一种促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法，包括如下步骤：A.配制专生产菌丝用的菌丝培养基；B．将菌丝块或者病健组织移至菌丝培养基中，于27~28℃条件下培养5~15天室内培养生产菌丝；C．配制生产分生孢子用的产孢培养基；D．将生长茂盛的菌丝块挑至产孢培养基中，室内培养生产分生孢子；E．收获分生孢子并致病力检测。本发明专利技术有效解决了现有技术存在产孢时间长、产孢量少或不产孢、孢子致病力下降的问题。本发明专利技术的优点是：分生孢子产出时间短、量大、纯净、致病力持久，能充分满足各项试验研究需要，大幅节约科研人员的时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物病原菌诱导产孢领域，特别涉及一种促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法。
技术介绍
八角(Illicium verum Hook.f.)又称大料、大茴香,是南亚热带地区特有的香料经济树种，其产品主要是八角和茴油。广西八角的栽培面积和产量均居全国之首, 素有“世界八角之乡”的美称。八角炭疽病〔colletotrich coccdes(Wall)llughes〕是目前八角林中影响最严重的灾害性多频发真菌性病害，可造成八角叶、枝、果枯斑，引起落叶落果、枝枯，甚至造成整株枯死，颗粒无收。鉴于以上所述八角炭疽病对八角林的严重危害，研究该病的防治技术迫在眉睫且具有重要的社会效益和经济效益。目前，通常使用病原菌有致病力的分生孢子作为抗病品种筛选、发病规律研究和药物筛选等防治技术研究的研究对象。然而，八角炭疽病分生孢子培养的现有技术，比如马铃薯葡萄糖琼脂培养基培养法（PDA），存在产孢时间长（常要40~50天）的缺陷，并且容易发生产孢量少或不产孢、孢子致病力下降等问题，导致时常发生开展试验研究时需重新回到林地寻找新鲜发病材料进行分离的情况。即便如此也受到人力物力和时宜的诸多限制，严重影响研究工作的开展甚至导致研究无法进行。这对攻克八角炭疽病病害，培养优良抗病品种，保障八角产业的健康发展是极为不利的。因此，如何获得足量且保持致病力的分生孢子就变成了当前八角炭疽病研究工作首要解决的问题和技术难点。专利技术一种能有效促使该病原菌快速产生分生孢子的培养方法，对促进八角健康生长和农业健康发展有着重要的意义，并且具有显著的社会效益和经济效益。
技术实现思路
基于以上现有技术的不足，本专利技术所解决的技术问题在于提供一种八角炭疽病原菌快速产孢的方法，为该病的防治技术研究提供足量且能保持致病力的分生孢子，为相关研究工作奠定良好基础，并为广大科研工作人员节约宝贵的时间。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法，包括如下步骤：A．配制专生产菌丝用的菌丝培养基，所述菌丝培养基为每1000毫升水中加入马铃薯18克、葡萄糖或蔗糖10克、硫酸锌1克、酵母膏2克、玉米粉2.克，琼脂20克，并且6-BA的浓度为150ppm的混合物；B．将菌丝块或者病健组织移至菌丝培养基中，于27~28℃条件下培养5~15天室内培养生产菌丝；C．配制生产分生孢子用的产孢培养基，所述产孢培养基为每500毫升60~80℃的温水浸泡8~15克八角器官1小时，然后再加入500毫升水、0.6克玉米粉、6克葡萄糖或蔗糖和20克琼脂的混合物；D．将生长茂盛的菌丝块挑至产孢培养基中，室内培养生产分生孢子；E．收获分生孢子并致病力检测。作为上述技术方案的优选实施方式，本专利技术实施例提供的促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法进一步包括下列技术特征的部分或全部：作为上述技术方案的改进，在本专利技术的一个实施例中，所述步骤B中所述的菌丝块是指在菌丝培养基中培养出的菌丝体，病健组织是指在新鲜发病的枝叶中按组织分离法挑取的含病斑部位与健康部位的交接组织。作为上述技术方案的改进，在本专利技术的一个实施例中，所述步骤C中所述八角器官为八角芽、叶和果实中的至少一种。作为上述技术方案的改进，在本专利技术的一个实施例中，所述步骤C中所述产孢培养基为每500毫升60~80℃的温水浸泡8~15克八角器官1~2小时，然后再加入500毫升水、0.6克玉米粉、6克葡萄糖或蔗糖和20克琼脂的混合物。作为上述技术方案的改进，在本专利技术的一个实施例中，所述分生孢子为黄褐色的。作为上述技术方案的改进，在本专利技术的一个实施例中，所述菌丝培养基和产孢培养基，其配制方法均按病理试验常规法配制，经高压消毒后使用。与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有如下有益效果：与现有方案相比，本专利技术提供了一种八角炭疽病原菌快速产孢的方法，利用两种不同配方培养基分别生产菌丝和分生孢子（二级培养法）替代现有技术PDA一步培养。通过二级培养法所生产目的物效果显著，分生孢子产出时间短（10天左右）、量大、纯净、致病力持久，能充分满足各项试验研究需要，大幅节约科研人员的时间。上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本专利技术的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下结合优选实施例，详细说明如下。