本发明专利技术涉及植物培养技术领域，具体涉及一种寒兰人工种子制作方法，用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子，具体步骤包括：选种、消毒、采种与原球茎诱导、原球茎增殖培养及人工种子的制作，将寒兰种子诱导产生的原球茎作为人工种子的繁殖体，可以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优秀品质。同时采用制作人工种子，可以适用于机械化生产，缩短了组织培养周期，降低了成本，提高了生产效率，同时方便运输和储藏，本发明专利技术通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养高品质寒兰提供了技术支持。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物培养
，具体涉及一种寒兰人工种子制作方法。
技术介绍
寒兰为兰科兰属地生植物，假鳞茎狭卵球形，包藏于叶基之内。叶带形，薄革质，暗绿色，前部边缘常有细齿。花常为淡黄绿色而具淡黄色唇瓣，也有其他色泽，常有浓烈香气；株型修长健美，叶姿优雅俊秀，花色艳丽多变，香味清醇久远，凌霜冒寒吐芳，实为可贵，因此有“寒兰”之名，为国兰之一，生于林下、溪谷旁或稍荫蔽、湿润、多石之土壤上，海拔400-2400米。分布于中国、日本南部、朝鲜半岛南端。由于寒兰种子非常微小，几乎无胚乳，在自然条件下种子萌发率极低，因此在生产实践中多采用分株方式或组织培养进行繁殖，但是分株培养繁殖率低，时间长，不能满足市场需要，组织培养能在一定程度上解决快速繁殖的难题，但是依然存在转接次数多、成本高、移栽成活率低等问题，特别是不方便运输储藏，所以人工种子繁殖方式应用越来越广泛，目前，采用人工种子在寒兰繁殖方面还未见报道，并且大多数人工种子采用的繁殖体，都是通过组织培养诱导假鳞茎、花梗腋芽或茎尖产生原球茎，这种方式往往使繁殖体产生病毒的同时，使繁殖后的苗株发生突变，不能有效遗传苗株的优秀品质。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种寒兰人工种子制作方法，从而缩短组织培养周期、降低成本的同时，提高生产效率。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种寒兰人工种子制作方法，用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子。如上所述的一种寒兰人工种子制作方法，包括以下步骤：(1)选种：采取授粉130～140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂；(2)消毒：先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3～5min，再用10％的次氯酸钠溶液浸泡12～14min，浸泡后用清水冲洗1～2min，再用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，冲洗后将蒴果放置在无菌的培养皿中备用；(3)采种与原球茎诱导：将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+90～110mg/L肌醇+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/L VB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～3mg/L甘氨酸+1～2g/L蛋白胨+160～180mg/L磷酸二氢钠+18～22g/L蔗糖+8～10g/L琼脂+90～110g/L香蕉汁；pH为5.4～5.8，温度为22～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；(4)原球茎增殖培养：将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+0.8～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；增殖培养后的寒兰原球茎用于制作人工种子的繁殖体；(5)人工种子的制作：将上述获得的繁殖体，均匀悬浮于人工胚乳溶液，采用人工种皮包埋后，即得人工种子；所述人工胚乳溶液为：1/2MS+0.5～0.7mg/L NAA+8～12％椰汁+0.4～0.6mg/L BA+20～25g/L蔗糖+20～25g/L苹果酸+0.4～0.6％多灵菌+0.2％活性炭+15～25mg/L脱落酸；所述人工种皮为：3％海藻酸钠+2％壳聚糖+2％CaCl2。本专利技术的有益效果是：将寒兰种子诱导产生的原球茎作为人工种子的繁殖体，可以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优秀品质。同时采用制作人工种子，可以适用于机械化生产，缩短了组织培养周期，降低了成本，提高了生产效率，同时方便运输和储藏，本专利技术通过生物技术手段在短时间内，满足了商业化生产的需求，为企业规模化、产业化培养高品质寒兰提供了技术支持。具体实施方式下面对本专利技术具体实施方式做进一步的阐述。