本发明专利技术涉及一种DNA修复蛋白KU80的单克隆抗体及应用，具体涉及一种DNA修复蛋白Ku80的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及所述的抗体的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种DNA修复蛋白Ku80的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及所述的抗体的应用。
技术介绍
DNA损伤中DNA双键断裂(doublestrandbreak,DSB)是最为致命的，哺乳动物细胞有两种主要修复方式：同源重组修复(homologousrecombination,HR)和非同源末端连接(non-homologousendjoining,NHEJ)。HR修复是依靠未损伤同源DNA为模版拷贝完整信息促进DNA双键断裂的准确修复，而NHEJ修复不依赖序列直接把断裂的末端相连。在哺乳动物细胞中，NHEJ修复更为重要。Ku蛋白作为NHEJ修复途径中的核心因子，在整个过程中起到了非常关键的作用。Ku蛋白是DNA末端结合蛋白，广泛存在于哺乳动物细胞内，最初它作为自身抗原在多发性肌炎-硬皮病重叠综合症(scleroderma-polymyositisoverlapsyndrome)患者中发现的(1)。Ku蛋白是异二聚体，由Ku80和Ku70两个亚单位构成，分子量分别为83KD和69KD，Ku蛋白在DNA损伤修复过程中起着关键作用。NHEJ修复途径依赖于六种核心因子参与：Ku异二聚体(Ku80和Ku70)和DNA蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)所组成的DNA蛋白激酶(DNA-PK)及XRCC4-连接酶IV复合体(2)。NHEJ修复具体过程为：2个Ku蛋白分子Ku70和Ku80分别识别并结合到DNA双链断裂末端(3)，然后此复合物召集DNA-PKcs到损伤部位与之结合并激活其激酶活性，同时也召集其他蛋白参与DNA修复，最后DNA断裂末端通过相互独立的结合位点或相互作用由XRCC4-连接酶IV复合物完成连接。在连接之前，DNA-PK发生自身磷酸化，是DNA-PKcs和Ku蛋白异二聚体从DNA链解离下来，进行下一个NHEJ过程。Ku蛋白与肿瘤的发生发展、肿瘤的放化疗抗性相关，可以利用调节Ku蛋白来提高肿瘤治疗的效果。Ku蛋白在许多肿瘤组织中有着异常表达，利用免疫组化的方法对人正常结肠组织、结肠腺瘤、结肠癌和结肠周边的正常组织中的Ku蛋白表达水平研究发现，在结肠腺瘤中Ku70/Ku80水平只有结肠癌的1/3-1/2水平，但两者都比正常结肠组织低(4)。对12位结肠癌患者的观察结果显示，结肠癌肿瘤组织内的Ku蛋白的mRNA表达及DNA-PK活性都明显高于周围的正常组织(5)。研究13例食管癌患者发现，肿瘤组织对比正常黏膜组织有高水平Ku70/Ku80蛋白表达和DNA-PK活性增强(6)。成人、儿童的急性和慢性恶性淋巴瘤细胞中Ku80平均表达水平都比正常对照组高(7)。Ku蛋白的异常表达与肿瘤细胞恶性增值、肿瘤细胞侵袭和转移以及肿瘤放化疗抵抗密切相关。肿瘤患者Ku蛋白表达水平和功能与肿瘤的抗性呈正相关，Ku蛋白低表达的肿瘤细胞存活值较低对放射线更敏感，Ku蛋白低表达的患者生存率也明显高于高表达者。Ku蛋白除了作为DNA修复蛋白，不仅在细胞DNA双链断裂修复中起着重要作用，还参与许多生理功能如维持端粒结构的稳定、免疫球蛋白编码基因V(D)J链重排、调控特定基因转录及调控细胞周期G2/M期等。Ku蛋白在研究肿瘤放化疗敏感机制和靶向治疗方面有重要的指导意义，Ku蛋白表达的正常与否和肿瘤的阶段、进展有关，可能将有利于肿瘤治疗疗效的预测。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种分泌DNA修复蛋白KU80的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于，所述杂交瘤细胞系的保藏号为CGMCCNo.12044。本专利技术另一个方面提供了前述杂交瘤细胞系分泌的DNA修复蛋白KU80的单克隆抗体，其特征在于，其能够特异的结合KU80蛋白；优选地，所述单克隆抗体的亚型为IgG1。本专利技术另一个方面提供了前述杂交瘤细胞及前述的单克隆抗体在检测靶蛋白KU80中的应用。本专利技术另一个方面提供了包含前述杂交瘤细胞和/或前述的单克隆抗体的试剂盒。本专利技术另一个方面提供了前述杂交瘤细胞及前述的单克隆抗体在检测癌细胞的试剂盒中的应用，所述癌细胞优选为结肠腺瘤、结肠癌和食管癌。本专利技术的小鼠杂交瘤细胞株，其保藏编号为CGMCCNo.12044，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏日期为2016年3月10日。附图说明图1、Ku80抗体十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测。图2、免疫印迹检测不同裂解液(COS7、Jurkat、Hela、MCF7、A549)中Ku80蛋白的表达(抗体稀释倍数1:1000)。图3、Ku80抗体的免疫荧光测试(所用细胞系：HeLa，抗体稀释倍数1:400)。图4、Ku80抗体的免疫沉淀测试。具体实施方式试剂、酶、载体及细胞株：(1)、细胞株：HeLa(CCL-2TM)、COS7(CRL-1651TM)、Jurkat(TIB-152TM)、A549(CCL-185TM)、MCF7(HTB-22TM)(2)、实验动物：雌性BALB/c小鼠(湖南斯莱克景达实验动物有限公司)；(3)、载体：pET41a(Novagen)(4)、酶及抗体试剂：构建载体过程和PCR过程的各种酶购自Fermentas，ELISA实验所用抗体anti-mouseIgG/HRP(JacksonImmunoResearch)，ELISA底物TMB(Sigma)、逆转录试剂盒(Fermentas)，BSA购自(北京元亨金马生物科技有限公司)(5)、其他试剂如无特别说明为国产分析纯。实施例1：杂交瘤细胞株Ku80及其产生的单克隆抗体的获得。1.抗原制备(1)获得目的基因TrizolReagent试剂提取HeLa细胞总RNA，将总RNA反转录为cDNA并以cDNA为模板PCR扩增Ku80基因。(2)构建重组表达载体将步骤(1)获得的PCR产物双酶切后回收，在T4DNA连接酶作用下连接入表达载体pET41a，构建重组质粒pET41a-Ku80。载体经过酶切和测序鉴定后用于转化表达细菌。(3)获得含重组表达质粒的表达菌种将步骤(2)获得的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞，用含有硫酸卡那霉素的LB固体培养基筛选，挑取单克隆用于抗原表达。(4)诱导表达和纯化将含有表达质粒的Rosetta(DE3)细菌单克隆接种于10ml含有硫酸卡那霉素的LB液体培养基中，37度，220rpm培养10hr。将菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分泌DNA修复蛋白KU80的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于，所述杂交瘤细胞系的保藏号为CGMCC No.12044。
【技术特征摘要】
1.一种分泌DNA修复蛋白KU80的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于，所述杂交瘤
细胞系的保藏号为CGMCCNo.12044。
2.一种由权利要求1所述的杂交瘤细胞系分泌的DNA修复蛋白KU80的单克隆抗体，其特
征在于，其能够特异的结合KU80蛋白；优选地，所述单克隆抗体的亚型为IgG1。
3.权利要求...
【专利技术属性】
技术研发人员：聂子梅，邱俊康，张秦川，蒋洪娇，
申请(专利权)人：成都正能生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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