本发明专利技术公开了一种全人源抗CD45的全分子IgG抗体，包含轻链可变区和重链可变区，所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；且所述的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。本发明专利技术还公开了上述全分子IgG抗体的DNA分子、表达载体、宿主细胞和应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物免疫
，尤其涉及一种全人源抗CD45的全分子IgG抗体，还涉及该全分子IgG抗体的DNA分子、表达载体、宿主细胞和应用。
技术介绍
器官、细胞和组织移植排斥以及各种自身免疫性疾病目前认为是主要是由T细胞介导的免疫反应引起的。T细胞介导的免疫反应最初是由辅助T细胞识别特定的抗原开始的。这些辅助T细胞可能是以前遗留的记忆细胞免疫反应或幼稚细胞释放的胸腺和可以表达任何一个极其广泛的抗原受体。当辅助T细胞识别抗原呈递细胞(APC)或巨噬细胞的表面的抗原-MHC复合物后，辅助T细胞被刺激后释放IL-2促进辅助T细胞增殖。增殖导致大量的T细胞识别一个特定的抗原。T细胞激活也可能刺激B细胞活化和非特异性巨噬细胞反应。一些细胞增殖分化成细胞毒性T细胞，从而破坏了抗原识别能力。抗原消失后，成熟的细胞可以保持记忆的辅助T细胞和记忆细胞毒性T细胞，在体内循环和识别再次出现的抗原。如果抗原引起这种反应不是外源性抗原，而是内源性抗原，就会导致自身免疫性疾病，如果发生在器官移植中，就表现为移植排斥。因此，研究调节T细胞介导的免疫反应是急需的。CD45抗原是一种稳定、高表达于所有白细胞和他们的前体细胞以及超过70％的骨髓有核细胞表面上的单链细胞膜糖蛋白，CD45又被称为GP180，T200或白细胞共同抗原(LCA)，是一种分子量约为200kDa的酪氨酸磷酸酶，CD45能广泛的表达于几乎所有的白细胞，包括骨髓的髓系前体细胞和淋巴结中的成熟淋巴细胞以及90％的AML细胞，这些细胞和组织为病人治疗的缓解或复发提供了大量抗体结合位点。由于CD45作为白细胞的标记物能出现在正常和恶性细胞，所以在病人体内应用抗CD45抗体可以通过代谢分布到骨髓、脾脏和淋巴结中与靶抗原结合，用于治疗急性白血病或是器官移植排斥反应或是一些自身免疫性疾病。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术的目的在于提供一种全人源抗CD45的全分子IgG抗体。本专利技术的目的又在于提供一种编码上述全人源抗CD45的全分子IgG抗体的DNA分子。本专利技术的目的又在于提供一种含有能编码上述全人源抗CD45的全分子IgG抗体的DNA分子表达载体。本专利技术的目的又在于提供一种被上述的表达载体所转化的宿主细胞。本专利技术的目的还在于提供上述全人源抗CD45的全分子IgG抗体的应用。为了实现本专利技术的目的，专利技术人通过大量试验研究，包括全人源Fab噬菌体抗体库的筛选，抗CD45特异性抗体的纯化，抗CD45全分子抗体IgG的制备、表达及纯化，抗CD45全分子抗体IgG的特性分析，最终获得了一种全人源抗CD45的全分子IgG抗体，包含轻链可变区和重链可变区，(1)所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；且(2)所述的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。优选地，所述的轻链可变区的三个抗原互补区CDR的氨基酸序列为SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示；所述的重链可变区的三个抗原互补区CDR的氨基酸序列为SEQ ID NO.8，SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。本专利技术还提出的一种全人源抗CD45的全分子IgG抗体，包含轻链恒定区和重链恒定区，所述的轻链恒定区的氨基酸序列为SEQ ID NO.11所示，所述的重链恒定区的氨基酸序列为SEQ ID NO.12所示。本专利技术还提出的一种DNA分子，其编码上述全分子IgG抗体的重链或/和轻链。优选地，其编码轻链可变区的核酸序列为SEQID NO.1所示，编码重链可变区的核酸序列为SEQ ID NO.2所示。本专利技术还提出的一种表达载体，包含有上述的DNA分子以及与该DNA分子操作性相连的表达调控序列。本专利技术还提出的一种宿主细胞，被上述的表达载体转化。优选地，该宿主细胞可以是被上述的表达载体转化的293Freestyle细胞。本专利技术还提出的上述全分子IgG抗体在制备与CD45相关的器官移植及自身免疫性疾病的诊断试剂或治疗药物中的用途。