树兰蒴果60Co-γ射线辐射诱变方法技术

本发明专利技术公开了一种树兰蒴果60Co‑γ射线辐射诱变方法，选择树兰属的树兰种子，确定培养基和培养条件，分组用60Co‑γ射线进行辐射处理后，统计确定半致死剂量LD50，并用相关软件拟合为直线方程；将种子萌发的原球茎接入分化培养基中，培养分化出再生植株，120d后调查再生植株分化的情况及形态学指标，分析不同剂量辐射组与对照组的差异。在组织培养条件下利用60Co‑γ进行诱变处理，观察不同辐射剂量对树兰种子的诱变效应，确定适宜辐射剂量。建立树兰蒴果60Co‑γ射线辐射诱变育种技术，为其辐射诱变育种适宜剂量的选择和确定提供依据，并选育获得新品种。方便取材、可以降低污染率、节约时间成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种树兰蒴果的辐射诱变技术，尤其涉及一种树兰蒴果60Co-γ射线辐射诱变方法。
技术介绍
辐射诱变又称物理诱变，利用辐射诱变技术进行育种工作是目前育种领域所常用且效率较高的技术，主要是指用一定剂量的射线辐射处理材料，从而诱发材料发生突变，引发变异(基因的突变或染色体的畸变)，进而经筛选、测定、选择，最终从突变体中选育出对科研或生产上有可利用价值新品种的育种过程[1]。目前，在辐射诱变研究中，常用的辐射源包括：γ和X射线、中子、电子束、离子束等,此外还包括非电离辐射(紫外线和激光)，这些辐射源能够获得有利用价值的突变体，其中最常用的射线主要是γ射线[2]。γ射线作为一种物理诱变射线，其辐射源为60Co和137Cs，在育种工作中具有辐射条件易于控制、效果显著等优点。此外，γ射线是一种中性射线，穿透能力较强，辐射剂量均匀且一次能够处理大量的材料，是辐射育种的首选，本试验即使用60Co-γ射线用于材料的辐射源。近年来，国内外在辐射诱变领域不断尝试新的技术、方法等，并取得了巨大的成就，辐射诱变不仅在辐射效应研究中举足轻重，也在新品种选育方面广泛应用。辐射诱变育种相比其它的几种育种方法(杂交育种、基因工程育种等)具有的优势有：突变率较高、变异的范围较大、变异谱较广等；此外，射线的辐射能够打破基因的连锁进而能够提高基因的重组率；在保持品种优良性状上还具有较稳定、速度快等特点，大大缩短了育种的周期。树兰(Epidendrum secundum)属兰科(Orchidaceae)树兰属。树兰属植物原产于美洲大陆的热带和亚热带地区，有超过1125种。根据生活习性，有附生、地生和岩生，多分布于安第斯山脉海拔1000～3000m的区域。树兰花色鲜艳花型优美，易于种植，在温室中可常年开花。开展树兰育种工作，为丰富兰花种质资源，发展我国的兰花产业具有重要的意义。目前，树兰育种研究工作甚少。诱变育种已成为花卉育种的主要手段，为花卉育种提供了全新的思路，展现出广阔的前景。辐射诱变育种在我国兰科植物育种中有所应用，但在树兰属植物中的应用尚未
见报道。且在兰科植物的辐射诱变中，多数学者选择根状茎、类原球茎、试管苗的完整植株或无根苗等作为辐射材料，尚未出现使用完整蒴果进行60Co-γ射线辐射处理的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种萌发率高、方便取材、可以降低污染率、节约时间成本的树兰蒴果60Co-γ射线辐射诱变方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：本专利技术的树兰蒴果60Co-γ射线辐射诱变方法，选择树兰蒴果，包括步骤：A、培养基和培养条件：用于胚的萌发实验的培养基：MS、1/2MS、1/4MS；种子萌发培养基：1/2MS；原球茎分化培养基：MS；原球茎繁殖培养基：花寳1号改良培养基；以上培养基pH 5.8-6.0，121℃恒温灭菌20min，培养条件为温度24(±2)℃、光照强度1600-2000lx、光照时间为14h/d；B、辐射处理：取同一植株上花期一致、授粉时间一致、长势一致的树兰蒴果为试验材料，分组用60Co-γ射线进行辐射处理；辐射处理后树兰蒴果的处理如下：使用蘸有75％酒精的棉球轻轻擦拭外果皮3遍；移入超净工作台后，再用同样的方法擦拭3遍；将消毒后的材料播入无菌三角瓶中，加入无菌水并加入一滴吐温80制成100ml均匀的悬浮液，再用移液枪吸取约700μl，播入1/2MS培养基中，每个剂量处理有4组，每组为5瓶。用血球计数板法统计各剂量悬浮液的种子密度，每个剂量10次重复；C、统计萌发时间、萌发率及相对成活率：观察统计每个剂量处理开始萌发的时间及60天内的萌发种子数：计算种子的萌发率和相对成活率，萌发率＝萌发的个数/接种的个数×100％；相对成活率＝萌发率/对照萌发率×100％。D、半致死剂量的确定：确定半致死剂量LD50：以辐射剂量作为自变量x，不同剂量辐射后种子的相对成活率y作为因变量，应用直线回归方程y＝a+bx和下式(1)、(2)来计算60Co-γ射线对树兰种子的半致死剂量LD50； b = Σ x y - Σ x · Σ y N Σx 2 - ( Σ x ) 2 N ]]> a = Σ y - b · Σ x N ]]> x = 50 - a b - - - ( 1 ) ; ]]>式中：a是常数，b是回归系数，x是半致死量；相关系数公式： r = Σ x y - Σ x · Σ y N [ Σx 2 - ( Σ x ) 2 N ] [ Σy 2 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种树兰蒴果60Co‑γ射线辐射诱变方法，其特征在于，选择树兰属的树兰蒴果，包括步骤：A、培养基和培养条件：用于胚的萌发实验的培养基：MS、1/2MS、1/4MS；种子萌发培养基：1/2MS；原球茎分化培养基：MS；原球茎繁殖培养基：花寳1号改良培养基；以上培养基pH 5.8‑6.0，121℃恒温灭菌20min，培养条件为温度24(±2)℃、光照强度1600‑2000lx、光照时间为14h/d；B、辐射处理：取同一植株上花期一致、授粉时间一致、长势一致的树兰蒴果为试验材料，分组用60Co‑γ射线进行辐射处理；辐射处理后树兰种子的处理如下：使用蘸有75％酒精的棉球轻轻擦拭外果皮3遍；移入超净工作台后，再用同样的方法擦拭3遍；将消毒后的材料播入无菌三角瓶中，加入无菌水并加入一滴吐温80制成100ml均匀的悬浮液，再用移液枪吸取约700μl，播入1/2MS培养基中，每个剂量处理有4组，每组为5瓶。用血球计数板法统计各剂量悬浮液的种子密度，每个剂量10次重复；C、统计萌发时间、萌发率及相对成活率：观察统计每个剂量处理开始萌发的时间及60天内的萌发种子数：计算种子的萌发率和相对成活率，萌发率＝萌发的个数/接种的个数×100％；相对成活率＝萌发率/对照萌发率×100％。D、半致死剂量的确定：确定半致死剂量LD50：以辐射剂量作为自变量x，不同剂量辐射后种子的相对成活率y作为因变量，应用直线回归方程y＝a+bx和下式(1)、(2)来计算60Co‑γ射线对树兰种子的半致死剂量LD50；b=Σxy-Σx·ΣyNΣx2-(Σx)2N]]>a=Σy-b·ΣxN]]>x=50-ab---(1);]]>式中：a是常数，b是回归系数，x是半致死量；相关系数公式：r=Σxy-Σx·ΣyN[Σx2-(Σx)2N][Σy2-(Σy)2N]---(2);]]>利用上述公式计算相对萌发率与辐射剂量之间的相关系数，使用相关软件拟合为直线方程；E、辐射处理对树兰再生植株产生的辐射效应：将萌发的原球茎接入分化培养基中，培养分化出再生植株，120d后调查再生植株分化的情况及形态学指标，包括叶宽、叶长、叶片数、株高，比较不同剂量辐射组与对照组的差异；F、数据处理与统计方法：利用Excel软件、SPSS 22.0软件、DPS软件对试验数据绘制图表、方差分析、相关分析、回归分析及Duncan多重比较。...

