穿山龙药材的鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征为，所述方法包括以下步骤：(a)对被怀疑为穿龙薯蓣或野山药的试料的内部组织进行染色，或者测定薯蓣素含量；以及(b)通过所述染色的组织来辨别野山药和穿龙薯蓣，其中，周皮被染成红色，并且只由木栓层组成的为野山药；周皮被染成蓝色，并且由木栓层、木栓形成层及木栓皮层组成的为穿龙薯蓣，或者通过以所述试料的干燥重量(g)作为基准测定的薯蓣素的含量(mg)来辨别穿龙薯蓣或野山药。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种以穿山龙之名流通的穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，更详细地，涉及一种通过穿山龙流通品的形态鉴别及理化鉴别来鉴别穿龙薯蓣和野山药的方法。
技术介绍
穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Makino)作为在山区生长的多年生藤本植物，为茎横生、树枝稀疏的药用植物。根茎的特征为呈圆柱形，扎根多。叶子岔开，并呈宽的卵形或心形，长为7-15cm、宽为4-12cm，叶尖尖长，底部为心形。通常，叶子裂开成手掌形状，也有不裂开的，但是非常罕见。叶柄长，叶腋上没有珠芽。在7-8月，以雌雄异株的形式开花。雄花序直立，有时会分枝，雌花序下垂。果实为蒴果，呈宽椭圆形，具有3个翼。在韩国整个地区自生，并且分布于日本、中国，将根茎作为药用使用。另外，野山药(Dioscorea quinquelobata Thunb.)为多年生蔓草，具有粗而结实的根茎，并且结实的茎具有长长地延伸而向其它物体盘旋而上的特征。叶子互相岔开，整体为心形的叶片以5～9个分支裂开到中间，裂开的片的尖部尖，边缘是平平的。叶长为6～12cm，雌花和雄花分别在不同的株上开花。花都是以穗状开在从叶腋开始生长的花轴上，并下垂。雄花穗裂开成数条，但是雌花穗不裂开。竹管形的花的尖部裂开成6条。花的直径为4mm左右，颜色为草绿色。晒干的穿龙薯蓣的根茎称为穿山龙(Dioscorea Nipponica Rhizoma)，在中医上，不仅对风寒湿痹、关节的屈伸障碍、跌打损伤、痰、咳嗽及慢性气管炎有效，对类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis；RA)也有效果。并且，已知对心血管起作用而降低胆固醇和血压，并减慢
心跳，从而具有改善冠状动脉的循环的功效。目前，穿山龙记载在中国和朝鲜的药典中，公证书上的穿山龙的来源植物为穿龙薯蓣，但是不仅在韩国，在中国等也将穿山龙的正品的穿龙薯蓣和同属近缘种的野山药作为穿山龙使用。如此地，不区分近缘种而使用是因为没有关于鉴定它们的标准，虽然穿龙薯蓣和野山药在外形上有差异，但是以干燥并切断的状态流通，因此在流通过程中难以用外形差异来进行实质性的区分。因此，只有制定出穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法才能够正确的使用中药，但是目前为止，还没有制定出它们之间的正确的鉴别标准。即，如上所述，迫切需要作为鉴别药用植物的近缘种之间的差异的区分方法的穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，但是目前为止还是不尽如人意。作为对穿龙薯蓣和野山药的现有技术的一例，在中国公开专利第101791366号中公开有对于产地及药材的穿龙薯蓣的品质检查方法，韩国授权专利第0854621号中公开有一种薯蓣科植物的提取物及包含其的用于预防或治疗末梢神经疾病的组合物，韩国授权专利第0684434号中公开有包含野山药提取物的组合物，所述野山药提取物具有通过抑制抗氧化、脂质过氧化来实现的抗老化、抗炎症及祛痰活性，韩国授权专利第1332360号中公开有一种包含穿山龙提取物和微生物菌株的果实贮积病防治用组合物，但是没有报道关于简便区分穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法的技术。
技术实现思路
要解决的技术问题本专利技术是为了满足上述需求而提出的，本专利技术涉及一种穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，具体地，通过对被怀疑为穿龙薯蓣或野山药的试料的内部组织进行染色而进行形态学分析，并且，利用高效液相色谱法(HPLC)来测定试料中含有的薯蓣素(dioscin)的含量，并且
通过与标准品薯蓣素的比较来确认穿龙薯蓣和野山药中含有的薯蓣素含量的差异，从而完成了本专利技术。技术方案为了实现上述目的，本专利技术提供一种穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征为，所述方法包括以下步骤：(a)对被怀疑为穿龙薯蓣或野山药的试料的内部组织进行染色，或者测定薯蓣素含量；以及(b)通过所述染色的组织来辨别野山药和穿龙薯蓣，其中，周皮(periderm)被染成红色，并且只由木栓层(phellem)组成的为野山药；周皮被染成蓝色，并且由木栓层(phellem)、木栓形成层(phellogen)及木栓皮层(phelloderm)组成的为穿龙薯蓣，或者通过以所述试料的干燥重量(g)作为基准测定的薯蓣素的含量(mg)来辨别穿龙薯蓣或野山药。