本发明专利技术公开了一种具有抗氧化、抗疲劳活性的海马多肽及其制备方法，是以干海马为原料，经粉碎、电子束辐照‑超声波处理、复合酶解、超滤、冷冻干燥，制得所述海马多肽。本发明专利技术将电子束辐照技术与超声波处理结合应用于海马多肽的制备，能有效提高对海马的酶解速度，加快目标肽段的释放，并提高酶解产物的抗氧化活性。另一方面，利用可控酶解酶技术，通过控制水解条件和水解度，能获得尽可能多的目标分子量分布的肽类产物，同时在比较温和的酶解条件下能够很好地保存酶解产物的营养价值，安全性极高。此外，本发明专利技术利用滤膜包对酶解产物进行过滤，最终获得的海马多肽分子量在5000Da以下，纯度较高，并且具有明显的抗疲劳功效。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品加工
，具体涉及一种具有抗氧化、抗疲劳活性的海马多肽及其制备工艺。
技术介绍
海马是海龙科动物，性温、味甘，是传统补益中药，具有温肾壮阳、散结消肿的作用。中国药典2005年版规定可入药的海马种类有海龙科动物线纹海马(Hip-pocampus kelloggi Jordan et Snyder)、刺海马(Hippo-campus histrix Kaup)、大海马(Hippocampus kuda Bleeker)、三斑海马(Hippocampus trimaculatus Leach)和小海马(海蛆) (Hippocampus japonicus Kaup)的干燥体。海马药用历史悠久，早在梁代陶弘景《本草经集注》中已有记载，时称“水马”。公元739年陈藏器在《本草拾遗》中首次使用海马之名。欧洲从18世纪开始将海马入药。《本草纲目》记载：海马，主难产及血气痛；暖水脏，壮阳道；消瘕块，治疗疮肿毒。故有温肾壮阳，散结消肿之功效；主治阳痿、肾虚作喘、症瘕积聚、瘰疠痰核、跌打损伤，外治痈肿疗疮。近年来的药理研究表明海马不仅有激素样作用，增强造血功能，还显示了抗癌、抗衰老、抗疲劳和Ca2+阻断等作用。目前，关于海马的研究主要集中在养殖技术、化学成分的研究，对药理功效方面的研究也比较浅显。近几年，海洋生物活性肽是食品领域的研究热点。海马含有丰富的蛋白和必须氨基酸，是制备蛋白质及生物活性肽的优质蛋白原料，具有潜在的巨大商业价值。而目前关于海马生物活性肽的研究只限于对酶解液化海马蛋白的抗氧化活性研究。因此，有必要对海马多肽的制备及其生物活性进行深入研究。生物活性肽的来源主要有两个：一是天然存在于生物体内的活性肽，主要包括肽类激素、组织肌肽、神经多肽等，此类活性肽被称为内源性生物活性肽；二是通过水解海洋蛋白质资源所获得的具有各种生理功能的活性肽，此类活性肽被称为外源性海洋生物活性肽。内源性生物活性肽的制备方法主要是溶剂萃取法，在提取过程中需要使用大量的有机溶剂（多为丙酮和乙醇等），因此会对环境造成污染并且存在有机溶剂残留给活性肽带来毒性的问题；同时，由于内源性活性肽在生物体内含量很少，对下游技术（特别是分离纯化技术）要求苛刻并且要获得纯度较高的、足量的产物会造成极大地资源浪费，并不适合大规模工业化生产。外源性生物活性肽的制备方法主要是可控酶解法，蛋白质的可控酶解是采用内切肽酶对蛋白质进行水解，并通过控制水解条件和水解度，以获得尽可能多的目标分子量分布的肽类产物。在营养蛋白的多肽链内部可能普遍存在着功能区，通过可控酶解技术，就有可能把蛋白质中所蕴藏的功能区肽片段释放出来，制备出具有各种各样生理活性的生物活性肽。蛋白酶的选择是酶解法制备海洋生物活性肽的关键，每种蛋白酶都有特定的酶切位点，使用不同的蛋白酶酶解同种蛋白所产生的水解产物的理化和功能性质不尽相同。目前海马的酶解工艺均采用单酶酶解，用此法得到多肽结构往往较为单一且生物活性也相对有限。复合酶解是利用多种蛋白酶以此对蛋白质进行切割，因此能够获得更加丰富的目标肽段，提高其生物活性，同时获得的多肽分子量也更为短小，将更有利于被人体吸收利用。干海马质地坚硬，传统的酶法提取需要较长的酶解时间，同时在酸、碱、有机溶剂等反应介质中易使蛋白质变性失活，因此酶解效率较低。已授权的专利技术专利“一种海马多肽酶解液的制备方法”（申请号：CN 201310196742.1）和已公布的专利技术专利“一种海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法”（申请号：CN 201510100963.3）、“一种从海马提取短肽的方法”（ 申请号 CN 201310180051.2）均采用传统的酶解方法，因而酶解时间较长（7-9h），效率低下，且以上专利的加工工艺与本专利有本质不同。采用电子束辐照处理蛋白质，可以改变蛋白的结构特征，辅助增强蛋白质中的肽键断裂，使海马蛋白结构变得松散，从而提高蛋白的水解度；超声波对酶解反应的影响主要是空化效应，即超声波可在液体介质中形成微泡，其破裂伴随能量的释放，使海马蛋白结构变得软烂，以此提高许多化学反应的速度。