一种复合医用生物蛋白胶的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种复合医用生物蛋白胶的制备方法，属于生物胶制备技术领域。本发明专利技术取猪胎衣处理，干燥后与甘草混合碾磨，加入胰蛋白酶等酶解后，浓缩得浓缩液，与胰蛋白胨等混合杀菌消毒得培养基，接种枯草芽孢杆菌培养，再发酵后过滤得滤液，与山梨糖醇混合，经紫外线照射，加入氯化钙等微波反应，与无水乙醇混合过滤得滤渣，冷冻干燥制得复合医用生物蛋白胶。本发明专利技术的有益效果是：本发明专利技术制备步骤简单，所得产品降解性好，在组织内2～3个月完全吸收降解；所制得的凝胶液粘度高，与组织粘附性好，具有与组织相近似的韧性，组织变动时不易脱落，可有效防止细菌感染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种复合医用生物蛋白胶的制备方法，属于生物胶制备

技术介绍
医用粘合剂在外科上的应用日益广泛，目前在临床上应用的粘合剂都存在着一定的局限性。医用化学粘合剂具有良好的粘合性能，但由于在体内不可降解，生物相容性差，部分患者存在着不适应，应用收到限制；医用生物粘合剂具有良好的生物相容性，在体内可降解，与患者的适应性也比较好，是今后医用粘合剂开发的方向。目前在临床上应用的生物粘合剂-纤维蛋白胶已经取得了较好的效果。纤维蛋白胶在外科中的应用日益广泛，包括组织粘附、止血、以及封堵气漏和体液泄漏等，但其在临床应用中存在着不足，它的组成成分纤维蛋白原和凝血酶都是从人类血液中提取的，用做外科粘附剂，存在着传染疾病的危险，并且粘附特性较差，应用也收到了限制。因此研究一种可用于人类的粘附能力强的生物胶是很有必要的。C-聚谷氨酸是一种由微生物大量生物合成的、具有优良生物相容性、生物降解性及无毒无污染性的氨基酸聚合物，已广泛用做药用载体材料。聚谷氨酸-明胶生物胶的粘连强度优于纤维蛋白胶。但是使用的交联剂的浓度较高，胶凝时间还比纤维蛋白胶胶凝时间稍长，对组织的粘附特性也不是十分优越。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：针对医用生物蛋白胶降解性差，粘度低，凝胶时间长，导致其粘附性差，组织变动时易脱落的弊端，提供了一种取猪胎衣处理，干燥后与甘草混合碾磨，加入胰蛋白酶等酶解后，浓缩得浓缩液，与胰蛋白胨等混合杀菌消毒得培养基，接种枯草芽孢杆菌培养，再发酵后过滤得滤液，与山梨糖醇混合，经紫外线照射，加入氯化钙等微波反应，与无水乙醇混合过滤得滤渣，冷冻干燥制得复合医用生物蛋白胶的方法。本专利技术制备步骤简单，所得产品降解性好，制备的凝胶液粘度高，使用后其粘附性好，组织变动时无脱落现象发生。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下所述的技术方案是：（1）使用水将猪胎衣表面血渍洗净，按固液比1:3，浸泡于pH为6.5磷酸盐缓冲液中，并置于超声振荡器中，在30～35KHz下振荡30～40min，再进行过滤，使用蒸馏水冲洗过滤后的猪胎衣，直至冲洗液呈中性，随后置于70℃烘箱中干燥5～6h；（2）按质量比1:1～2，取甘草及上述干燥后的猪胎衣放入碾磨机中进行碾磨，过200目筛，将过筛颗粒与其质量1.0～1.2％胰蛋白酶放入酶解罐中，再加入过筛颗粒质量2～4倍的质量分数为5％碳酸氢铵溶液，设定温度为35～38℃，酶解4～6h；（3）在上述酶解结束后将酶解罐中的酶解混合物移入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的55～65％，得浓缩液，按重量份数计，取45～55份浓缩液、28～32份胰蛋白胨、34～36份酵母浸膏、10～15份血粉、2～4份异丙基-β-D-硫代半乳糖苷、1～2份磷酸二氢钾及1.2～1.8份磷酸氢二钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基；（4）按接种量10～15％，将枯草芽孢杆菌接种至上述培养基中，并置于恒温箱中，设定温度为36