本发明专利技术涉及一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基和培养方法，本发明专利技术确认了活跃链霉菌发酵生产那西肽的种子培养基、发酵培养基中碳源、氮源和最佳配伍比例。利用本发明专利技术中提供的培养基配方和发酵控制工艺，能够提高那西肽发酵单位，降低发酵成本，并且最大限度的降低原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现那西肽稳定、高效的生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于发酵
，特别是涉及一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基和培养方法。
技术介绍
那西肽又称诺西肽，是一种抗生素，采用活跃链霉菌发酵模式生产，目前那西肽已被列入欧洲药典以及日本饲料安全法,许多国家和地区都在使用那西肽。我国农业部将那西肽列为可在饲料中长期添加的饲料添加剂。目前，国内相关文献报道了那西肽生产工艺，其发酵模式分别为二级发酵或三级发酵。存在的问题是：1 工业化大生产发酵水平较低，其发酵水平维持在1500-1800ug/L左右。2 国内缺少那西肽完整的发酵工艺文献报道，并且相关的文献报道以试验为主，不能够为大生产模式提供有效地技术支持。3 那西肽大生产发酵周期长，一般在240h左右，能耗高。4 那西肽发酵综合生产成本较高，产品缺乏市场竞争力。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种发酵工艺简单，有效提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料对发酵单位的影响，降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现那西肽稳定、高效生产的活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基。本专利技术的另一目的是提供利用上述培养基生产那西肽的培养方法。为实现上述目的所采取的技术方案为：一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中所述种子培养基的组成为：葡聚糖4～8g/L、糖原8～12g/L、麦芽汁6～10ml/L、鱼粉9～13g/L、棉籽饼粉11～15g/L、玉米蛋白粉13～17g/L、硫酸铵0.04～0.08g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；所述发酵培养基的组成为：葡聚糖6～10g/L、糖原10～14g/L、麦芽汁8～12ml/L、鱼粉11～15g/L、棉籽饼粉13～17g/L、玉米蛋白粉14～18g/L、蚕蛹蛋白胨7～11g/L、海藻粉4～8g/L、硫酸铵0.06～0.8g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、磷酸二氢钾0.05～0.09g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸镍0.006～0.01g/L、氯化钠0.02～0.06g/L、聚醚改性硅油0.5～0.9ml/L、液态烷烃0.3～0.7ml/L。所述液态烷烃是指正十二烷和正十三烷油的混合物，其中正十二烷的含量为85-90%。一种利用上述培养基发酵生产那西肽的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：1）种子培养：首先将种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照2～3L/m3的接种量接入种子培养基中进行培养，至菌体浓度26～30%、培养时间40～45h移种；2） 发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度38～42%、发酵周期不超过220h，化学效价＞2300ug/ml终止发酵。所述种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮＞30mg/L、溶磷100～140ug/ml、脂肪6～10g/L；所述发酵培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮＞50mg/L、溶磷40～80ug/ml、脂肪12～16g/L。所述培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液质量要求为：菌体浓度20～30%；镜检无杂菌。所述种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温28～29℃；空气流量：30～50m3/h；搅拌转速60～80r/min。所述发酵培养条件为：a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在5～7；b 温度：培养温度28～29℃，c 搅拌转速：转速控制在100-120r/min，d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa；e pH控制：发酵过程中pH控制在5～7；f 空气流量：300～400m3/h，h 溶氧控制：发酵前80h内，不控制溶氧，81～160h，溶氧控制在40%以上，161h～发酵结束：溶氧控制在30%以上。所述发酵过程中采用流加法进行补料，补料包括补甘蔗糖蜜、补水、补硫酸铵,其中a 补甘蔗糖蜜工艺控制：分别在发酵90h、150h补入甘蔗糖蜜，其加量为发酵液体积的0.2-0.3%；b补水工艺控制：发酵前80h不用进行补水，发酵时间在81～100h，当菌体浓度高于45%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在40～45%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度，发酵时间在101h～发酵结束，当菌体浓度高于42%，加入灭菌水，要求控制发酵液菌体浓度在38～42%，每隔6～8h检测发酵液菌体浓度；c 补硫酸铵：在发酵80h和120h时补入10%的硫酸铵溶液，其用量控制在发酵液体积的0.01～0.03%。