目前国内尚未报道专门针对CD45的抗体，本专利技术制备的是全人源IgG抗体，而且实验证明有很好的特异性及能够抑制CD8+及CD4+细胞的增殖。本专利技术通过噬菌体抗体库技术筛选到了对CD45具有高度亲和力的人源Fab抗体，并获取了赋予所述抗体优异特性的重链和轻链可变区的氨基酸序列和核苷酸序列，并将所述抗体的重链和轻链可变区与含有抗体恒定区的表达载体连接，最终获得了具有特异的抗原结合性和在器官移植动物水平具有较好的抗排异反应。本专利技术提供了一种具有高特异性、良好亲和力的抗CD45的全分子全人源单克隆抗体。由于CD45作为白细胞的标记物能出现在正常和恶性细胞，所以在病人体内应用抗CD45抗体可以通过代谢分布到骨髓、脾脏和淋巴结中与靶抗原结合，用于治疗急性白血病或是器官移植排斥反应或是一些自身免疫性疾病。本专利技术以CD45为靶分子，在噬菌体抗体库技术的基础上制备出全分子人源抗体。对制备的人源抗CD45抗体做功能鉴定，显示该抗体能够与CD45特异性结合，而且实验证明有很好的特异性及能够抑制CD8+及CD4+细胞的增殖。附图说明图1为本专利技术实施例1所得纯化全人源抗CD45的全分子IgG抗体的SDS-PAGE检测结果；其中1为蛋白分子量标准品，2为抗CD45抗体，3为抗TLR4抗体，4为细胞培养上清，5为流穿；可见使用Pro.A柱纯化抗CD45抗体纯度高。图2为本专利技术实施例1所得抗CD45抗体的酶联免疫吸附试验检测结果，可见抗CD45抗体与CD45蛋白的结合能力较强。图3为本专利技术实施例1所得抗CD45抗体与CD45的免疫印迹鉴定结果；其中1为抗CD45抗体与CD45蛋白表达菌；2为抗CD45抗体与BL21空菌；可见抗体与CD45蛋白有特异性结合能力。图4为本专利技术实施例1所得抗CD45抗体的亲和力检测结果，KD值为2.699×10-10M。图5为T细胞与抗CD45抗体、抗CD3抗体孵育后的结果对比图。实验结果显示抗CD45抗体对CD8+及CD4+细胞的增殖有抑制作用。具体实施方式下面，通过具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明。实施例1全人源抗CD45的全分子IgG抗体的制备1)用CD45抗原在人源Fab噬菌体库中经过六轮“吸附-洗脱-扩增”的富集筛选，获得抗CD45的Fab抗体，然后通过PCR扩增测序获得Fab抗体的可变区序列。2)根据已获得的抗体的重轻链可变区序列，设计引物。3)扩增抗CD45抗体重链、轻链。以上述制备的人源Fab模板，分别以上述涉及的重链和轻链的上下游引物扩增全分子人源抗体重链、轻链基因。(1)PCR反应体系如下：反应条件如下：(2)2％琼脂糖凝胶电泳，紫外下观察目的条带，切胶回收。(3)胶回收试剂盒纯化目的DNA片段，去离子水洗脱。4)双酶切IgG表达质粒IgG表达质粒pFUSE-CHIg-hG1、pFUSE-CLIg-hk(购自Invivogen公司)包含IgG1型人源的重链和轻链(Lambda)恒定区碱基编码序列。本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种全人源抗CD45的全分子IgG抗体，包含轻链可变区和重链可变区，其特征在于，(1)所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；且(2)所述的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。
【技术特征摘要】
1.一种全人源抗CD45的全分子IgG抗体，包含轻链可变区和重链可变区，其特征在于，(1)所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体；且(2)所述的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，或者是该序列经一个或多个氨基酸添加、删除、替换、修饰的保守性突变而获得的保守性变异体。2.根据权利要求1所述全分子IgG抗体，其特征在于，所述的轻链可变区的三个抗原互补区CDR的氨基酸序列为SEQ ID NO.5，SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示；所述的重链可变区的三个抗原互补区CDR的氨基酸序列为SEQ ID NO.8，SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。3.一...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯振卿，徐亚如，许国贞，刘振云，唐奇，朱进，
申请(专利权)人：安徽未名细胞治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。