本专利技术提供的一种寒兰人工种子制作方法，用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子，从而可以使繁殖后的苗株遗传性好、不发生突变，从而保护了苗株的优秀品质。具体步骤如下：(1)选种：采取授粉130～140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂；由于这时的寒兰蒴果较成熟，能大大增加种子的诱导成功率，例如采用授粉80天的寒兰蒴果，这时蒴果还不够成熟，以致使种子的诱导成功率大大下降；表1为授粉后不同时间的种子诱导率种子数量(个)授粉的天数种子诱导率(％)10050010080510010031100130891001408710020072由表1可以看出采取授粉130～140天后的寒兰蒴果，能大大增加种子的诱导成功率。(2)消毒：先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3～5min，再用10％的次氯酸钠溶液浸泡12～14min，浸泡后用清水冲洗1～2min，再用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，冲洗后将蒴果放置在无菌的培养皿中备用；消毒是在保证蒴果内部种子活性的同时，保证蒴果的灭菌。(3)采种与原球茎诱导：将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+90～110mg/L肌醇+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/L VB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～3mg/L甘氨酸+1～2g/L蛋白胨+160～180mg/L磷酸二氢钠+18～22g/L蔗糖+8～10g/L琼脂+90～110g/L香蕉汁；pH为5.4～5.8，温度为22～25℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；通过本步骤主要是为了使寒兰种子诱导出原球茎；表2为诱导培养基的多种实施例通过本诱导培养基，能大大增加种子的诱导率，作为优选，所述诱导培养基为：1/2MS+100mg/L肌醇+0.5mg/L烟酸+0.5mg/L VB6+0.15mg/L VB1+2mg/L甘氨酸+2g/L蛋白胨+170mg/L磷酸二氢钠+20g/L蔗糖+9g/L琼脂+100g/L香蕉汁，即为表2中诱导培养基1的成分及用量。(4)原球茎增殖培养：将诱导出的原球茎接种到增殖培养基中继续培养，所述增殖培养基为：1/2MS+0.8～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.3mg/L NAA+8～12％椰汁，培养条件：培养温度24～26℃，光照时间为12h/d，光照强度为1500～2000lx；增殖培养后的寒兰原球茎用于制作人工种子的繁殖体；通过本步骤主要是为了使诱导出的原球茎进行增殖，培养出更多的原球茎，提高生产效率。(5)人工种子的制作：将上述获得的繁殖体，均匀悬浮于人工胚乳溶液，采用人工种皮包埋后，即得人工种子；所述人工胚乳溶液为：1/2MS+0.5～0.7mg/L NAA+8～12％椰汁+0.4～0.6mg/L BA+20～25g/L蔗糖+20～25g/L苹果酸+0.4～0.6％多灵菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种寒兰人工种子制作方法，其特征在于：用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子。
【技术特征摘要】
1.一种寒兰人工种子制作方法，其特征在于：用寒兰种子诱导产生的原球茎作为繁殖体制作人工种子。2.根据权利要求1所述的一种寒兰人工种子制作方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)选种：采取授粉130～140天后的寒兰蒴果，且蒴果无开裂；(2)消毒：先用稀释的洗洁精溶液擦洗蒴果表面，然后用清水冲洗3～5min，再用10％的次氯酸钠溶液浸泡12～14min，浸泡后用清水冲洗1～2min，再用75％的酒精消毒1min，接着用0.2％的升汞消毒3min，然后用无菌水冲洗2～3min，冲洗后将蒴果放置在无菌的培养皿中备用；(3)采种与原球茎诱导：将消毒后的蒴果放置在无菌工作台上，切开蒴果，将种子移入有少量无菌水的培养瓶中，轻轻摇动使之分散均匀，然后用无菌吸管将种子分移到诱导培养基上，并使种子均匀地分布于诱导培养基表面，所述诱导培养基为：1/2MS+90～110mg/L肌醇+0.4～0.6mg/L烟酸+0.4～0.6mg/LVB6+0.1～0.2mg/L VB1+1～3mg/L甘氨酸+1～2g/L蛋白胨+1...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋林贵，王维青，
申请(专利权)人：成都东山兰韵农业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51
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