一种肝素酶法合成方法技术

本发明专利技术公开的一种肝素酶法合成方法，包括以下步骤:原料清洗‑原料处理‑第一次酶解‑第二次酶解‑提取‑吸附‑洗脱‑沉淀‑干燥、酸化，通过合理调整制备方法，有效的提高了肝素钠的合成提取效率，进而肝素产量，减小了肝素钠活性损失，保证合成的肝素的品质和质量，而本发明专利技术的合成方法生产条件温和、环境友好、能耗低、效率高，降低肝素合成的成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及肝素的合成，特别是一种肝素酶法合成方法。
技术介绍
肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。临床上主要用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等。随着药理学及临床医学的进展，肝素的应用不断扩大。肝素首先从肝脏发现而得名，它也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中，是动物体内一种天然抗凝血物质。天然存在于肥大细胞，现在主要从牛肺或猪小肠黏膜提取。肝素是一种由葡萄糖胺，L-艾杜糖醛苷、N-乙酰葡萄糖胺和D-葡萄糖醛酸交替组成的黏多糖硫酸脂，平均分子量为15KD，呈强酸性，由于肝素本身不便于，多是以肝素钠的方式存储，需用时，将肝素钠酸化得到肝素。
技术实现思路
肝素制备主要是传统的化学裂解法工艺，普遍存在生产条件恶劣、耗能高、效率低的缺点，为改善这一现状，提高一种生产条件温和、环境友好、能耗低、效率高的肝素合成方法，降低肝素合成的成本，本专利技术公开了一种肝素酶法合成方法。为解决以上技术问题，本专利技术提供的技术方案是:一种肝素酶法合成方法，其特征在于，包含以下步骤：一、原料清洗：将猪肠用清水仔细清洗，去除内外污物和外部皮肤脂肪，得到洁净猪肠；二、原料处理：通过搅碎机将步骤一中得到的洁净猪肠绞碎成糜状，随后投入搅拌机中，进行搅拌，并同步加入水混合，搅拌时间控制在25~45分钟，最后继续搅拌，并缓慢加入防腐剂，混合均匀，得到酶解原料；三、第一次酶解：将步骤二中的酶解原料导入酶解罐中，并充分搅拌，同时加入新鲜胰浆作为酶解剂，并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3~8，在继续搅拌的同时，缓慢加热升温至40℃~42℃，直到搅拌均匀，随后酶解3~5小时，并保温，温度控制在40℃；四、第二次酶解：第一次酶解完成后，检测并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3~7.5，并加入按料液重量的0.5~1%的蛋白酶，充分搅拌的同时加热料液，温度控制在40℃~45℃，酶解4~4.2小时；五、提取：第二次酶解完成后，在40℃下恒温搅拌30分钟，随后急速升温至85℃~95℃，恒温10~15分钟，趁热捞除料液上层的杂质，最后用100目尼龙布精细过滤，得到酶解提取液。六、吸附；将步骤五中得到的酶解提取液冷却至室温，并去除酶解提取液表面的油脂后，放入吸附罐，控制升温至40℃~45℃，保持恒温，随后进行搅拌，并同时缓慢加入树脂，搅拌4~6小时，最后放出废液，收集吸附树脂；七、洗脱：先将吸附树脂用8倍于吸附树脂体积的清水充分漂洗，干净后，再用1~1.5倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第一次洗脱操作，洗脱4小时；随后用0.5~0.7倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第二次洗脱操作，洗脱2~2.5小时，最后滤干树脂，将第一次洗脱操作和第二次洗脱操作得到的洗脱液收集、合并；八、沉淀：将洗脱液过滤后倒入沉淀罐中，充分搅拌，在搅拌的同时逐步缓慢加入乙醇，并通过滴加0.4~0.7mol/L浓度的氢氧化钠溶液调节PH值至7.2~8.1，然后继续搅拌1~2小时，直至搅拌均匀，随后密封静置24-26小时，待料液沉淀，最后回收上层清液，收集下层沉淀物；九、干燥、酸化：将上述的下层沉淀物脱水后，烘干，得到肝素钠，将肝素钠以强酸酸化，加入不良溶剂后，取沉淀，烘干得到肝素。