本专利技术的技术优势体现在：1 本专利技术确认了活跃链霉菌发酵生产那西肽的种子培养基、发酵培养基中碳源、氮源和最佳配伍比例。2 本专利技术对种子培养、发酵培养的工艺进行了详细的阐述，确认了那西肽最佳的发酵工艺和控制参数。通过本专利技术发酵生产那西肽，其发酵单位达到2300ug/ml以上，同国内技术相比，发酵单位提高了27%以上；发酵周期控制在220h以内，降低了发酵能耗。3 本专利技术适用于工业化规模化发酵生产那西肽。具体实施方法下面用实例予以说明本专利技术，应该理解的是，实例是用于说明本专利技术而不是对本专利技术的限制。本专利技术的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。下述实施例的菌种选用活跃链霉菌：生产使用的菌种来源为母瓶发酵液。母瓶发酵液质量要求为：菌体浓度20～30%；镜检无杂菌。实施例1种子培养：培养基体积10m3。葡聚糖40kg、糖原80kg、麦芽汁60L、鱼粉90kg、棉籽饼粉110 kg、玉米蛋白粉130kg、硫酸铵0.4kg、轻质碳酸钙10kg；首先将种子培养基灭菌并冷却至20℃，并用无菌空气保压，种子培养基灭菌后的质量：氨基氮32mg/L、溶磷101ug/ml、脂肪6.2g/L；然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照20L的接种量接入种子培养基中进行培养。种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温28～29℃；空气流量：30m3/h；搅拌转速60r/min，至菌体浓度26%、培养时间40h移种。发酵培养：培养基体积100m3。葡聚糖600kg、糖原1000kg、麦芽汁800L、鱼粉1100kg、棉籽饼粉1300kg、玉米蛋白粉1400kg、蚕蛹蛋白胨700kg、海藻粉400kg、硫酸铵6kg、轻质碳酸钙100kg、磷酸二氢钾5kg、硫酸镁3kg、硫酸镍0.6kg、氯化钠2kg、聚醚改性硅油50L、液态烷烃30L。先将发酵培养基灭菌，冷却至20℃，并用无菌空气保压，发酵培养基灭菌后的质量为：氨基氮53mg/L、溶磷42ug/ml、脂肪12g/L。然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养。发酵培养条件为：a 培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在5.0；b 温度：培养温度28～29℃，c 搅拌转速：转速控制在100r/min，d 压力控制：罐压0.05～0.06MPa；e pH控制：发酵过程中pH控制在5～7；f 空气流量：300m3/h，h 溶氧控制：发酵前80h内，不控制溶氧，81～160h，溶氧控制在40%以上，161～发酵结束：溶氧控制在30%以上。发酵培养结束，菌体本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中所述种子培养基的组成为：葡聚糖4～8g/L、糖原8～12g/L、麦芽汁6～10ml/L、鱼粉9～13g/L、棉籽饼粉11～15g/L、玉米蛋白粉13～17g/L、硫酸铵0.04～0.08g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；所述发酵培养基的组成为：葡聚糖6～10g/L、糖原10～14g/L、麦芽汁8～12ml/L、鱼粉11～15g/L、棉籽饼粉13～17g/L、玉米蛋白粉14～18g/L、蚕蛹蛋白胨7～11g/L、海藻粉4～8g/L、硫酸铵0.06～0.8g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、磷酸二氢钾0.05～0.09g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸镍0.006～0.01g/L、氯化钠0.02～0.06g/L、聚醚改性硅油0.5～0.9ml/L、液态烷烃0.3～0.7ml/L。
【技术特征摘要】
1.一种活跃链霉菌发酵生产那西肽的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中所述种子培养基的组成为：葡聚糖4～8g/L、糖原8～12g/L、麦芽汁6～10ml/L、鱼粉9～13g/L、棉籽饼粉11～15g/L、玉米蛋白粉13～17g/L、硫酸铵0.04～0.08g/L、轻质碳酸钙1～5g/L；所述发酵培养基的组成为：葡聚糖6～10g/L、糖原10～14g/L、麦芽汁8～12ml/L、鱼粉11～15g/L、棉籽饼粉13～17g/L、玉米蛋白粉14～18g/L、蚕蛹蛋白胨7～11g/L、海藻粉4～8g/L、硫酸铵0.06～0.8g/L、轻质碳酸钙1～5g/L、磷酸二氢钾0.05～0.09g/L、硫酸镁0.03～0.07g/L、硫酸镍0.006～0.01g/L、氯化钠0.02～0.06g/L、聚醚改性硅油0.5～0.9ml/L、液态烷烃0.3～0.7ml/L。2.按照权利要求1所述的培养基，其特征在于所述液态烷烃是指正十二烷和正十三烷油的混合物，其中正十二烷的含量为85-90%。3.一种利用权利要求1或2所述培养基发酵生产那西肽的培养方法，其特征在于其工艺步骤为：1）种子培养：首先将种子培养基灭菌并冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的活跃链霉菌母瓶发酵液按照2～3L/m3的接种量接入种子培养基中进行培养，至菌体浓度26～30%、培养时间40～45h移种；2） 发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至20～25℃，并用无菌空气保压，然后将培养好的种子液移入发酵培养基进行发酵培养，至菌体浓度38～42%、发酵周期不超过220h，化学效价＞2300ug/ml终止发酵。4.按照权利要求3所述的培养方法，其特征在于所述种子培养基灭菌后的质量要求为：氨基氮＞30...
【专利技术属性】
技术研发人员：任勇，
申请(专利权)人：宁夏泰瑞制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：宁夏;64
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