如果将电子辐照、微波或者超声波等物理手段与酶解法相结合应用于海马生物活性肽的制备，不仅可以缩短酶解时间，提高酶解效率，还可以获得更加丰富的目标肽段。已公布的专利技术专利“一种从鱼鳞中提取胶原蛋白的方法”（申请号：CN 201510603711.2）应用了电子辐照技术来提高鱼鳞胶原蛋白的提取速率，但其酶解处理仍然需要较长的时间（3-4h），此专利技术也应用了超声波处理进行脱灰，但并没有将电子辐射与超声波技术结合应用于酶解处理，以此进一步缩短酶解时间，提高酶解效率，且以上专利的加工工艺与本专利有本质不同。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有加工技术上的不足和存在的问题，提供一种具有抗氧化、抗疲劳活性的海马多肽及其制备方法，解决了传统酶解工艺存在的耗时长、效率低、产物生物活性不高等问题，提供了一种高活性海马多肽的制备工艺。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种具有抗氧化、抗疲劳活性的海马多肽及其制备工艺，其特征在于：本法有利于高效、快速地制备具有最强抗氧化活性的目标肽段，制得的海马多肽分子量在5000Da以下，具有较好的抗疲劳功效。所述具有抗氧化、抗疲劳活性的海马多肽的制作工艺，是以干海马为原料，经粉碎、电子束辐照-超声波处理、复合酶解、超滤、冷冻干燥制得成品，其具体包括以下步骤：1）粉碎：选取未吸潮变质、味道清淡无异味的干燥海马，将其剪成0.5~1cm的小段，并用中草药粉碎机进行粉碎；2）电子束辐照-超声波处理：将步骤1）得到的海马粉末置于电子直线加速器中进行辐照处理（2.5~3KGy，），之后以料液比1:15~1:20的比例，将海马粉末溶于去离子水中，磁力搅拌20~30分钟，最后进行超声处理（400~600W，50~60℃，20~30min）；3）复合酶解：调节步骤2）得到的海马溶液pH至6.5~7.0，以3000~4000U/g海马的比例加入适量的木瓜蛋白酶，在60~65℃的条件下水浴酶解30~40分钟；冷却至室温后再次调节溶液的pH至7.5~8.0，以3000~4000U/g海马的比例加入适量的胰蛋白酶，在40~45℃的条件下水浴酶解30~40分钟，最后在沸水浴中灭酶10~15分钟后离心取上清液，得到海马酶解液；4）过滤：依次用截留分子量为10000Da、5000Da的超滤膜对海马酶解液进行超滤，得到分子量小于5000Da的海马多肽液；5）干燥：将步骤4）处理后的滤液进行浓缩，将浓缩液冷冻结冰后进行真空冷冻干燥，得到海马多肽粉末。本专利技术的显著优点在于：（1）本专利技术采用复合酶解技术制备海马多肽，能够获得更加丰富的目标肽段，提高其生物活性，同时获得的多肽分子量也更为短小，将更有利于被人体吸收利用；酶解条件比较温和，可以很好地保存酶解产物的营养价值，安全性极高，无任何对人体有害的副产物产生；另外酶解切除了蛋白中非功能区的肽段，可以有效地避免免疫排斥反应的困扰。（2）干海马质地坚硬，传统酶解工艺需要较长的酶解时间才能释放出目标肽段的活性肽，因此会导致产物的活性降低。本专利技术将电子束辐照-超声波处理与酶解法相结合应用于海马多肽的制备，不仅可以缩短酶解时间，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗氧化、抗疲劳活性的海马多肽的制备工艺，其特征在于：将干海马进行粉碎、电子束辐照‑超声波处理、复合酶解、超滤、冷冻干燥制得成品。
【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化、抗疲劳活性的海马多肽的制备工艺，其特征在于：将干海马进行粉碎、电子束辐照-超声波处理、复合酶解、超滤、冷冻干燥制得成品。2.根据权利要求1所述具有抗氧化、抗疲劳活性的海马多肽的制备工艺，其特征在于：具体包括以下步骤：1）粉碎：选取未吸潮变质、味道清淡无异味的干燥海马，将其剪成0.5~1cm的小段，并用中草药粉碎机进行粉碎；2）电子束辐照-超声波处理：将步骤1）得到的海马粉末置于电子直线加速器中进行辐照处理，电子束剂量为2.5~3KGy，之后以料液重量比1:15~1:20的比例，将海马粉末溶于去离子水中，磁力搅拌20~30分钟，最后进行超声处理，超声功率400~600W，超声温度50~60℃，超声时间20~30min；3）复合酶解：调节步...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭泽镔，林端权，贾祥泽，王健一，郑宝东，张怡，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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