上述的一种肝素酶法合成方法，其中，所述猪肠为新鲜猪肠或自然解冻后的冷冻猪肠。上述的一种肝素酶法合成方法，其中，步骤二中，所述洁净猪肠、水和防腐剂的重量比为1：1.2~1.5：0.1~0.5（kg:kg:g），所述防腐剂为脱氢醋酸钠、D-异VC钠抗坏血酸中的一种或2种的混合物。上述的一种肝素酶法合成方法，其中，步骤六中，所述树脂为D204树脂、WD-1701树脂或D-254树脂中的一种，所述树脂与酶解提取液的重量比为1：40~50。上述的一种肝素酶法合成方法，其中，步骤七中，洗脱操作中使用的氯化钠溶液的浓度为1.2~1.5mol/L。上述的一种肝素酶法合成方法，其中，步骤八中，所述乙醇与洗脱液的质量比为2.5~3.7，乙醇的浓度为70%~75%。本专利技术的有益效果为：本专利技术公开的一种肝素酶法合成方法，包括以下步骤:原料清洗-原料处理-第一次酶解-第二次酶解-提取-吸附-洗脱-沉淀-干燥、酸化,通过合理调整制备方法，有效的提高了肝素钠的合成提取效率，进而肝素产量，减小了肝素钠活性损失，保证合成的肝素的品质和质量，而本专利技术的合成方法生产条件温和、环境友好、能耗低、效率高，降低肝素合成的成本。具体实施方式实施例一一种肝素酶法合成方法，其特征在于，包含以下步骤：一、原料清洗：将猪肠用清水仔细清洗，去除内外污物和外部皮肤脂肪，得到洁净猪肠；二、原料处理：通过搅碎机将步骤一中得到的洁净猪肠绞碎成糜状，随后投入搅拌机中，进行搅拌，并同步加入水混合，搅拌时间控制在35分钟，最后继续搅拌，并缓慢加入防腐剂，混合均匀，得到酶解原料；三、第一次酶解：将步骤二中的酶解原料导入酶解罐中，并充分搅拌，同时加入新鲜胰浆作为酶解剂，并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.5，在继续搅拌的同时，缓慢加热升温至41℃，直到搅拌均匀，随后酶解4.2小时，并保温，温度控制在40℃；四、第二次酶解：第一次酶解完成后，检测并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3，并加入按料液重量的0.8%的蛋白酶，充分搅拌的同时加热料液，温度控制在40℃，酶解4小时；五、提取：第二次酶解完成后，在40℃下恒温搅拌30分钟，随后急速升温至91℃，恒温12分钟，趁热捞除料液上层的杂质，最后用100目尼龙布精细过滤，得到酶解提取液。六、吸附；将步骤五中得到的酶解提取液冷却至室温，并去除酶解提取液表面的油脂后，放入吸附罐，控制升温至43℃，保持恒温，随后进行搅拌，并同时缓慢加入树脂，搅拌4.4小时，最后放出废液，收集吸附树脂；七、洗脱：先将吸附树脂用8倍于吸附树脂体积的清水充分漂洗，干净后，再用1.5倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第一次洗脱操作，洗脱4小时；随后用0.6倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第二次洗脱操作，洗脱2小时，最后滤干树脂，将第一次洗脱操作和第二次洗脱操作得到的洗脱液收集、合并；八、沉淀：将洗脱液过滤后倒入沉淀罐中，充分搅拌，在搅拌的同时逐步缓慢加入乙醇，并通过滴加0.5mol/L浓度的氢氧化钠溶液调节PH值至7.9，然后继续搅拌1.3小时，直至搅拌均匀，随后密封静置24小时，待料液沉淀，最后回收上层清液，收集下层沉淀物；九、干燥、酸化：将上述的下层沉淀物脱水后，烘干，得到肝素钠，将肝素钠以强酸酸化，加入不良溶剂后，取沉淀，烘干得到肝素。其中，所述猪肠为新鲜猪肠，步骤二中，所述洁净猪肠、水和防腐剂的重量比为1：1.3：0.4（kg:kg:g），所述防腐剂为D-异VC钠抗坏血酸，步骤六中，所述树脂为D204树脂，所述树脂与酶解提取液的重量比为1：44，步骤七中，洗脱操作中使用的氯化钠溶液的浓度为1.5mol/L，步骤八中，所述乙醇与洗脱液的质量比为3.5，乙醇的浓度为75%。