～38℃，培养14～16h，待培养结束后将上述制备的培养基倒入玻璃发酵罐中，设定温度为37℃，以120r/min搅拌发酵，待发酵罐中发酵物颜色不变时，对发酵罐内的发酵混合物进行减压过滤，收集过滤液；（5）将上述所得的过滤液与其质量16～23％山梨糖醇混合均匀，并放入紫外线下进行照射2～3h，再分别向其中加入过滤液质量0.9～1.2％乙二醇双（2-氨基乙基醚）四乙酸及过滤液质量30～40％氯化钙，搅拌均匀，并放入微波反应器中，在功率200～300W下反应4～6h，随后再加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集滤渣，并使用无菌水冲洗直至冲洗液呈中性，将滤渣冷冻干燥，即可得复合医用生物蛋白胶。本专利技术的应用方法：将本专利技术制得的复合医用生物蛋白胶与无菌水按固液比1:2～3，混合形成凝胶液，用于小肠手术切口粘合，16～21天后，检测吻合口愈合良好，无渗漏，吻合部位水肿均已消退，肠壁光滑。该复合医用生物蛋白胶可在组织表面8～10s聚合固化成膜，粘接强度高，具有与组织相近似的韧性，组织变动时不易脱落，无细胞毒性，可有效防止细菌感染，在2～3个月完全吸收降解。本专利技术与其他方法相比，有益技术效果是：（1）本专利技术制备步骤简单，所得产品降解性好，在组织内2～3个月完全吸收降解；（2）所制得的凝胶液粘度高，与组织粘附性好，具有与组织相近似的韧性，组织变动时不易脱落，可有效防止细菌感染。具体实施方式首先使用水将猪胎衣表面血渍洗净，按固液比1:3，浸泡于pH为6.5磷酸盐缓冲液中，并置于超声振荡器中，在30～35KHz下振荡30～40min，再进行过滤，使用蒸馏水冲洗过滤后的猪胎衣，直至冲洗液呈中性，随后置于70℃烘箱中干燥5～6h；再按质量比1:1～2，取甘草及上述干燥后的猪胎衣放入碾磨机中进行碾磨，过200目筛，将过筛颗粒与其质量1.0～1.2％胰蛋白酶放入酶解罐中，再加入过筛颗粒质量2～4倍的质量分数为5％碳酸氢铵溶液，设定温度为35～38℃，酶解4～6h；接着在上述酶解结束后将酶解罐中的酶解混合物移入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的55～65％，得浓缩液，按重量份数计，取45～55份浓缩液、28～32份胰蛋白胨、34～36份酵母浸膏、10～15份血粉、2～4份异丙基-β-D-硫代半乳糖苷、1～2份磷酸二氢钾及1.2～1.8份磷酸氢二钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基；再按接种量10～15％，将枯草芽孢杆菌接种至上述培养基中，并置于恒温箱中，设定温度为36～38℃，培养14～16h，待培养结束后将上述制备的培养基倒入玻璃发酵罐中，设定温度为37℃，以120r/min搅拌发酵，待发酵罐中发酵物颜色不变时，对发酵罐内的发酵混合物进行减压过滤，收集过滤液；最后将上述所得的过滤液与其质量16～23％山梨糖醇混合均匀，并放入紫外线下进行照射2～3h，再分别向其中加入过滤液质量0.9～1.2％乙二醇双（2-氨基乙基醚）四乙酸及过滤液质量30～40％氯化钙，搅拌均匀，并放入微波反应器中，在功率200～300W下反应4～6h，随后再加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集滤渣，并使用无菌水冲洗直至冲洗液呈中性，将滤渣冷冻干燥，即可得复合医用生物蛋白胶。