具体实施方式下面结合实施例详细说明本专利技术的具体实施方式，其作为本说明书的一部分，通过实施例说明本专利技术的原理，本专利技术的其他方面、特征及其优点通过该详细说明将会变得一目了然。实施例1A．配制菌丝培养基用于生产菌丝用的培养基简称菌丝培养基，其成分为：马铃薯18克、葡萄糖10克、硫酸锌1克、酵母膏2克、玉米粉2克、6-苄氨基腺嘌呤：150ppm、水1000毫升、琼脂20克；配法为：先将马铃薯去皮，捣碎，加入500毫升水煮沸30分钟，过滤取液，加足上述材料煮融，装瓶后置于灭菌压力锅中在120℃压力0.12MPa条件下灭菌消毒备用。B．将菌丝块或者新鲜病健组织移至菌丝培养基中培养，扩大菌丝量生长丰茂的菌丝体是大量产出分生孢子的基础。将热融的菌丝培养基倒入培养皿内，冷凝后将生长在菌丝培养基中的菌丝块（大小0.5×0.5cm）移至菌丝培养基中，置于27℃的恒温箱内培养6天。C．配制产孢培养基；配方是：八角叶9克、玉米粉0.6克，葡萄糖6克，琼脂20克， 水1000毫升。配法：先取500毫升60~80℃温水浸泡上述八角器官1.5小时，然后再加入500毫升水、玉米粉、葡萄糖和琼脂，煮融，装瓶后置于灭菌压力锅中在120℃压力0.12MPa的条件下消毒灭菌备用。D．将在菌丝培养基中生长茂盛的菌丝块挑至产孢培养基中，培养生产分生孢子将在菌丝培养基中生长茂盛菌丝块（大小1cm×1cm）挑至平放于产孢培养基中，置于室内27.5℃恒温箱内培养。E．收获分生孢子。菌丝块移至产孢培养基培养6天后即获得适合相关试验研究用的黄褐色的分生孢子堆。结果表明：致病力检测接种效果与从林地新鲜组织分离获得的分生孢子一致。实施例2A．配制菌丝培养基用于生产菌丝用的培养基简称菌丝培养基，其成分为：马铃薯18克、葡萄糖10克、硫酸锌1克、酵母膏2克、玉米粉2克、6-苄氨基腺嘌呤：150ppm、水1000毫升、琼脂20克；配法为：先将马铃薯去皮，捣碎，加入500毫升水煮沸30分钟，过滤取液，加足上述材料煮融，装瓶后置于灭菌压力锅中在120℃压力0.12MPa条件下灭菌消毒备用。B．将菌丝块或者新鲜病健组织移至菌丝培养基中培养，扩大菌丝量生长丰茂的菌丝体是大量产出分生孢子的基础。将热融的菌丝培养基倒入培养皿内，冷凝后将病健组织（从林地中采回的新发病的的八角枝叶，剪取其病斑部位与健康部位的小块组织，先在75%的酒精溶液中消毒3~5秒钟，再转移至0.1%的升汞溶液中消毒3~5 分钟）移至菌丝培养基中，置于28℃的恒温箱内培养7天。C．配制产孢培养基；配方是：八角芽、叶和果实的混合物12克、玉米粉0.6克，葡萄糖6克，琼脂20克， 水1000毫升。配法：先取500毫升60~80℃温水浸泡上述八角器官1.5小时，然后再加入500毫升水、玉米粉、葡萄糖和琼脂，煮融，装瓶后置于灭菌压力锅中在120℃压力0.12MPa的条件下消毒灭菌备本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：A．配制专生产菌丝用的菌丝培养基，所述菌丝培养基为每1000毫升水中加入马铃薯18克、葡萄糖（蔗糖）10克、硫酸锌1克、酵母膏2克、玉米粉2.克，琼脂20克，并且6‑BA的浓度为150ppm的混合物；B．将菌丝块或者病健组织移至菌丝培养基中，于27~28℃条件下培养5~15天室内培养生产菌丝；C．配制生产分生孢子用的产孢培养基，所述产孢培养基为每500毫升60~80℃的温水浸泡8~15克八角器官1小时，然后再加入500毫升水、0.6克玉米粉、6克葡萄糖或蔗糖和20克琼脂的混合物；D．将生长茂盛的菌丝块挑至产孢培养基中，室内培养生产分生孢子；E．收获分生孢子并致病力检测。

【技术特征摘要】
1.一种促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：A．配制专生产菌丝用的菌丝培养基，所述菌丝培养基为每1000毫升水中加入马铃薯18克、葡萄糖（蔗糖）10克、硫酸锌1克、酵母膏2克、玉米粉2.克，琼脂20克，并且6-BA的浓度为150ppm的混合物；B．将菌丝块或者病健组织移至菌丝培养基中，于27~28℃条件下培养5~15天室内培养生产菌丝；C．配制生产分生孢子用的产孢培养基，所述产孢培养基为每500毫升60~80℃的温水浸泡8~15克八角器官1小时，然后再加入500毫升水、0.6克玉米粉、6克葡萄糖或蔗糖和20克琼脂的混合物；D．将生长茂盛的菌丝块挑至产孢培养基中，室内培养生产分生孢子；E．收获分生孢子并致病力检测。2.如权利要求1所述的促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法，其特征在于：步骤B中所述的菌丝块是指在菌丝培养基中培养出的菌丝体，病健组织是指在新鲜发病的枝叶中按组织分离法挑取的含病斑部位与健康部位的交接组织。3.如权利要求1所述的促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法，其特征在于：所述分生孢子为黄褐色的。4.如权利要求1所述的促使八角炭疽病原菌快速产孢的培养方法，其特征在于：所述菌丝培养基和产孢培养基，其配制方法均按病理试验常规法配...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄乃秀，覃世杰，廖旺姣，刘瑞新，邹东霞，吴耀军，覃梅，蒋晓萍，周婵，黄华艳，阙衍文，常明山，
申请(专利权)人：广西壮族自治区林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：广西;45