实施例二一种肝素酶法合成方法，其特征在于本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肝素酶法合成方法，其特征在于，包含以下步骤：一、原料清洗：将猪肠用清水仔细清洗，去除内外污物和外部皮肤脂肪，得到洁净猪肠；二、原料处理：通过搅碎机将步骤一中得到的洁净猪肠绞碎成糜状，随后投入搅拌机中，进行搅拌，并同步加入水混合，搅拌时间控制在25~45分钟，最后继续搅拌，并缓慢加入防腐剂，混合均匀，得到酶解原料；三、第一次酶解：将步骤二中的酶解原料导入酶解罐中，并充分搅拌，同时加入新鲜胰浆作为酶解剂，并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3~8，在继续搅拌的同时，缓慢加热升温至40℃~42℃，直到搅拌均匀，随后酶解3~5小时，并保温，温度控制在40℃；四、第二次酶解：第一次酶解完成后，检测并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3~7.5，并加入按料液重量的0.5~1%的蛋白酶，充分搅拌的同时加热料液，温度控制在40℃~45℃，酶解4~4.2小时；五、提取：第二次酶解完成后，在40℃下恒温搅拌30分钟，随后急速升温至85℃~95℃，恒温10~15分钟，趁热捞除料液上层的杂质，最后用100目尼龙布精细过滤，得到酶解提取液。六、吸附；将步骤五中得到的酶解提取液冷却至室温，并去除酶解提取液表面的油脂后，放入吸附罐，控制升温至40℃~45℃，保持恒温，随后进行搅拌，并同时缓慢加入树脂，搅拌4~6小时，最后放出废液，收集吸附树脂；七、洗脱：先将吸附树脂用8倍于吸附树脂体积的清水充分漂洗，干净后，再用1~1.5倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第一次洗脱操作，洗脱4小时；随后用0.5~0.7倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第二次洗脱操作，洗脱2~2.5小时，最后滤干树脂，将第一次洗脱操作和第二次洗脱操作得到的洗脱液收集、合并；八、沉淀：将洗脱液过滤后倒入沉淀罐中，充分搅拌，在搅拌的同时逐步缓慢加入乙醇，并通过滴加0.4~0.7mol/L浓度的氢氧化钠溶液调节PH值至7.2~8.1，然后继续搅拌1~2小时，直至搅拌均匀，随后密封静置24‑26小时，待料液沉淀，最后回收上层清液，收集下层沉淀物；九、干燥、酸化：将上述的下层沉淀物脱水后，烘干，得到肝素钠，将肝素钠以强酸酸化，加入不良溶剂后，取沉淀，烘干得到肝素。...

【技术特征摘要】
1.一种肝素酶法合成方法，其特征在于，包含以下步骤：一、原料清洗：将猪肠用清水仔细清洗，去除内外污物和外部皮肤脂肪，得到洁净猪肠；二、原料处理：通过搅碎机将步骤一中得到的洁净猪肠绞碎成糜状，随后投入搅拌机中，进行搅拌，并同步加入水混合，搅拌时间控制在25~45分钟，最后继续搅拌，并缓慢加入防腐剂，混合均匀，得到酶解原料；三、第一次酶解：将步骤二中的酶解原料导入酶解罐中，并充分搅拌，同时加入新鲜胰浆作为酶解剂，并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3~8，在继续搅拌的同时，缓慢加热升温至40℃~42℃，直到搅拌均匀，随后酶解3~5小时，并保温，温度控制在40℃；四、第二次酶解：第一次酶解完成后，检测并通过滴加NaOH溶液，调节酶解罐内料液的PH值，将PH值控制在7.3~7.5，并加入按料液重量的0.5~1%的蛋白酶，充分搅拌的同时加热料液，温度控制在40℃~45℃，酶解4~4.2小时；五、提取：第二次酶解完成后，在40℃下恒温搅拌30分钟，随后急速升温至85℃~95℃，恒温10~15分钟，趁热捞除料液上层的杂质，最后用100目尼龙布精细过滤，得到酶解提取液。六、吸附；将步骤五中得到的酶解提取液冷却至室温，并去除酶解提取液表面的油脂后，放入吸附罐，控制升温至40℃~45℃，保持恒温，随后进行搅拌，并同时缓慢加入树脂，搅拌4~6小时，最后放出废液，收集吸附树脂；七、洗脱：先将吸附树脂用8倍于吸附树脂体积的清水充分漂洗，干净后，再用1~1.5倍于吸附树脂体积的氯化钠溶液对吸附树脂进行第一次洗脱操...

【专利技术属性】
技术研发人员：周贤轩，黄辉其，黄艳，
申请(专利权)人：江苏玺鑫维生素有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32