实例1首先使用水将猪胎衣表面血渍洗净，按固液比1:3，浸泡于pH为6.5磷酸盐缓冲液中，并置于超声振荡器中，在30KHz下振荡30min，再进行过滤，使用蒸馏水冲洗过滤后的猪胎衣，直至冲洗液呈中性，随后置于70℃烘箱中干燥5h；再按质量比1:1，取甘草及上述干燥后的猪胎衣放入碾磨机中进行碾磨，过200目筛，将过筛颗粒与其质量1.0％胰蛋白酶放入酶解罐中，再加入过筛颗粒质量2倍的质量分数为5％碳酸氢铵溶液，设定温度为35℃，酶解4h；接着在上述酶解结束后将酶解罐中的酶解混合物移入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的55％，得浓缩液，按重量份数计，取45份浓缩液、28份胰蛋白胨、34份酵母浸膏、10份血粉、2份异丙基-β-D-硫代半乳糖苷、1份磷酸二氢钾及1.2份磷酸氢二钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基；再按接种量10％，将枯草芽孢杆菌接种至上述培养基中，并置于恒温箱中，设定温度为36℃，培养14h，待培养结束后将上述制备的培养基倒入玻璃发酵罐中，设定温度为37℃，以120r/min搅拌发酵，待发酵罐中发酵物颜本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复合医用生物蛋白胶的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）使用水将猪胎衣表面血渍洗净，按固液比1:3，浸泡于pH为6.5磷酸盐缓冲液中，并置于超声振荡器中，在30～35KHz下振荡30～40min，再进行过滤，使用蒸馏水冲洗过滤后的猪胎衣，直至冲洗液呈中性，随后置于70℃烘箱中干燥5～6h；（2）按质量比1:1～2，取甘草及上述干燥后的猪胎衣放入碾磨机中进行碾磨，过200目筛，将过筛颗粒与其质量1.0～1.2％胰蛋白酶放入酶解罐中，再加入过筛颗粒质量2～4倍的质量分数为5％碳酸氢铵溶液，设定温度为35～38℃，酶解4～6h；（3）在上述酶解结束后将酶解罐中的酶解混合物移入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的55～65％，得浓缩液，按重量份数计，取45～55份浓缩液、28～32份胰蛋白胨、34～36份酵母浸膏、10～15份血粉、2～4份异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷、1～2份磷酸二氢钾及1.2～1.8份磷酸氢二钾，搅拌均匀，并杀菌消毒，得培养基；（4）按接种量10～15％，将枯草芽孢杆菌接种至上述培养基中，并置于恒温箱中，设定温度为36～38℃，培养14～16h，待培养结束后将上述制备的培养基倒入玻璃发酵罐中，设定温度为37℃，以120r/min搅拌发酵，待发酵罐中发酵物颜色不变时，对发酵罐内的发酵混合物进行减压过滤，收集过滤液；（5）将上述所得的过滤液与其质量16～23％山梨糖醇混合均匀，并放入紫外线下进行照射2～3h，再分别向其中加入过滤液质量0.9～1.2％乙二醇双（2‑氨基乙基醚）四乙酸及过滤液质量30～40％氯化钙，搅拌均匀，并放入微波反应器中，在功率200～300W下反应4～6h，随后再加入无水乙醇直至无沉淀产生，过滤收集滤渣，并使用无菌水冲洗直至冲洗液呈中性，将滤渣冷冻干燥，即可得复合医用生物蛋白胶。...

【技术特征摘要】
1.一种复合医用生物蛋白胶的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）使用水将猪胎衣表面血渍洗净，按固液比1:3，浸泡于pH为6.5磷酸盐缓冲液中，并置于超声振荡器中，在30～35KHz下振荡30～40min，再进行过滤，使用蒸馏水冲洗过滤后的猪胎衣，直至冲洗液呈中性，随后置于70℃烘箱中干燥5～6h；（2）按质量比1:1～2，取甘草及上述干燥后的猪胎衣放入碾磨机中进行碾磨，过200目筛，将过筛颗粒与其质量1.0～1.2％胰蛋白酶放入酶解罐中，再加入过筛颗粒质量2～4倍的质量分数为5％碳酸氢铵溶液，设定温度为35～38℃，酶解4～6h；（3）在上述酶解结束后将酶解罐中的酶解混合物移入真空浓缩罐中，浓缩至原体积的55～65％，得浓缩液，按重量份数计，取45～55份浓缩液、28～32份胰蛋白胨、34～36份酵母浸膏、10～15份血粉、2～4份异丙基-β-D-硫代半...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈毅忠，盛海丰，宋奇，
申请(专利权)人：陈毅忠，
类型：发明
国别省市：江苏;32