另外，本专利技术提供一种穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征为，所述方法包括以下步骤：(a)对被怀疑为穿龙薯蓣或野山药的试料的内部组织进行染色；以及(b)通过所述染色的组织来辨别野山药和穿龙薯蓣，其中，周皮被染成红色，并且只由木栓层组成的为野山药；周皮被染成蓝色，并且由木栓层、木栓形成层及木栓皮层组成的为穿龙薯蓣。并且，本专利技术提供一种穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征为，所述方法包括以下步骤：(a)测定被怀疑为穿龙薯蓣或野山药的试料中含有的薯蓣素的含量；以及(b)通过以所述试料的干燥重量(g)作为基准测定的薯蓣素的含量(mg)来辨别穿龙薯蓣或野山药。有益效果本专利技术具有既简便又迅速准确、重复性地区别难以用肉眼难以区分的穿龙薯蓣和作为近缘种的野山药的效果。另外，具有利用本专利技术的鉴别方法来对混用的穿山龙进行准确的质量管理(QC)的优点。尤其是对于穿山龙来说，在类风湿关节炎
(等的功能性口服药品开发中，有助于提供经过严格质量管理的物质，并且，本专利技术的鉴别方法对用于鉴别因类似近缘种或韩国产或外国产等的产地而具有的差异的技术有所帮助。附图说明图1为用番红(safranine)和固绿(fast-green)对穿龙薯蓣、野山药、薯蓣及穿山龙流通品的地下茎横截面进行双重染色的图像。1和2为野山药；3和4为穿龙薯蓣；5和10为CM1(野山药)；6和11为CM2(穿龙薯蓣)；7和12为CM3(穿龙薯蓣)；8和13为CM4(野山药)；9和14为CM5(穿龙薯蓣)；15和20为穿龙薯蓣(中国流通品1)；6和21为穿龙薯蓣(中国流通品2)；17和22为薯蓣；18和23为薯蓣(中国流通品)；19和24为薯蓣(韩国流通品)。1、3、5至9及15至19为周皮和皮层(cortex)，2、4、10至14及20至24为维管束(vascular bundle)。(pr：周皮，pe：木栓层，pg：木栓形成层，pd：木栓皮层，xy：木质部(xylem)，ph：筛管部(phloem)，sg：淀粉粒(starch grain)，rc：针晶体(raphide crystal)，id：异形细胞(idioblasts)，la：乳汁管(laticifer)Bar＝100μm)图2为用高效液相色谱法对穿龙薯蓣进行分析的结果。(A)为标准品薯蓣素，(B)至(D)为以相同条件提取的穿山龙流通品(穿龙薯蓣)提取液(20μl)的分离结果。图3为用高效液相色谱法对野山药进行分析的结果。(A)为标准品薯蓣素，(B)及(C)为以相同条件提取的穿山龙流通品(野山药)提取液(20μl)的分离结果。图4为用高效液相色谱分析对中国及韩国流通品薯蓣(山药)和中国流通品穿山龙(穿龙薯蓣)进行分析的结果。(A)及(B)为注入20μl的中国流通品薯蓣(山药)的提取液(40mg/ml)，并进行分析的结果，(C)及(D)为注入20μl的韩国流通品薯蓣(山药)的
提取液(40mg/ml)，并进行分析的结果，(E)及(F)为注入20μl的中国流通品穿山龙(穿龙薯蓣)的提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)对被怀疑为穿龙薯蓣或野山药的试料的内部组织进行染色，或者测定薯蓣素含量；以及(b)通过所述染色的组织来辨别野山药和穿龙薯蓣，其中，周皮被染成红色，并且只由木栓层组成的为野山药；周皮被染成蓝色，并且由木栓层、木栓形成层及木栓皮层组成的为穿龙薯蓣，或者通过以所述试料的干燥重量(g)作为基准测定的薯蓣素的含量(mg)来辨别穿龙薯蓣或野山药。

【技术特征摘要】
2015.03.27 KR 10-2015-00433931.一种穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)对被怀疑为穿龙薯蓣或野山药的试料的内部组织进行染色，或者测定薯蓣素含量；以及(b)通过所述染色的组织来辨别野山药和穿龙薯蓣，其中，周皮被染成红色，并且只由木栓层组成的为野山药；周皮被染成蓝色，并且由木栓层、木栓形成层及木栓皮层组成的为穿龙薯蓣，或者通过以所述试料的干燥重量(g)作为基准测定的薯蓣素的含量(mg)来辨别穿龙薯蓣或野山药。2.一种穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(a)对被怀疑为穿龙薯蓣或野山药的试料的内部组织进行染色；以及(b)通过所述染色的组织来辨别野山药和穿龙薯蓣，其中，周皮被染成红色，并且只由木栓层组成的为野山药；周皮被染成蓝色，并且由木栓层、木栓形成层及木栓皮层组成的为穿龙薯蓣。3.根据权利要求2所述的穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征在于，所述染色是用番红和固绿染色剂来进行的双重染色。4.根据权利要求2所述的穿龙薯蓣和野山药的鉴别方法，其特征在于，被怀疑为所述穿龙薯蓣或野山药的试料在进行染色之前通过以下步骤来制得：(a)干燥并切断后，在沸水中进行预处理8至15分钟；(b)所述步骤(a)之后，用10％、20％、35％、50％、75％及100％的硫代巴比土酸依次进行处理，从而对组织进行脱水；(c)对经过所述步骤(b)脱水的组织进行石蜡包埋；(d)将所述包埋的组织切断成10～20μm的厚度，并且利用白蛋
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【专利技术属性】
技术研发人员：姜泳泯，金东善，崔高也，梁善圭，
申请(专利权)人：韩国韩医学研究院，
类型：发明
国别省市：韩国;KR