遗传秘密，人类步入了后基因组时代。随着对DNA信息的海量需求，二代测序诞生了，该技术基于一项边合成边测序技术，代表公司有Roche(454)，Illumina(Solexa)，ABI(SOLID)。二代测序技术最基本的技术就是二代测序文库的构建，文库构建起始首先将待测样本的基因组DNA进行破碎和片段化，主要手段有剪切力，超声波，氮气，酶切等，在获得片段化DNA之后，为了方便加上不对称的测序接头，必须先将片段化DNA做末端补平和尾端加单个腺嘌呤，经典文库构建流程中末端补平和尾部加腺嘌呤的步骤是独立完成的。随着二代测序技术的飞速发展，该技术也被广泛用于遗传性突变，疾病发病机理，遗传机理等多种医学，遗传学等医疗领域。在医疗领域中，科研人员需从各种不同的组织标本中提取DNA，但新鲜组织标本来源有限，所以通常临床样本都采用石蜡包埋方式处理组织，导致获得的DNA量通常都会偏少，DNA损伤大，降解严重，因此很难达到正常基因组DNA进行质量检测量(200ng)，并且在检测过程中DNA损伤严重，很难判断DNA的质量是否可以满足下一步建库的需要，针对石蜡切片样本，DNA的质量检测方法已经成为制约二代测序技术应用于临床样本分析的首要因素，因此改进DNA的质量检测方法并针对石蜡切片开发特定的质量检测手段已成为成为了迫在眉睫的需要解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的主要目的就是针对以上现状，解决限制二代测序技术在临床样本分析上的瓶颈问题，提供一种检测石蜡切片DNA质量的试剂、及其制备方法与应用，该试剂成分简单，制备操作方便，成本低廉，不需特殊设备，并能本低廉，制备操作简易，并且可以将代替传统的DNA质量检测步骤，减少样本损失，提高DNA质量检测的准确度，降低DNA质量检测所需样本要求。为实现前述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案包括：一种检测石蜡切片DNA质量的试剂，其包含10×NEB热启动缓冲液、寡核苷酸、引物F、引物R和Taq聚合酶。在一些实施方案之中，所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂包含：10×NEB热启动缓冲液2-10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物F 0.1-3溶液体积份，浓度为10uM引物R 0.1-3溶液体积份，Taq聚合酶0.1-2.5溶液体积份，其余部分包括超纯水。在一些实施方案之中，所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂包含：10×NEB热启动缓冲液2-10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物F 0.1-3溶液体积份，浓度为10uM引物R 0.1-3溶液体积份，Taq聚合酶0.1-2.5溶液体积份，超纯水0-20溶液体积份。在一些较为优选的实施方案之中，所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂包含：10×NEB热启动缓冲液2.5体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液0.5体积份，浓度为10uM引物F溶液1体积份，浓度为10uM引物R溶液1体积份，Taq聚合酶溶液0.5体积份，超纯水14.5体积份。在一些较为优选的实施方案之中，所述引物F具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。在一些较为优选的实施方案之中，所述引物R具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。本专利技术提出了一种检测石蜡切片DNA质量试剂的制备方法包括：先将10×NEB热启动缓冲液、寡核苷酸、引物F、引物R和Taq聚合酶混合，之后用超纯水定容。本专利技术还提出了一种检测石蜡切片DNA质量的试剂的方法，其包括以下步骤：先将石蜡切片DNA和所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂混合均匀，之后进行PCR扩增。进一步的，所述PCR扩增的条件包括：在62℃-95℃温度条件下反应30-50min。具体的，所述PCR扩增包括：首先进行35个循环，每个循环包括：依次在95℃保温30秒，95℃保温30秒，62℃保温30秒；其后，依次在72℃保温30秒，72℃保温5分钟。进一步的，所述石蜡切片DNA与所述检测石蜡切片DNA质量的试剂用量比为5-15ng：25μL。本专利技术还提出了一种检测石蜡切片DNA质量的试剂盒，其包括上述的检测石蜡切片DNA质量的试剂。与现有技术相比，本专利技术的优点包括：(1)本专利技术提供的一种检测石蜡切片DNA质量试剂，对DNA的检测精度高，平均检出合格率达到90％以上，是经典方法合格率(约30％)的3倍，且所需DNA量可降低至1ng以下，是经典方法用量的1/200左右，且该试剂的稳定性高，在应用于检测DNA质量时，操作方便，检测度较高。(2)本专利技术提供的一种检测石蜡切片DNA质量试剂的制备方法，所用材料易得、价格低廉，有利于推广应用，且配制本专利技术的检测石蜡切片DNA质量试剂只需将上述原料溶于超纯水；制备简单，难度低，无需专门技术培训及特殊仪器设备。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术中记载的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是本专利技术实施例1-4及对照组中DNA的用量与检出DNA合格率的关系图。具体实施方式下文将对本专利技术的技术方案作更为详尽的解释说明。但是，应当理解，在本专利技术范围内，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。在对实例描述前，有必要提供一些备注说明：采用不同厂家、不同批次的试剂会造成实验结果的差异，属于正常现象。在进行小规模实验室，为保证平行实验间的重复性，建议配制试剂后，充分混匀并分装，以保证每次实验试剂的均一性。本专利技术公开了一种检测石蜡切片DNA质量的试剂，其包含10×NEB热启动缓冲液、寡核苷酸、引物F、引物R和Taq聚合酶。在一些实施方案之中，所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂，其包含：10×NEB热启动缓冲液2-10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物F溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物R溶液0.1-3体积份，Taq聚合酶0.1-2.5溶液体积份，其余部分包括超纯水。在一些实施方案之中，所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂，其包含：10×NEB热启动缓冲液2-10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物F溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物R溶液0.1-3体积份，Ta本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测石蜡切片DNA质量的试剂，其特征在于包含10×NEB热启动缓冲液、寡核苷酸、引物F、引物R和Taq聚合酶。

【技术特征摘要】
1.一种检测石蜡切片DNA质量的试剂，其特征在于包含10×NEB热启动缓冲液、寡核苷酸、引物F、引物R和Taq聚合酶。2.根据权利要求1所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂，其特征在于包含：10×NEB热启动缓冲液2-10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物F溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物溶液R 0.1-3体积份，Taq聚合酶溶液0.1-2.5体积份，其余部分包括超纯水。3.根据权利要求2所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂，其特征在于包含：10×NEB热启动缓冲液2-10体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物F溶液0.1-3体积份，浓度为10uM引物R溶液0.1-3体积份，Taq聚合酶溶液0.1-2.5体积份，超纯水0-20体积份。4.根据权利要求3所述的检测石蜡切片DNA质量的试剂，其特征在于包含：10×NEB热启动缓冲液2.5体积份，浓度为10mM的寡核苷酸溶液0.5体积份，浓度为10uM引物F溶液1体积份，浓度为10uM引物R溶液1体积份，Taq聚合酶溶液0.5体积份，超纯水14.5体积份。5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测石蜡切片DNA质...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏冬凯，闻彬，
申请(专利权)人：苏州贝斯派生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32