【技术特征摘要】
1.一种树兰蒴果60Co-γ射线辐射诱变方法，其特征在于，选择树兰属的树兰蒴果，包括步骤：A、培养基和培养条件：用于胚的萌发实验的培养基：MS、1/2MS、1/4MS；种子萌发培养基：1/2MS；原球茎分化培养基：MS；原球茎繁殖培养基：花寳1号改良培养基；以上培养基pH 5.8-6.0，121℃恒温灭菌20min，培养条件为温度24(±2)℃、光照强度1600-2000lx、光照时间为14h/d；B、辐射处理：取同一植株上花期一致、授粉时间一致、长势一致的树兰蒴果为试验材料，分组用60Co-γ射线进行辐射处理；辐射处理后树兰种子的处理如下：使用蘸有75％酒精的棉球轻轻擦拭外果皮3遍；移入超净工作台后，再用同样的方法擦拭3遍；将消毒后的材料播入无菌三角瓶中，加入无菌水并加入一滴吐温80制成100ml均匀的悬浮液，再用移液枪吸取约700μl，播入1/2MS培养基中，每个剂量处理有4组，每组为5瓶。用血球计数板法统计各剂量悬浮液的种子密度，每个剂量10次重复；C、统计萌发时间、萌发率及相对成活率：观察统计每个剂量处理开始萌发的时间及60天内的萌发种子数：计算种子的萌发率和相对成活率，萌发率＝萌发的个数/接种的个数×100％；相对成活率＝萌发率/对照萌发率×100％。D、半致死剂量的确定：确定半致死剂量LD50：以辐射剂量作为自变量x，不同剂量辐射后种子的相对成活率y作为因变量，应用直线回归方程y＝a+bx和下式(1)、(2)来计算60Co-γ射线对树兰种子的半致死剂量LD50； b = Σ x y - Σ x · Σ y N Σx 2 - ( Σ x ) 2 N ]]> a = Σ y - b · Σ x N ]]> x = 5...

【专利技术属性】
技术研发人员：李潞滨，刘蕾，周雅倩，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院林业研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11